DNA标记

Donis-Keller Lab Manual Department of Genetics in Washington University School of Medicine http://hg.wustl.edu/hdk_lab_manual/plasmid/plsmid13.html Purpose: To maintain lab stock of highly efficient ...

基因的克隆就是利用体外重组技术，将特定的基因和其它DNA顺序插入到载体分子中。基因克隆的主要目标是识别、分离特异基因并获得基因的完整的全序列，确定染色体定位，阐明基因的生化功能，明确其对特定性状的遗传控制关系。通过几十年的努力由于植物发育，生理生化，分子遗传等学科的迅速发展，使人们掌握了大量有关植物优良性状基因的生物学和遗传学知识，再运用先进的酶学和生物学技术已经克隆出了与植物抗病、抗虫、抗除草剂 ...

DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。 常用的DNA连接酶有两种:来自大肠杆菌的DNA连接酶和来自噬菌体的T4DNA连接 ...

Hancock Laboratory Methods. Department of Microbiology and Immunology University of British Columbia British Columbia Canada http://www.cmdr.ubc.ca/bobh/showmethod.php?methodid=12 REFERENCE: GATA 19 ...

一．原理 ⑴ 5’-RACE法 ① 以目的mRNA 为模板，使用5’末端P 标记的RT 引物进行反转录反应，合成1ststrand cDNA。 ② 使用RNase H 分解 Hybrid DNA-RNA中的RNA链。 ③ 使用T4 RNA Ligase 使单链cDNA进行环化或形成首尾连接物。 ④ 进行PCR扩增。 图 4－2 5’-RACE 法原理 ⑵ 引物 ...

目的基因与载体的重组（重组体的构建）程序如下： （1）质粒DNA 的分离纯化。一般含有单个目的基因的DNA 片段，即使进入了宿主细胞也不能进行增殖。通常它需要同适当的能自我复制的DNA 分子（例如质粒、噬菌体DNA 等）结合后，才能在通过转化或其他途径导入宿主细胞，像正常质粒或病毒一样增殖和易于检测。分离质粒载体DNA 有许多方法，但其共同步骤是先用溶菌酶处理含有质粒载体的宿主菌培养物，以除去其细 ...

双元载体的农杆菌转化 1.1农杆菌感受态细胞的制备 1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养。 1.1.2. 挑取单菌落接种于5ml YM液体培养基中，220rpm 28℃振荡培养12-16 hr。 1.1.3. 取2ml菌液转接于100ml YM液体培养基中，28℃220rpm振荡培养至OD600=0.5。 1.1.4. 转入无菌离心管，500 ...

Q: 怎样对合成DNA制品进行定量? A: DNA的量与260 nm处的吸光度值（OD值）成正比，因此使用紫外分光光度计定量是最科学的。1个OD值的合成DNA的重量约为33 mg。 Q: 怎样理解测定的OD值? A: 进行OD值测定时，分光光度计上显示的数值为每毫升溶液中的OD值。当测定200 ml溶液中的OD值为1.5时，溶液整体的OD量应该为多少？此时的OD值 = 1.5 OD/ml &ti ...

原理： 此技术建立于PCR基础之上，使用一系列具有10个左右碱基的单链随机引物，对基因组的DNA全部进行PCR扩增，以检测多态性。由于整个基因组存在众多反向重复序列，因此须对每一随机引物单独进行PCR。 单一引物与反向重复序列结合。 使重复序列之间的区域得以扩增。 引物结合位点DNA序列的改变以及两扩增位点之间DNA碱基的缺失、插入或置换均可导致扩增片段数目和长度的差异，经聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶 ...

Amberg Lab Upstate Medical University http://www.upstate.edu/biochem/amberg/protocols/transformation.html 1.Grow cells to 1X10E8 or OD600 of 1.2-1.3. 2.Spin cells at 5000rpm for 5 min and wash pelle ...

一、目的与原理 当细菌处于容易吸收外源DNA的状态时，即为感受态，而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。 二、材料和方法 1． 材料：大肠杆菌 2． 仪器： 离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜 3． 试剂 LB培养基，0.1M MgCl2，3mM氯化六氮合高钴 TFB ...

