原代培养

以下是根据NIH老年病研究所提供的英文的R1胚胎干细胞培养protocol整理而成。根据经验作部分修改。 1、一般培养：保持胚胎干细胞处于未分化状态 培养基细胞复苏冻存细胞明胶包被&n ...

Passaging cells Pour out media from flasks. Wash with Hanks. 5 ml per flask. Tilt around then dump. Add 4 ml of Trypsin / EDTA to each flask. Tip then bang. Add 20% FBS NCTC media and tilt. 4 ml p ...

Materials Chick embryo (approximately 8 days old) 70% (v/v) ethanol for swabbing Sterile scissors forceps and probes Sterile petri plates Phosphate buffered saline (PBS) Trypsin cold sterilized in a 1 ...

Whole mount staining. The protocol given uses a single primary antibody with nuclear counterstaining but it can be extended to double antibody staining. It requires an inverted microscope with fluores ...

1.Basic Techniques - The 'Do's and Don'ts' of Cell Culture Given below are a few of the essential "do's and don'ts" of cell culture. Some of these are mandatory e.g. use of personal protecti ...

Introduction A major advance in our knowledge of cells came about with the ability to maintain them in continous culture. Prokaryotes have been cultured for a relatively long time but eukaryotic cultu ...

Materials Fibroblast cells in log phase growth Ca Mg free-phosphate buffered saline (PBSA) 5% (w/v) Glutaraldehyde (GTA) 2% (w/v) Perchloric Acid (PCA) Subbed slides (coated with chrom alum gelatin) a ...

巨噬细胞原代培养方法及步骤。

原代神经细胞培养试验方法及步骤。

神经细胞（神经元）不易培养，只有在适宜情况下，如接种在胶原底层上，或加入神经生长因子和胶质细胞因子时，可出现一定程度的分化，长出突起等现象，但很难使之增殖。而神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。 人、鼠等脑组织即可用于神经胶质细胞培养，不仅能获得生长的胶质细胞，也可形成能传代的二倍体细胞系。

内皮细胞易于从大血管分离培养成单层细胞，对于研究内皮细胞再生、肿瘤促血管生长因子（tumor angiogenesis factor，TAF）等有很大价值。 以人脐带静脉灌流消化法为例说明培养方法及步骤。

1. 液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？ 要冷藏！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的pH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月 ~ 一年。 2. 液体培养基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。 几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长 ...

无菌操作基本技术 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无 ...

Materials Castor beans Gradient former Sucrose solutions in 0.01 M EDTA pH 7.5 33% 44% 50% 57% 60% (w/v) ...

Materials Table2 Density and refractive indexes of sucrose Table1 Densities of cell structures in sucrose Sucrose density fractions from Exercise “Sucrose Fractionation of Castor Bean&rd ...

Materials Ultracentrifuge and swinging bucket rotor Percoll NaCl solutions with the following osmolarities:200 300 and 400 mill ...

Materials Sepracell-MN tubes Clinical centrifuge with fixed angle rotor Phase contrast microscope Whole Blood Phosphate Buffered Saline (PBS) + 0.1% (w/v) Bovine Serum ...

It is possible to combine variations in density and size to allow for separation of cell populations within the earth's gravitational field i.e. without a centrifuge. A technique devised by Miller and ...

细胞计数 实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作：一.准备工作： 取一瓶传代的细胞，按照《传代细胞培养（消化法）》中的传代方法繁殖细胞，待长成单层后以被使用。 二.细胞悬液制备：细胞悬液的制备方法是用0.25％的胰蛋白酶液消化、PB ...

个别组织细胞的培养 体内组织细胞在体外培养时，所需培养环境基本相似，但由于物种、个体遗传背景及所处发育阶段等的不同，各自要求条件有一定差别，所采取的培养技术措施亦不尽相同，现介绍个别组织细胞培养的要点如下: 一、上皮细胞培养 上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分，又由于癌起源于上皮组织，故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞，培养时生长速度往往超过上皮细胞 ...