抗原设计

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 图注：ELISPOT 法在检测低频率产生细胞因子的细胞时具有独一无二的敏感性。将指定数目的能产生IFN- 的T细胞与一百万个抗原呈现细胞（Antigen Presenting Cells，APC）混合后，使用ELISPOT 法（上图）、胞质内染法（中图）和ELISA 法（下图）分别测量产生IFN- ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 为了实现ELISPOT的标准化，显色最好在恒温箱内进行，温度控制在25°C±5°C，显色25分钟为宜。另外，在37°C显色也是不错的一个方法，但要注意相应的缩短显色时间到12-18分钟，并且显色中勤检查。为了提高ELISPOT检测结果的可重复性，增加实验的可信度，必须建立一套标准化的实验操作规范。标 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） &NBSp; 一、简介ELISPOT技术 ELISPOT全名为Enzyme-linked Immunospot Assay，其技术原理与ELISA相似。其实验设计是在96微孔培养盘底部披覆PVDF薄膜，用来吸附特殊挑选、且无毒性(不含sodium azide、内毒素endotoxin)的单株抗体。静 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） &NBSp; 一、ELISPOT 技术简介 随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法(ELISA)检测体液中游离的细胞因子(CK)或抗体，但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同，使之在体液中不断的 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） ELISPOT基本操作过程： 一、包被96孔板： 用70％乙醇浸润96孔板中的PVDF膜30s 加入捕获抗体（PBS稀释），4℃过夜 倒空板中包被液，轻轻在纸上拍干，用PBS洗涤，禁用洗板机 加入100ul 2%的脱脂奶粉（或者BSA）室温孵育2小时，封闭板中空白位点 PBS洗涤1次。 （如果暂时不 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 试剂盒内容：PVDF96孔板，室温保存;0.1ml捕获抗体，4℃保存;0.1ml生物素标记检测抗体，4℃保存;15ul亲和素碱性磷酸酶标，4℃保存;0.25g牛血清白蛋白，4℃保存;0.25g脱脂乳，4℃保存;11ml底物缓冲液，4℃保存;11ml浓缩PBS(10X)，室温保存;11ml浓缩洗涤液( ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 廖爱华　VERA Rebmann ①　HANS Grosse2Wilde ①　(华中科技大学同济医学院生殖医学中心武汉430030) 　目的:建立一种新的检测人类HLA2 Ⅰ类抗体方法———酶联免疫斑点法( ELISpot) 。方法:以鼠B 细胞系HB95 为模型建立一系列特异性ELISpot 检 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 目前有什么类型的ELISPOT板?对使用各种类型的板有什么建议? ELISPOT板的主要生产商如：U-CyTech， Millipore， Nunc， BD， Whatman等。目前生产的ELISPOT板包括透明，不透明(白色)，PVDF膜等多种类型的板。 国外主要生产商所生产的各类型ELISPOT ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） ELISPOT 技术操作中应注意的问题: (1) 关于固相支持物(微量板) 的选择 目前有 96 孔聚乙烯板和硝酸纤维素膜微量板(NC) 两种 均为通过非共价键吸附抗原或抗体。在实验中 用NC做支持物时 背景颜色较深 不利于 对比 但用聚乙烯做支持物时 偶有斑点大小不 均或融合现象 这时使用琼脂糖固 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 1、目前有什么类型的ELISPOT板? ELISPOT板的主要生产商如：U-CyTech， Millipore， Nunc， BD， Whatman等。目前生产的ELISPOT板包括透明，不透明(白色)，PVDF膜等多种类型的板。 2、达科为公司对使用各种类型的板有什么建议? 国外主要生产商所生产的 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 1、什么是ELISPOT检测? 酶联免疫斑点( enzyme-linked immunosorbent spot， ELISPOT) 检测技术是通过两种高亲和力的特异性抗细胞因子抗体来检测淋巴细胞分泌细胞因子情况的一种方法。 淋巴细胞在体内被抗原激活后，或者在体外培养中被培养液中含有的特异性抗原或刺 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） ELISPOT的历史可以追溯到1963年Jerne等人创立的溶血空斑技术(hemo-lytic plaque forming cell assay ，HPF)，这项技术可用于检测并计数单个抗体形成细胞。随着单克隆抗体技术的成熟，1983年，Czerkinsky等采用此法检测脾细胞中分泌特异性抗体的细 ...

