siRNA制备实验

shewotwzqishui 大家好！请教一个问题：本人已经稳压了一个过表达的突变型细胞系，现在想在此基础上设计一段siRNA或shRNA，瞬时干扰或稳定沉默掉内源的，不知是否可行，设计这段序列、稳压的过程中需要注意哪些问题？谢谢。lixiaoling633 设计mRNA CDS前的区段吧bigbang_0_0 可以设计在CDS区，也可以设计在UTR区，前提是特异性良好，可使用相关的在线软件设计，前提是这个基因对于细胞的正常生 ...

晓晓317481504 请问问siRNA能否在大鼠体内转染并且起干扰作用? 文献有报道就是说体内的RNAi也能够正常的起作用。请问有没有老师做过这种实验？谢谢slytjiaofei siRNA肯定在大鼠体内发挥干扰作用，有很多相关文献，如下两篇楼主可以参考！http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21571310http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8113414晓晓31 ...

docado 我要做乳腺癌细胞siRNA瞬时转染，不知道哪里的转染试剂比较好用、可靠。Invitrogen公司的脂质体LipofectamineTM-2000 德国QIAGEN公司Attractene Transfection Reagent北京英恩格公司的EntransterTM -R这些是否有人用过，转染效果怎样？非常感谢！！！baby_susan 我们用的最多的是 Invitrogen公司的脂质体LipofectamineTM- ...

yanj13 如题！希望高人能说说各种方法的详细的原理和步骤！谢谢先！急用！谢谢！～zhujoker 我想你自己还是多看一点吧，这么多的介绍，我都不知道怎么说才好bigbang_0_0 直接从公司买woxingwosu bigbang_0_0 wrote:直接从公司买恩，一般从公司买就可以了，方便又快捷～～微尘9923 woxingwosu wrote:恩，一般从公司买就可以了，方便又快捷～～那些公司有我们所需要的各种siRNA吗？比如说我要去抑 ...

吴佰霖 SiRNA及miRNA下调靶基因多少为有意义？20％？25％还是更多，当然下调越多越好啦大家看文献有注意这个问题吗？fqpcr 75%以上lide658 我个人认为这个不能看下调多少，而是应该通过多次重复实验后，用统计学分析计算P值。仅供参考。willion1985 siRNA 70%miRNA 40%就很高了吴佰霖 请问有甚么文献提到这个问题吗本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成 ...

小小学药者 因为实验室以前没做过干扰试验，所以对这块不是很懂。请大家帮我推荐下 哪家合成的比较好，价格也适当的 谢谢哈！另外甲基化的siRNA适用于哪类干扰呢？呵呵 不太懂问题如果很幼稚 不要笑话哦。。。。呵呵 谢谢bioenw 百恩维生物 www.biowit.combaby_susan 甲基化的siRNA，你是指2‘甲氧化学修饰吗，这个主要是保证siRNA转染进细胞或注射动物体内比较稳定小小学药者 baby_susan wrote:甲基化的siRNA，你 ...

douermm :)战友们好，我最近想做RNAi的实验，目的是使胃癌细胞的一个相关基因沉默，然后看干扰后的细胞耐药性的大小。想请教该用什么方法合成siRNA最合适？像我这样的实验是不是应该稳定转染呢？我现在对于合成途径很迷惑，化学合成一般的公司都是两千左右；体外转录书上说比较便宜，但是我不知道何得到模板及体外转录都需要具体做什么 还有相应的钱数；也考虑用质粒载体，那个质粒是怎么得到的呢，需要怎么做呢。是不是用不同的方法 ...

waterbeijing 请问能从网上在线查到人或鼠的内源性siRNA表达谱吗，多谢版主zhujoker留言:人或鼠的内源性siRNA表达谱 是你自创的吧？是什么意思啊？问问题怎么也不表述清楚？waterbeijing sorry, I mean whether there is some database or any research detecting expression profiles of endogenous siRNAs (endogenous-small-inte ...

cxm_7910 我是第一次作RNA干扰。我用1640培养基培养贴壁细胞，但RNA干扰试剂说明书上说最好用OPTI-MEMI低血清培养基来稀释siRNA和脂质体。请问可以用1640稀释吗？干扰后什么时候测mRNA和蛋白含量？谢谢！霍一刀hxs 最好用OPTI-MEM。瞬时转染，一般48小时之后检测。teagerxl 用1640无血清转染也可，刚开始做可以做一个时间梯度。mRNA和protein不同步。cxm_7910 谢谢！本文 ...

qingyuansw20 问人要了个siRNA质粒，但是没有GFP荧光，无法检测转染率。于是又要了个有GFP的质粒。这个GFP的质粒和siRNA质粒区别就是一个有荧光一个没荧光，一个没干扰序列一个有干扰序列。问题：两个质粒共转染细胞能检测转染率吗？只转让GFP的质粒能反映siRNA的转染率吗？kern6549 当然不能。mayle 可以做一下western本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的 ...

