DNA制备

当ＲＮＡ自琼糖凝胶转移至硝酸纤维素滤膜之前，溴化乙锭的染色时间一般不宜过长，这是因为被染料饱和的核酸分子，其转移效率有所降低。然而，用溴化乙锭作短暂染色，既不至于对核酸转移过程产生可以察觉的掏作用，又独具同时检测凝胶和凝膜上的ＲＮＡ的优点。１．方法Ｉ １）电泳结束后，含乙二醛－ＤＭＳＯ的凝胶应浸入含溴化乙锭（0.5 μg/ml）的10mmol/L磷酸钠（pH7.0）溶液。甲醛凝胶需用无Ｒ ...

　如今，质粒载体中限制酶切位点的种类极为繁多，因而通常都有可能找到某种带限制酶切位点恰恰与外源ＤＮＡ片段本身毫无二致的载体。这就具备一个不可比拟的优点，也应是可以用相应的限制酶消化重组质粒崦回收外源ＤＮＡ。另一种方案，则是把片段插入到载体中能产生匹配末端的任何位点中。例如，识别不同的六核苷酸的限制酶BamHl和BglⅡ产生具有相同突出末端的限制酶切片段，这样用BglⅡ消化而制备的外源ＤＮＡ片段可以 ...

IntroductionThe following protocol describes a procedure for the purification and cloning of miRNAs and other small RNAs in the 20-30 nucleotide size range from plant tissue. Figure 1 gives an overvi ...

1. 引物是如何合成的？目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种 主要都是由ABI/PE 公司生产，而Bioneer自行研制的专利384并行高通量DNA合成仪，可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。 亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定 ...

1、目的基因的获取： （1）特定细胞表达的目的基因：提取RNA后进行反转录，PCR扩增；（2）载体中含有的目的基因：酶切或PCR获取；（3）融合蛋白基因：根据需求，进行PCR合成目的基因；2、穿梭质粒的构建：（1）携带目的基因的穿梭质粒的构建：通过酶切、连接的方式得到，一般采用的是pShuttle-cmv载体；（2）携带多个目的基因的穿梭质粒的构建：如同时表达两个目的基因，可通过IRES将两个 ...

SUPER Green Ⅰ（10000× DMSO溶液，电泳级） SUPER Green Ⅰ核酸染料特点 ● 无毒性：属花箐类染料，容易生物降解，无致癌毒性。● 灵敏度高：至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25～100倍。 ● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。 ● 操作简单：无须脱色或冲洗，即可直接用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观察。● 适用范围广：可适用于多种凝胶电 ...

（1）原理慢病毒是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构，但也有不同于逆转录病毒的组份和特性，作为基因治疗载体发展起来，最近已用于转基因动物制备。利用慢病毒构建的shRNA/miRNA载体，与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，lentivirus－shRNA/miRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试 ...

（1）原理腺病毒（adenovirus，AV）是一种没有包膜的线状双链DNA，它能感染分裂细胞和非分裂细胞，在核内以神经元细胞的形式复制，存在多种AV血清型。到目前为止，构建的绝大多数载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方法取代E1或E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在表达高水平E1和E3基因的细胞中复制，因此适合应用于治疗的高效控制系统。腺病毒载体能够高效传递和表达基因的能力（尤其是 ...

Day 1 Plating (9-10am)Plate 2-2.5x106 of 293T cells per 10cm plate Day 2 Transfection (9-10am)Prepare calcium-phosphate precipitate (1ml/10cm plate) Transfer vector - 20µg Packaging plasmid - 15µg (3r ...

Vector Production EPFL 2007.pdf

E.coli can be transformed using calcium electroporation (best efficiency) or heat-shock. Competent cells for heat-shock based transformation can be easily prepared in the lab using PEG (polyethylene g ...

1.Prepare LB agar plates containing 100 ug/ml ampicillin.2.Add 10 pg (1 ul) plasmid DNA (any but with ampicillin resistance marker; the marker may be against other antibiotics such as kanamycin but ...

Although Addgene strives for the highest level of plasmid accuracy we cannot guarantee that the laboratories that deposit the plasmids have submitted the correct material. For further verification we ...

Steps for CloningPrepare DNA. See Recovering Plasmids from your Stab Culture protocol if you need to prepare DNA from a bacterial stock. See PCR protocol if you are using PCR to generate an insert. Se ...

Amicon Ultra-0.5 mL Centrifugal Filters for DNA Purification and Concentration操作示意图：With their vertical membrane design Amicon Ultra 0.5 mL filters deliver great performance and lower spin timesConcen ...

美国MicroFab公司，成立于1984年，一直致力于喷墨打印技术在工业领域的应用和发展。至今MicroFab的产品和技术已经涉及到非常广泛的生产和科研领域。每个领域都会有专业的应用工程师提供建议和解决方案，从制造业到研究机构，MicroFab都能为您提供精确微量点滴的产品和技术方案。包括有： 铅与无铅焊料的粘合剂； 光学和电子聚合物； 蛋白质及DNA等生物 ...

shRNA 苷酸序列的设计方法设计方法 确定一段合适的21 个碱基的靶序列是有效的敲低某个基因的非常重要的第一步。现在一些互联网上的服务器能够帮助提供一些线索。例如，由Whitehead 生物医学研究所（TheWhitehead Institute for Biomedical Research）设立和维护的siRNAext 程序（http://jura.wi.mit.edu/siRNAext）， ...

Abstract Lumigen HyPerBlu reagent is a one solution chemical substrate based on dioxetane chemiluminescent technology. With HyPerBlu reagent a direct reaction with hydrogen peroxide produces an intens ...

Abstract Spatial and proteomic information are retained and varying combinations of biomarkers can be investigated including nuclear-to-cytoplasmic expression of a single marker colocalization of two ...

滤血膜使用方法说明.pdf