流式细胞术

Q:我想用流式细胞术测血浆中的内皮源性微粒，已购买荧光标记的抗体（PE ANTI -CD144)已文献证实这种微粒表面表达CD144，且具有特异性。但我们检测了两次均无特异性，不知道是否标本处理有问题。 A:EMP: CD31、CD42 Q:抗体已经买了，我们还是想用CD144做，据说CD144特异标记内皮源性微粒（EMP).你们有过用CD31.CD42标记的经验吗？你的标本是怎麽处理的？对流式细 ...

各种血液细胞及血管内皮细胞受到刺激而活化或发生凋亡后，细胞膜磷脂酰丝氨酸由胞膜内层进入外层，以出芽方式形成小泡状结构而脱落，形成所谓的“微粒(microparticle，MP)”。正常人体血液中即存在少量MP，而在许多疾病中MP水平明显升高。MP具有促进血液凝固反应发生与血栓形成等多种重要生物学活性。越来越多的研究提示，检测血液MP水平与性质有助于监测病情、指导治疗与疗效判 ...

Q:构建了载体表达目的基因+GFP的融合蛋白(用的是PEGFP-N1)转染48小时后处理细胞百分之七十乙醇固定过夜PI单染上流式测周期!由于转染效率太低通过了流式设门分别圈出了阴性和阳性细胞再分别测其CELL周期变化!!!!结果如附图!!有几个问题想和大家一起讨论一下:1在一些SCI文献中报道通过MTT法此目的基因表达促进一些细胞(非我用的细胞系我用的转染CELL之前没有报道!)增殖但是从周期图来 ...

Q：石蜡切片能用于做流式吗 A：石蜡包埋组织流式细胞仪DNA含量分析是石蜡包埋组织切片与流式细胞术（flow cytometry，FCM）结合使用来测量DNA含量及倍体分析，这一结合是流式细胞仪在临床应用中，特别是在肿瘤研究方面开拓了新的研究途径。FCM是激光、电子和电子计算机、流体喷射技术的综合发展应用，是快速定量分析细胞的技术，要求被检细胞呈悬浮状态。目前已可测量细胞的大小、体积、DNA含量、 ...

请帮忙分析一下第一张是未转染的第12代，第二章是转染后的第22代。能说明转染后的细胞增值能力强了吗，怎么看出来的。 第一张图：增值率S（合成期）＋G2/M（合成后期/分裂期）：21.7％第二张图：增值率S（合成期）＋G2/M（合成后期/分裂期）：19.6％据此分析两者的增值没有明显的差别。虽然第二张图比第一张图的S期有所增高，但G2期下降了。细胞周期是基于细胞处于不同分裂时期具有不同的DNA含量而 ...

Q：准备用FITC，PE和APC进行三标，检测三标细胞占待检测细胞的百分比。预实验摸抗体浓度时，用单标管与相应的同型对照管比较，在二维散点图上，发现部分指标除在检测通道上偏移，在无关通道上散点也有偏移，我想这就应该是补偿需要做的事情了吧。根据预实验的结果，我发现荧光的部分干扰现象，如PE检测影响APC和FITC，FITC影响APC，而APC不影响PE和FITC等。我的问题：1，很奇怪的是FITC和 ...

血小板在各种诱导剂作用下释放其颗粒内容物，产生生物学效应，在初期止血过程中发生粘附-变形-释放-聚集等反应，这些血小板的基本反应，统称为血小板活化反应。血小板活化的检测对血小板相关疾病的诊断有重要价值。然而，检测的方法常常是有争议的，通常是由于方法本身不完善或应用不当导致医源性血小板激活，影响临床诊断的价值。这就要求建立一种灵敏、精确、快速、简便，最好可用于临床常规检测血小板活化的方法。近几年来， ...

Fluo-3-Am为一新型的高度特异性Ca2+荧光指示剂，可以灵敏地反映细胞内游离钙离子浓度的变化， Fluo-3-Am进入细胞后经非特异性酯酶脱去Am酯，成为脂溶的Fluo-3留在细胞内，当Fluo-3与细胞内游离 钙结合后，其荧光强度是Fluo-3本身的40倍以上，当用480nm波长激发时，其荧光强度与游离钙离子 浓度成正比.具体如下，① 钙荧光探针负载；取细胞悬液，加Fluo-3-Am至 ...

钙离子是机体的重要元素，同时作为细胞内第二信使通过与钙调蛋白（Calmodulin，CaM）结合激活多种蛋白激酶（如腺苷酸环化酶、磷酸二酯酶、钙调蛋白激酶等）及诸多蛋白水解酶和核酸酶，从而参与包括细胞代谢、细胞周期等多种细胞功能的调节，在细胞的许多生命活动中担当着重要的角色。因此，钙离子测定在医学实验研究中有着重要意义。 　　钙离子测定技术得益于两种近代实验技术，一是钙激活蛋白及荧光指示剂（或称荧 ...

