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        蛋白质电泳-在蛋白质组学中的应用

        互联网

        2772

        原 理

        蛋白质分子在溶液中由于其末端氨基、末端羧基及侧链的游离基团而成为带电颗粒,并可在电场内移动,其移动方向取决于蛋白质分子所带静电荷。不同蛋白质分子根据其氨基酸组成及所在溶液的pH值,携带的静电荷不尽相同,致使它们在电场中的迁移率各异,从而达到分理的目的。

        在蛋白质组学中对电泳的分类

        一维电泳(one dimensional gel electrophoresis, 1DE),现在普遍采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
        二维电泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2DE),又称双向电泳

        一维电泳

        现在普遍采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),包括非变性电泳(native PAGE)和SDS-PAGE两种,前者主要是在分离蛋白复合物时经常用到。后者是在凝胶与缓冲系统中加入阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS),蛋白质分子被大量SDS阴离子包裹,消除了它们间原来携带的电荷差别,因而其迁移率仅反映蛋白质分子大小,故广泛用于蛋白质分子量的测定。

        缓冲液的选择

        通常在SDS-PAGE均选择Tris-glycine作为电泳的缓冲系统。但在大部分缓冲系统中,SDS微团(micelle)会干扰小分子蛋白质的分离,而Tris-tricine系统则可使小蛋白质-SDS复合物与微团分离,去除干扰。此外,也证明该系统对脂多糖和脂寡糖混合物的分离有效。

        12%胶常用的低分子量标准蛋白

        名称
        来源
        分子量
        磷酸化酶B
        兔肌肉
        97400
        牛血清白蛋白
        66200
        卵清蛋白
        鸡蛋清
        45000
        碳酸酐酶
        31000
        胰蛋白酶抑制剂
        大豆
        21500
        溶菌酶
        鸡蛋清
        14400

        一维凝胶染色

        现在用于凝胶中蛋白染色的方法包括氨基黑10、考马斯亮蓝R250、考马斯亮蓝R350、银染、铜染及橙染(sypro orange)。最常用的为考马斯亮蓝R250、考马斯亮蓝R350染色,为了提高灵明度采用银染。

        一维电泳的应用

        初步测定蛋白质的分子量

        初步分离蛋白质复合物,并进一步用于免疫组化分析

        对重组表达蛋白的初步鉴定

        将一维电泳和生物质谱相结合,达到对较简单蛋白复合物的分离和鉴定

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