yeselanshan 本人正进行RNA干扰筛选实验，筛选模型已构建成功，但shRNA文库构建一直没有成功，导致实验受阻。哪位达人能否提供siRNA文库或shRNA文库帮助，接受有偿提供。谢谢各位。willion1985 www.sirna.cnxujian2004265 再打广告，封！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcomi ...

piaoxue2320 哪位大虾survivin的vector，能否借我一点。实验急需。万分感谢。还有谁用过survivin的siRNA效果比较好的，可以告诉我哪家公司的吗？谢谢了。zitong1983 表达质粒免费赠送倒无所谓，siRNA也要蹭别人的有点为难别人啊，这东西不便宜啊shutaozheng_824 嗯，siRNA合成价格蛮高的！上海吉玛（**~B公司专项做目的基因的siRNA的！蛮不错的！参照网页：http://www ...

xunyi09 各位师兄师姐，我准备做个干扰的实验，请问shRNA、siRNA和miRNA三者之间做干扰哪个更好些？这个实验下来经费多少啊？刚入门，望多指教呀！！:)freecell 各有优缺点。经费据估计，最少10K。wst207 10k 啊 不算多willion1985 siRNA 简单方便clion007 xunyi09 wrote:各位师兄师姐，我准备做个干扰的实验，请问shRNA、siRNA和miRNA三者之间做干扰哪个更好些？这个实验下来 ...

佟子 如题，我想研究一种蛋白质在脑缺血病理生理过程中的意义，想到用RNAi技术来关闭相关mRNA,以减少该种蛋白质的翻译。主要想从整体动物和细胞水平来阐述其意义，但我不是做分生的，没有做过RNAi技术，所以相关技术不懂，想请问园子里的各位高手：1，我能用从公司直接购买的化学合成的SiRNA直接注射到侧脑室吗？2，能将化学合成的SiRNA直接转染到细胞吗？3，要求基因沉默的时间不长，一周之内就行，不知我的上述方案可行吗 ...

依然燃 一篇国外文献中提到，细胞的某种基因被siRNA后，此基因的表达水平仅暂时降低，随着细胞分裂的进行，水平会回升。是这样的吗？难道siRNA沉默不是永久性的吗？谢谢！freecell 如果是永久性的，那基因敲除的动物模型就没有用了。siRNA沉默的水平，根据基因性质，会维持或长或短，但是不是永久性的。xuezhishui 不单在细胞水平，就是体内也不可能是一劳永逸的！生命的复杂性就在于其弹性（始终处于平衡状态），这样才能保 ...

lily1218 请问哪位做过关于MTDH的干涉,求助能发挥干涉作用的siRNA序列,十分感谢!freecell 自己在文献里面找，或者dharmacon或者ambion的库里面找。majian0064 5
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可以交流一下你的实验吗？我的邮箱majian10@mails.jlu.edu.cn本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...

lbqlxy 我的目的基因是 人 rab23 约2000bp请公司设计了3个siRundefined*段 位置分别在200 600 800处 本打算用来筛选出一个干涉效果好的片段在复习文献中发现 单个片段可能因为脱靶效应 影响实验准确性现在的问题是 能否用我现有的3个片段 组合成pool（三者各取三分之一的量组成一份）转染细胞？？ 有无组合的原则？？lmnsmu 一般不这样做。单个片段可能因为脱靶效应而无干扰作用，所以才设计数个片段，通过预实验检测它们哪一个干涉效果好，再用于 ...

linder138 各路战友，请问如何知道某个基因的已验证有效的SiRNA，非常感谢！听说是查找外文文献，但我不知道怎么个途径，查了好几遍都没查到， 我要用到的是乙酰肝素酶的SiRNA。freecell http://scholar.google.com/scholar?q=heparanase+and+small+interfering+RNA&hl=en&btnG=Search&as_sdt=2001&as_sdtp=on很多啊，例如 ...

iceman340 本人现在实验，需要要用到MIFsiRNA用来干扰小鼠，请问各位高手，有谁做过这方面的实验，这个MIFsiRNA的用量是多少啊？？急求！！不胜感激iscience 你自己看看文献，不就知道了吗？再者说，你如果做这个试验，应该需要做不同梯度的siRNA吧？我告诉你，每只小鼠用0.01ng siRNA， 你相信吗？你就按照这个去做？iceman340 iscience wrote:你自己看看文献，不就知道了吗？再者说，你如果做这 ...

alterego 查阅了很多文献，结果把自己越搞越糊涂了因为是做阳离子的复合载体，主要是用PEI进行siRNA的静电吸附，PEI经过修饰之后，氨基有所变化，已经通过化学的比色法进行残余氨基测定，可以确定氨基残基（N）的mol数但是每个mol的21nt的双链siRNA（19对RNA，undefined2个嵌合DNA，很经典的搭配）中磷酸集团（P）应该算成几个mol呢？查阅了许多类似的siRNA文献，都没有正面说这个问题。DNA的东西貌 ...