由于可溶性MHC单体分子与TCR的亲和力很低，解离快，而多价分子可与一个特异性T细胞上的多个TCR结合，使其解离速度大大减慢。为此Altman等提出借助生物素—亲和素级联反应放大原理构建MHC I类分子四聚体。该方法通过基因工程技术把长度为15个氨基酸残基的生物素酶底物肽(Bio A substrate peptide，BSP)加在MHCI类分子如HLA-A2重链的羧基端形成融合蛋白， ...

细胞凋亡的检测方法，从大类上还可以分为早期检测、晚期检测和mRNA水平的检测。1． 早期检测: 1） PS（磷脂酰丝氨酸）在细胞外膜上的检测2）细胞内氧化还原状态改变的检测3）细胞色素C的定位检测4） 线粒体膜电位变化的检测 2． 晚期检测：1） TUNEL2） LM-PCR Ladder （连接介导的PCR检测）　　当凋亡细胞比例较小以及检测样品量很少（如活体组织切片）时，直接琼脂糖电泳可能观 ...

线粒体跨膜电位DYmt的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体DYmt崩溃，则细胞凋亡不可逆转。　　线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3，3-Dihexyloxacarbocyanine iodide、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol c ...

（一） 测原理 细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间。利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪测量细胞悬液中荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。 （二） 用价值 流式细胞仪检测有下列特点：（1）检测的细胞数量大，因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确；（2）可用许多相关分析；（3）结合被测细胞DNA含量分析，可确定凋亡的细胞 ...

细胞凋亡的检测方法，从大类上还可以分为早期检测、晚期检测和mRNA水平的检测。1． 早期检测: 1） PS（磷脂酰丝氨酸）在细胞外膜上的检测2）细胞内氧化还原状态改变的检测3）细胞色素C的定位检测4） 线粒体膜电位变化的检测2． 晚期检测：1） TUNEL2） LM-PCR Ladder （连接介导的PCR检测）　　当凋亡细胞比例较小以及检测样品量很少（如活体组织切片）时，直接琼 ...

一、流式细胞术常规检测时的样品制备 (一)直接免疫荧光标记法 取一定量细胞(约1X106细胞／ml)，在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上()再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，。孵育20-60分钟后，用PBS(pH7．2—7．4)洗1-2次， ...

通常我们在分析流式结果的时候更多的是去分析细胞群体的比例“%Gated”，还有一个比较重要的一个统计参数是“平均荧光强度”，细胞群体的平均荧光强度分为几何平均荧光强度与算术平均荧光强度，各自都有着比较重要的意义。根据需要我查询了相关的资料，详细的讲解了这两个衡量参数的意义与在分析中起到的作用，供大家参考，若有更好的看法，希望不吝赐教。Means(平均 ...

血栓性疾病、出血性疾病、心血管疾病以及自身免疫性血小板减少症等疾病的病生理过程与血小板相关。血小板功能检测包括黏附、聚集和活化功能试验。使用流式细胞仪检测全血中血小板表面相关标志物是一种新技术，它拓宽了血小板相关疾病的诊断与功能研究方法，丰富了血小板功能评估指标。 流式细胞仪血小板分析应用范围 通过分析信号传递、细胞骨架结构、颗粒释放、糖蛋白构形、膜磷脂、与抗凝因子的结合和微粒形成， ...

一、简介 随着研究的进展，仅仅对细胞进行定量和活性的检测已不能满足需要。在单细胞水平研究细胞因子的表达能力对研究细胞因子在疾病中的作用越来越显的重要无比。目前检测单个细胞特定细胞因子的表达手段包括：ELIspot、原位杂交、免疫细胞化学、限制性稀释分析（limiting dilution analysis，LDA）和单细胞PCR，应用原位杂交技术和免疫组化方法观察细胞因子蛋白表达及mRNA表达可以 ...

基本原理　　其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性，主要包括以下几个方面：1. 细胞核的改变：由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。研究表明，用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色，其DNA可染性降低。许多学者把这种D ...

基本原理　　经固定的凋亡细胞其染色体荧光染料的DNA可染性性下降。细胞一经固定就不再是活细胞，而且细胞固定过程对细胞膜的通透性也有影响。因此发展了用“细胞活性”鉴定染料染色的流式细胞仪检测方法。这些方法细胞不经固定就直接用DNA染料染色，且染料的浓度要比固定细胞所用的浓度要低得多。流式细胞仪通常根据细胞膜完整性将细胞分为“活细胞”和“死细 ...