实验步骤： 1、将适合菌株（如XL1-Blue DH5α）置于LB或其他营养丰富的培养基上，在37℃下过夜培养 。 2、高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）。准备几瓶灭菌水（总量约1.5升），保存于冷冻室中以备重悬浮细胞用 。 3、转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB（或其他营养丰富的培养基）的1-2升挡板摇瓶中 。 4、37℃下剧烈振荡培养2-6小时。 5、定时监 ...

1.PCR技术 PolymeraseChainReaction聚合酶链反应 它是一种模拟天然DNA复制过程，在有DNA模板、DNA聚合酶（Taq酶）、RNA引物和四种dNTP的情况下，通过高温变性（90℃－95℃，1－2min）低温退火（25℃－37℃，1－2min）中温延伸（60℃－75℃，90sec-5min）这样反复循环的过程中，在体外扩增特异性DNA片段的分子生物学技术。 1）、PCR反应 ...

DNA分子的体外连接就是在一定条件下， 由DNA连接酶催化两个双链DNA片段组邻的５’端磷酸与３’端羟基之间形成磷酸酸脂键的生物化学过程， DNA分子的连接是在酶切反应获得同种酶互补序列基础上进行的。 带有相同末端(平端或粘端)的外源DNA必须克隆到具有匹配末端的线性质粒载体中，但是在连接反应时，外源DNA和质粒都可能发生环化，也有可能形成串联寡聚物。因此，必须仔细调整连接 ...

一. 植物遗传转化的方法 植物遗传转化技术可分为两大类：一类是直接基因转移技术，包括基因枪法、原生质体法、脂质体法、花粉管通道法、电激转化法、PEG介导转化方法等，其中基因枪转化法是代表。另一类是生物介导的转化方法，主要有农杆菌介导和病毒介导两种转化方法，其中农杆菌介导的转化方法操作简便、成本低、转化率高，广泛应用于双子叶植物的遗传转化。 二.农杆菌介导的基因转化方法 （一）农杆菌的Ti质粒与 ...

DNA微阵列技术（m ...

根据WHO资料，全球范围内恶性肿瘤是人类仅次于心脑血管病的第二大死亡原因，占总死亡人数的22%，并逐年增加。 10种常见肿瘤：胃癌、肝癌、食管癌、结直肠肛门癌、白血病、子宫颈癌、鼻咽癌、乳腺癌和膀胱癌。 肿瘤的早期发现、早期诊断、早期治疗是患者获得长期生存的最主要途径。以肝癌为例，肿瘤直径＜2cm，5年生存率几乎100%；直径每增加1cm，5年生存率下降20%。肿瘤诊断三大支柱是图像诊断（包括B ...

试验原理： 煮沸法是根据Holmex和Quigley(1985)的方法改进而成的。在基因工程中， DNA 分子的切割是由限制性内切酶来完成的。限制性内切酶能识别特定的 DNA 序列，在一定的条件下切断双链 DNA 。限制性内切酶的作用效率是受多方面因素影响的，如反应温度，缓冲体系，离子种类与浓度， DNA 的纯度和甲基化程度等。对 DNA 进行酶切时，首先要选择适合的缓冲液。对于单酶切，应选用该酶 ...

摘要：通过PCR，从E.coli K12 Y1090株系中扩增获得glgC基因，插入pUC19的PstI和SacI 位点之间，得到重组质粒pAGP。对所克隆的glgC基因进行全序列测定，结果表明，与已发表的序列相比，有7个核苷酸发生了改变，核苷酸顺序的同源性为99.4 %; 推导的氨基酸序列的同源性为99.2 % 其中，第296位由赖氨酸变为谷氨酸。通过寡核苷酸介导的定点诱变，将第1007位核苷酸 ...

・CaCl2 感受态细胞的制备的实验步骤 1．前夜接种受体菌（ DH5α或 DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）； 2．取 1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-300rpm）； 3．将 0.1M CaCl2 溶液置于冰上预冷； 以下步骤需在超净工作台和冰上操作 4．吸取 ...