基础实验

有实验者提问：筛选的噬菌体扩增后滴度没有增加 一丁香园网友建议： 你筛选的噬菌体必须保证有完整的系列； 你的扩增条件必须控制好如酶的用量;温度;PH及时间等； 如果能排除以上条件再思考一下检测滴度有没有问题. 另一丁香园网友观点： 关键是酶的质量; 用过好几种酶，国产的如天为时代、生工的不太行，建议用MBI的试一下。 ...

1 样品采集 将一定的样品放入灭菌三角瓶中，加入对数生长期的敏感指示菌如大肠杆菌菌液3～5mL，再加20mL二倍肉汤蛋白胨培养液。 2 增殖培养 30℃振荡培养12～18h 使噬菌体增殖。 3 离心分离 将上述培养液以3000rpm离心15～20min 取上清液，用pH7.0，1%蛋白胨水稀释至10-2～10-3，用于噬菌体检查及效价测定。 4 生物测定法 4.1双层琼脂平板法 4.1.1 倒下层 ...

噬菌体： M13KE T7 宿主细胞 ： ER2738 BL21/BLT5403/BLT5615 噬菌体释放方式： M13噬菌体溶源性，不裂解宿主菌。极大地简化了每轮淘选过程中的噬菌体纯化步骤，只用简单的PEG沉淀方法即可。 T7是裂解性的，其展示的蛋白不需分泌。这一优点使更多的序列可能被展 ...

第一天： 17：00：后用接种环取一单克隆细菌接种于LB培养液中，37°C摇床过夜（不要超过16小时） 第二天： 7：30：打开紫外灯，照射半小时（将器械放入通风橱中） 8：00：将20mL的LB培养液放入250mL的三角烧瓶中，按1：100的比例稀释过夜培养的细菌（即放入200ul 的细菌液体），将其放入37°C摇床，培养约3.5个小时 11：00：打开紫外灯，照射半小时 11： ...

部分菌株对应的噬菌体分离过程步骤：1、噬菌体分离　(1) 以新鲜鸽粪4g 加入100ml 普通液体培养基内放入37 ℃温箱培养24h。(2) 次日从中取出10ml70 ℃加热30min 离心2000r/ 10min 上清液用滤器过滤后保存于4 ℃冰箱备用。(3) 在普通琼脂平板底面分别注明1、2、3 号。(4)在1 号平板接种事先培养好的6h 幼龄菌乙型副伤寒杆菌一接种环;2 号平板接种幼龄菌福氏 ...