相关专题 ELISA免疫实验技术免疫试剂实验方法小结 ELISA实验中是以抗原和抗体的免疫反应为基础，ELISA试剂以及各种溶液如何配置?最近刚做了下ELISA实验，把各种ELISA配置方法汇总如下：(1)　ELISA实验包被缓冲液(2)　ELISA实验洗涤缓冲液(2)　ELISA实验洗涤缓冲液(3)　ELISA实验稀释液;(4)ELISA实 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 在免疫学领域中，对于疾病以及疫苗研究不仅仅局限于体液免疫应答(B细胞免疫)，细胞介导的免疫应答(cell mediated immune response，CMI)也是人们所关注的，而T细胞在CMI中起关键作用。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法(ELISA)检测体液中游离的细胞因子(CK ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 1、提取外周血淋巴细胞时，有那些注意事项? 如果取外周血淋巴细胞(PBMC) 进行ELISPOT检测，最好采用新鲜血液。在保证无菌操作的前提下，首先应保证取血时抗凝剂应及时充分的与血液混匀，避免血凝块的出现。抗凝血最好及时提取PBMC，避免放置时间过长，室温下避免过夜。应选用分离效果好的淋巴细胞分离 ...

相关专题 老板说节约实验经费，试剂溶液能自己配置的就都自己配置，不买没必要的试剂。下面是我们实验室用的抗体洗脱液配方：主要是参考了分子克隆那本实验室宝典。 抗体洗脱液配方 100mmol/L 2-Mercaptoethanol，2%SDS，62.5m mol/L Tris·HCl pH6.8 14.4 mol/L 2- Mercaptoet ...

相关专题 第一抗体的染色： 1、 将切片浸在3%H2O2甲醇溶液(新鲜配制)中10分钟，PBS冲洗2分钟×3次 2、 加100ul(2滴)血清封闭溶液(试剂1)到切片上，室温孵育10分钟，倒掉(不能冲洗) 3、 加入一抗(按照说明推荐浓度和孵育条件) 4、 使用含有0.05%吐温20的PBS( TPBS)，冲洗2分钟×3次 5、 加入100 ...

相关专题 一、基本原理 免胶体金检测技术是用金属离子和金属蛋白复合物应用免疫组化原理检测组织内抗原抗体的技术，常用胶体金(铁、汞等)重金属离子。由于胶体金容易制成各种大小的颗粒且有很高的电子密度及分辨率，又不影响抗体的活性，因此既可用于免疫组化又适于免疫电镜技术。 二、操作步骤 1、脱蜡至0.05mol/L TBS PH7.4缓冲液。 2、 ...

相关专题 1、洗载玻片 将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中，目的是为了是载玻片上的硅胶等除去，同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整，便于组织吸附，然后置于清水中清洗，除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4(大约冲一个小时左右)，再将载玻片浸泡于酒精之中， 然后放到架子上，置于37 oC温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys ...

相关专题 制备好免疫胶体金后，还需要将其稀释到一定浓度，并吸附于特殊的惰性介质中才能够最终制成产品。一般来说，特殊的介质常用的是玻璃纤维或无纺布。玻璃纤维和无纺布本身一般是疏水的，胶体金产业一般采用表面活性剂预处理过的玻璃纤维或无纺布，通常配方为1%Tween20+适量PVA。介质处理完成后，免疫胶体金稀释液的配伍才是最关键的。现总结原则如 ...