DNA制备

Universal primers for gene knock-out using dominant drug markers: Kan Clonat and Hygromisin-B. Forward primer: 5’ TCAGGGGCATGATGTGACT 3’Reverse primer: 5’ AGCTCGTTTTCGACACTGGAT 3’Plasmids for Selectab ...

靶向克隆法是一种新的基因克隆方法，该克隆方法的特点是：在基因克隆过程中不使用已有的DNA Ligase，而是使用新开发的靶向克隆酶。靶向克隆酶能够使末端序列相同的双链DNA(14bp-18bp)同源重组，从而达到克隆基因的目的。 LP Recco酶，中文名：靶向克隆酶，无需传统基因克隆所需要的限制性内切酶和连接酶，使基因克隆位点选择的限制性大大减少；能在一天之内完成从PCR开始到转化的全部过程；阳 ...

SSR银染方法(轻轻震荡)1、固定10%乙醇+0.5%冰乙酸 6min×2次2、染色0.2% AgNO3 12min3、漂洗（1）蒸馏水 1-2min（2）0.002% Na2S2O3 1-2min（3）显色1.5%NaOH + 0.4%甲醛（4）保存0.75%Na2CO3 ...

分析色谱是制备色谱的基础。当我们在分析色谱上 取得了良好的分离效果时，可以将其放大，应用到制备色谱上，由此，我们需要考虑调整上样量，流速，梯度：1.上样量的调整：他与分析色谱柱和制备色谱柱的柱长和柱内径有关：具体关系时;制备柱上样量/分析柱上样量=制备猪场/分析柱长制备柱内径的平方/分析柱内径的平方 2.流速的调整：制备柱流速/分析柱流速=制备柱体积/分析柱体积=制备柱长/分析柱长制备柱内径的 ...

内容：一、遗传标记 二、DNA分子标记 三、染色体原位杂交 四、DNA分子标记的应用 长期以来，植物育种中选择都是基于植株的表型性状进行的，当性状的遗传基础较为简单或即使较为复杂但表现加性基因遗传效应时，表型选择是有效的。但水稻的许多重要农艺性状为数量性状，如产量等；或多基因控制的质量性状，如抗性等；或表型难以准确鉴定的性状，如根系活力等。此时根据表型提供的对性状遗传潜力的度量是不确切的，因而选择 ...

显微操作技术（micromanipulation technique）是指在高倍复式显微镜下，利用显微操作器（micromanipulator）进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。显微操作器是用以控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械装置。显微操作的基础平台--倒置研究级显微镜（例如OLYMPUS的IX71/81）各种活细胞应用实验，如显微操作、细胞培养，IVF，ICSI等. 显微镜的观察方式一定要 ...

RAPD利用 10 个碱基的一个或几个随机引物非定点地扩增 DNA 片段，一般一个引物可扩增 6-12 条 DNA 片段，利用凝胶电泳分开扩增的片段，从而进行基因多态性研究。 RAPD 是一种能快速进行基因多态性研究的技术，并且由于不涉及印迹杂交、放射性自显影等技术，因此简便易行。 SSR 真核生物的基因组中散布着大量的串联重复序列，其中， 2-4 个 bp 的微卫星序列 (Microsatell ...

5.3.2常规条件下已知值质控血清变异（routine conditions variance-known value简称RCVK）的测定。　　做常规检验的技术人员，在常规检验的条件下，将质控血清放在常规检测样本中，进行20次检验，结果计算同OCV法。一般认为RCV的SD在OCV的SD两倍范围内可以接受。若太大应该查找原因，使其向OCV的SD值靠近。在改进实验室条件后（例如较正加样器，纠正洗板操作 ...

常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望 能有所帮助。 柱子可以分为：加压，常压，减压。 压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所 以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分 离，一个柱子几个月也是有的。 减压柱能够减 ...

1.1 核酸序列的检索 http://www.ncbi.nlm.nih.gov:80/entrez/query.fcgi?db=Nucleotide 1.2 核酸序列的同源性分析 1.2.1 基于NCBI/Blast软件的核酸序列同源性分析 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/blast.cgi 1.2.2 核酸序列的两两比较 http://www.ncbi.nlm ...

蛋白产物的检测一、组织蛋白的裂解提取：1.分别取-70℃保存的各组动物的样品（半个脑、0.5g肌肉），放入小离心管中，在冰浴上以PBS充分洗涤2次，除去残留血液。2.用无菌手术剪和镊子将大鼠肌肉剪碎（脑样品不用剪碎），放入另一小离心管中，于0℃以PBS充分洗涤，4℃，3000 rpm离心5分钟。3.吸出上清夜，尽量将管壁上的液滴吸净，将组织碎片转移至组织匀浆管内。4.取2ml的裂解缓冲液（预冷至0 ...

