相关专题 在过去20年间的研究中,RNA研究的主要方向多关注于编码蛋白的mRNA及其在细胞过程中的功能,比如疾病和发育等。但是随着研究的不断深入,研究者陆续发现了多种非编码RNA在生命过程中起着重要的调控作用,例如microRNA,siRNA,piRNA以及众多长片段非编码RNA。最近,研究人员逐渐认识到人类基因组中有至少10000个不编码 ...
相关专题 DNA文库的构建在物种基因组学研究、基因表达调控、基因片段分离和提取等实验中具有重要作用。本文介绍基因组文库的构建步骤和操作中需注意的因素以及BAC 提取DNA的两种方案。 一、分离基因组DNA(gDNA) 毫无疑问,高质量的基因组DNA对于基因组文库构建是至关重要的。需要通过经验来选择合适的基因组DNA 分离方法,在分离过程中保 ...
相关专题 基因的结构、功能分析及其表达调控是现代生命科学研究中的主要课题,而基因的分离和纯化是研究的基础。基因文库的构建使基因的分析变得简单而快捷。真核或原核细胞的染色体DNA经物理或化学方法使基因组DNA分裂成为一定大小的片段,而后选择适当的载体与这些片段进行体外重组,并将这些重组体转染细菌后,可得到一组含有不同DNA片段的分子克隆混合体 ...
相关专题 实验室的需求 生物学实验室研究产生大量的EST/cDNA序列,如何分析数据成为现实问题。应用人工上网用blast比对分析1000个EST,约需2个月的工作量,且结果单一,数据不可靠。 (1)分析体系处理仅需1-2个小时,并且可以得到深入的分析结果,数据准确可靠。 (2)分析体系的完善需求 目前已经实现过相应的系统, 我们在分析思路 ...
相关专题 DNA连接与转化 质粒DNA的转化 【原理】 转化是将外源DNA分子导入到受体细胞,使之获得新的遗传特性的一种方法。转化所用的受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷变异株,即不含限制性内切酶和甲基化酶(R-,M-)。将对数生长期的细菌(受体细胞)经理化方法处理后,细胞膜、的通透性发生暂时性改变,成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞。进 ...
相关专题 DNA连接与转化 LB培养基 液态培养基 根据《分子克隆实验指南》(J.萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔著)配制每升培养基应该在950 ml去离子水中加入: 胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解,用5mol/LNaOH调pH至7.0。用去离子水定容至1L。在15psi高压下蒸汽灭菌20min。 LB ...
相关专题 1. 实验目的和要求 通过本实验学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞和外源质粒DNA转入受体菌细胞的技术以及筛选转化体的技术。了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。 2. 相关知识及原理 感受态细胞(Competent Cells): 受体细胞经过一些特殊方法(如:CaCl,RuCl等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发 ...
相关专题 DNA连接与转化 DNA胶回收电泳时通常选择跑大孔的琼脂糖凝胶。对于大孔的琼脂糖凝胶,电泳之后的待回收DNA条带通常分布面积较大,弥散且不够清晰,给后续的切胶和回收带来不便。尝试用小孔加样方式对待回收DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳,取得了不错的效果。 选择两种不同长度的待回收DNA样品(约800 bp和1700 bp),分别用小孔和大 ...
相关专题 生物芯片技术从诞生以来就受到相关科研人员的广泛关注与认同,是未来10年最具发展潜力的技术。本文从生物芯片的特点、分类、制备步骤、发展动向、相关仪器、各种芯片之间的差别等方面对这一技术进行全面介绍。 一、生物芯片的定义 生物芯片(Biochip或Bioarray)是指包被在固相载体上的高密度DNA、抗原、抗体、细胞或组织的微点阵(m ...
相关专题 仅仅不到三十年的时间,聚合酶链式反应PCR席卷了生命科学研究,成为了许多生物实验室必备的实验技术。虽然其基本前提——扩增目的DNA样品——不变,但近年来出现了不少创新,将这一技术发展到了许多应用领域,比如利用定量PCR分析特异性RNA转录的拷贝数,来确定基因表达水平。另外基因组研究的发展也促使研究人员增多了PCR的应用,比如缩小重 ...
相关专题 近年来,尽管测序技术在快速发展,但DNA提取方法却鲜有改进。对于宏基因组研究,这是必需的一步。然而,许多微生物无法在实验室中培养,这成为分析大量微生物样品的一个主要瓶颈。参与美国NIH的人类微生物组计划(Human Microbiome Project)以及地球微生物组计划(Earth Microbiome Project)的科学 ...
相关专题 ABI作为PCR仪中最值得信赖的品牌,引领了PCR仪一系列创新性设计革命。Veriti系出名门,秉承了一贯的可靠性,并是真正意义上的梯度多重控温(六合一)梯度PCR仪。 温度梯度PCR仪进展 温度梯度PCR仪最先由eppendorf公司在1998年研发成功推向市场(Mastercycler Gradient),此后Biometra ...
相关专题 明年是聚合酶链式反应PCR技术诞生的三十周年,这项技术为生物学,医学研究领域带来了革新性的变化,被广泛的用于传染病诊断,基因复制,遗传疾病鉴定等等方面。 经过多年的发展,PCR技术越来越完备,虽然其基本程序:变性,退火,延伸并没有发生太大的改变,但是科学家们和技术人员改进了这一方法,也研发出了许多新品种PCR方法,解答了许多此前难 ...
相关专题 在不少生命科学重点实验中,我们都需用到寡核苷酸,因此,掌握寡核苷酸的技术对于整个实验非常重要。本文集合了各个论坛里的兄弟姐妹对寡核苷酸相关实验和概念的经典问题和回答,希望对大家的实验有所启发。 Q1、大家好,最近看文献,发现了反义寡核苷酸、义寡核苷酸、错义寡核苷酸(无意义寡核苷酸),我知道反义寡核苷酸技术,但是什么叫义寡核苷酸、错 ...
相关专题 2012年底,罗氏诊断新推出一款实时荧光定量PCR仪--LightCycler® 96,这款系统的出现丰富并完善了罗氏生命科学领域的LightCycler®实时定量PCR家族产品线。该系统集多重优秀性能为一体,现今已同步在中国上市,并且将在罗氏诊断应用科学部2013年的3-4月的全国巡回技术研讨会上隆重亮相,届时罗氏相关的产品专家 ...
相关专题 Northern Blotting技术专题 I. Electrophoresis clean gel box with NaOH and/or SDS 2 hours to overnight rinse with water prepare Agarose gel solution 1 x MOPS H2O to 95 % of ...
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