琼脂糖凝胶电泳

What is Electrophoresis? Electrophoresis is a technique used in the laboratory that results in the separation of charged molecules. DNA is a negatively charged molecule and is moved by electric curre ...

1、DNA的分子大小及构型 不同构型DNA的移动速度次序为：供价闭环DNA（covalently closed circular，cccDNA）>直线DNA>开环的双链环状DNA。线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中蠕行，因而迁移得越慢。当琼脂糖浓度太高时，环状DNA（一般为球形）不能进入胶中，相对迁 ...

DNA分子带负电，从琼脂糖凝胶的负极向正极泳动，速度依赖于其分子质量。小的紧密的DNA分子的较大伸展片断容易穿过琼脂糖介质。依据所要分离的DNA分子的大小来选择琼脂糖的浓度，例如质量浓度3mg/ml的琼脂糖用来做DNA大片段电泳（>20 000碱基）而0.8%只能电泳小的片断。 要注意以下几点： 1、 用移液抢将样品加至点样孔。每孔点样的体积一般少于25ul，因此吸取每一个样品时，操作要稳当 ...

主要试剂： 核酸电泳缓冲液有三种，即Tris-硼酸(TBE)、Tris-乙酸(TAE)和Tris-磷酸(TPE).TBE与TPE缓冲容量高，DNA分离效果好，但TPE在DNA段回收时含磷酸盐浓度高，容易使DNA沉淀.TAE缓冲容量低，但价格较便宜，因而推荐选用TBE.缓冲液中的EDTA可螯合二价阳离子，从而抑制DNA酶的活性，防止PCR扩增产物降解。 核酸分离一般用连续缓冲体系，常用的有： 1) ...

指示剂： 核酸电泳常用的指示剂有溴酚兰和二甲苯青及银染色.溴酚兰在碱性液体中 呈紫兰色，在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA段大致相同.二甲苯青的水溶液呈兰色，它在 1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似。 指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成载样缓 ...

Agarose gel electrophoresis (2) is employed to check the progression of a restriction enzyme digestion to quickly determine the yield and purity of a DNA isolation or PCR reaction and to size fraction ...

一、目的 掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离带电颗粒原理；观察核苷酸类物质的紫外吸收现象。 二、原理 带电粒子在电场中向着与其自身带相反电荷的电极移动的现象，称为电泳。控制电泳条件（如pH 等），使混合试样中的不同组分带有不同的净电荷，各组分在电场中移动的速度或方向各不相同，从而达到分离各组分的目的，这就是电泳分析法。以醋酸纤维素薄膜作支持物进行电泳分析的方法称为醋酸纤维素薄膜电泳法。 在pH4.8 电 ...

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一、核酸的纯化 在分子克隆 的所有操作中，最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆 有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时，可进行这种抽提。然而，如要从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸，则要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后，再用有机溶剂抽提。这些广谱的蛋白酶包括链霉蛋白酶及蛋白酶K等，它们对多种天然蛋白均有活性，（1） ...