摘要对单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）的研究分析近几年被广泛应用于生物及医学研究的诸多领域，筛查SNPs的方法很多，各具特色，并一直不断地发展.本文对筛查SNP的几种常用及最新方法做一简要介绍，其中包括PCR-RFLP，分子信标等.细胞外基质的降解和改变是肿瘤转移的基本条件，基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases ...

DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造一、质粒常用的有pBR322，pUC系列质粒等。（一）pBR322质粒是4362bp的环状双链DNA载体，有2个抗药性基因（四环素和氨苄青霉素），一个复制起始点和多个用于克隆的限制酶切点。当缺失抗药性基因的大肠杆菌被pBR322成功地转化时，它便从该质粒获得了抗生素抗性。两个抗生素基因中均含供插入外源DNA用的 ...

第一课 色谱法概述 色谱法是一种重要的分离分析方法，它是利用不同物质在两相中具有不同的分配系数(或吸附系数、渗透性)，当两相作相对运动时，这些物质在两相中进行多次反复分配而实现分离。在色谱技术中，流动相为气体的叫气相色谱，流动相为液体的叫液相色谱。固定相可以装在柱内，也可以做成薄层。前者叫柱色谱，后者叫薄层色谱。根据色谱法原理制成的仪器叫色谱仪，目前，主要有气相色谱仪和液相色谱仪。色谱法的创始人是 ...

第七课 液相色谱仪 气相色谱法是一种很好的分离、分析方法，它具有分析 速度快、分离效能好和灵 敏度高等优点。但是气相色 谱仅能分析在操作温度下能汽化而不分解的物质。据估 计，在已知化合物中能直接进行气相色谱分析的化合物 约占15％，加上制成衍生物的化合物，也不过20％左右。 对于高沸点化合物；难挥发及热不稳定的化合物、离子 型化合物及高聚物等，很难用气相色谱法分析。为解决 这个问题，70年代初发展 ...

第十一课 离子色谱法 离子色谱法 离子色谱法是利用离子交换原理和液相色谱技术测定溶液中 阴离子和阳离子的一种分析方法。离子色谱是液相色谱的一种。离子色谱是利用不同离子对固定相亲合力的差别来实现 分离的。离子色谱的固定相是离子交换树脂，离子交换树脂是苯乙烯- 二乙烯基苯的共聚物。树脂核外是一层可离解的无机基团，由于可离解基团的不同，离子交换树脂又分为阳离子交换树脂和阴离子交换树脂。当流动相将样品带到 ...

Modified Yeast Transformation Inoculate cells from an overnight culture into 50 ml YEPD and incubate at 30°C with shaking. Typically add 0.1 to 0.2 ml saturated culture in the evening to get an of OD6 ...

1：要注意每次做感受态要摇过也菌，最重要的是在摇菌的过程千万不要被污染。2：其次是摇菌，要菌并不需要按照一定比例接，最重要的是收菌时候的OD600的值。这是极其重要的，也是很容易被大家忽略的问题，一般OD值达到0.42-0.48收菌是最好的。其次是方法：我做的方法是经过分子克隆上的INOUE法　我做的有一步和他的不同，而且是提高转化效率的主要关键，就是在最后一步是在菌液里加入０.１Ｍ氯化钙　再加入 ...

SNP的检测知识：人类基因组中存在着广泛的多态性，最简单的多态形式是发生在基因组中的单个核苷酸的替代，即单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms SNPs）。SNP通常是一种二等位基因的（biallelic），即二态的遗传变异，SNP的数量大、分布广，在组成人类基因组的30亿个碱基中，平均每1000个就有一个SNP。SNP作为第三代遗传标记，在复杂疾病的基因定 ...

最糟糕的心态 - 实验失败了，抱怨试剂不好。实验人员本来是应该拥有修正主义、机会主义、怀疑论等诸多“不完美的”意识，所以一定要用“完美的”自我批评意识来平衡。我为什么没有一双慧眼选择可靠的供应商？我为什么不做预实验检测所购试剂？最糟糕的知识 - RNase A 的作用。RNase A 是内切酶，内切酶的作用结果是产生片段，而不是单个核苷酸，所以，RNase A 作用于 RNA 的结果是：大的 RN ...