原代培养

1、冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。 2、细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？ 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应 ...

1、二倍体细胞培养法 二倍体细胞培养法与一般培养相同，关键在于传代，其传代程序为： （1）吸除旧培养液注入另瓶中。 （2）用温BSS冲洗1次。 （3）用0.25%温胰蛋白酶消化，加入消化液量以仅覆盖细胞层即可；作用1~5分钟。 （4）待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大，便终止消化。为防止细胞丢失，可不必再用BSS冲洗，直接向瓶中加入培养液（新旧培养液按2：1新旧混合）。 （5）轻轻反复吹打制 ...

1、初代消化培养法 （1）准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 （2）布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 （3）处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 （4）剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~5 ...

问：大鼠卵巢颗粒细胞的分离方法？ 答：大鼠颗粒细胞的分离方法一：分离23天的SD大鼠，皮下注射DES（2.5 mg/只），连续三天。于最后一次注射24h后，颈椎脱臼处死动物。无菌收集两侧的卵巢，置于盛有PBS的EP管中清洗。将PBS清洗的卵巢放在盛有培养基的平皿中，在体视显微镜下，用25号针头刺破卵泡，释放出颗粒细胞。后吸取平皿中的细胞悬液，镜下计数，接种细胞。培养基（McCoy's 5A Med ...

肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。 一、组织培养肿瘤细胞生物学特性 肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿 ...

一、原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 二、仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：胎鼠或新生鼠 试剂：1640培养基（含20 ...

1、细胞（组织）培养年鉴 1878 Claude Bernard:证明一个器官的生理系统在个体死亡以后仍然可以人工维持。 1885 Wilhelm Roux:在一个生理溶液中维持一快鸡胚的活性并观察其发育，从而证实该发育与鸡胚的其他部分无关。 1887 Ross Harrison:利用凝固的青蛙淋巴液作为培养基，在体外培养青蛙神经嵴，维持其活性达数星期，并观察到了神经纤维的生长，从解决了神经纤维的 ...

每当心情不好的时候细胞总是长不好，原来凡是有生命的东西都是要用心对待的。 对它随意的吹打，心不在焉的换液，不准确控制时间的消化，不经意的摆放，它都能感受到并反映到细胞的性态上。一直抱怨细胞不好，而没仔细想自己是以怎样的心情在对待它，上清里的悬浮物就是自己杂念的反映，细胞变得松散，没有透光性，甚至污染都是由自己的不用心造成的。 那些死去的细胞的残骸浮散在整个细胞瓶里，尚存的在死亡边缘挣扎的细胞不断垂 ...

我是做临床的，07年毕业。 06年完成老板的RNA干扰体内体外课题，实验花了7个月，大家都说我神速，我也觉得也是快了些，呵呵，看到其他同学忙得没结果，我觉得我是幸运的。自己还得了优秀毕业论文。在感激老天眷顾、高兴之余我想和大家分享自己做实验的体会： 一、在选题方面要注意：根据自己实验条件，来选择实验内容及检测指标，这一点很重要，好多战友在选题上难度很大，自己操作起来很难，把试剂买来了，做了太难，放 ...

成纤维型细胞：在培养中的细胞凡形态与成纤维细胞类似时，皆可称之为成纤维细胞。本型细胞由形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名，细胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长，细胞中央有卵园形核，胞质向外伸出2-3 厘米个长短不同的突起，除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间质起源的组织细胞常呈本类形态生长。 培养细胞的纯化 【我是小米2】培养细胞的纯化： 1、自然纯化 即利用某一种类细胞的增殖优势，而排挤其他 ...

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一、严格无菌操作　 对实验室以及培养过程中所接触的试剂、液体、器皿、仪器的消毒均应严格按照有关细胞培养的参考书的要求进行操作。无菌观念要贯穿整个实验的始终不可松懈。 二、培养器皿的选择　 淋巴细胞培养既可选择培养板(24 、48 、96 孔) 、培养瓶也可选择三角烧瓶、试管等器皿进行培养。有研究表明提取的淋巴细胞用1. 5ml 离心管培养72 小时细胞生长状况良好细胞数与培养前比较差异无统计学意义 ...

谈谈你在做与细胞相关实验中的体会和收获，或喜或悲，一路从实验中走来，我们一定都感触颇多，细心观察和思考一下，做实验以来，你是否犯了很多的小错误，是否经历了一些实验的失败？是否又摸索了很多成功的经验，那么你是如何调整和思考的呢？这些体会有很多都不是能从书本上得到的，为什么不让大家一起来分享呢？每一个细节，每一份体会，都可能会给别人带来更多的便利，同时，你也一定会从别人的经验中收获许多。 这些战友实验 ...

最近忙于用邮箱回答网友们关于DC培养的问题。其中比较突出的问题是DC数量少或养不出来DC，细细比较他们的培养方法，发现许多网友采用“用不含GM-CSF的1640贴壁3小时”的方法，也有采用筛网过滤细胞的，下面我仅就“用不含GM-CSF的1640贴壁3小时”谈一点肤浅的看法，不当之处望诸位高手指正： 目前DC培养多数利用DC的前体细胞或者说早期DC贴壁 ...

【摘　要】目的：培养脑皮质微血管内皮细胞。方法：取1～5d Wistar乳鼠脑皮质经不同孔径的筛网过滤后，用胶原酶振荡消化获得的微血管内皮细胞进行培养，用Ⅷ因子相关抗原免疫组化鉴定。结果：培养的细胞呈单层贴壁生长，7～9d呈典型的铺路卵石样征象。结论：建立了一种简便易行的培养脑皮质微血管内皮细胞的方法。 【关键词】 细胞培养；微血管内皮细胞；Wistar大鼠 脑微血管内皮细胞是构成血脑屏障的主要成 ...

摘要: 　目的　探讨脑微血管内皮细胞的体外培养方法并进行细胞超微结构研究及组织型纤溶酶原激活物(TPA ) 活性测定。　方法　取新生小鼠脑组织 通过匀浆、过筛、胶原酶消化、差速粘附等技术对鼠脑微血管内皮细胞进行原代培养 待细胞铺满瓶底时 用01125%胰酶20102%EDTA 消化 离心收集内皮细胞 进行传代培养。原代、传代各取8 例 吸取培养液用酶联免疫吸附试验测试TPA 活性。　结果　经&ET ...

巨噬细胞培养 巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2－3周，多用做原代培养，难以长期生存。 巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如P331、S774A.1、RAW309Cr.l等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难以建株。 培养巨噬 ...

丁香园网友xxxdada的观点为： 1、我取脑的时候是用双镊，先用一把夹住头部，另一把在人状缝下面撕开，要特别小心，别弄出血来，因为出血的话取出的脑组织含血块就会比较多，离心的时候可以看出来，不知各位同仁有没有更好的方法。 2、尽量去除脑膜和血管，PBS清洗干净，胰酶消化37度10-15分钟消化中止按每10ml胰酶加1ml血清。 3、玻璃培养瓶差速30-40min过滤75－100um滤网，种植，其 ...

丁香园网友clellwei的观点为： 原代椎间盘细胞培养其实并不太难，但培养时间相对较长，所以容易出问题。 1、选材很关键 选用胎儿椎间盘进行原代培养相对容易一些，可利用反复传代的方法来制作退变模型。直接选择人退变椎间盘进行培养时（一般选择手术摘除的椎间盘），患者的年龄及间盘的退变情况必须充分考虑在内。若年龄偏大，间盘退变很严重，培养的难度相应增大。20－50岁之间的患者都可采用。如果实验需要进行 ...

第一章细胞培养的基本原理与技术 现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来 ...