免疫电镜

制备好免疫胶体金后，还需要将其稀释到一定浓度，并吸附于特殊的惰性介质中才能够最终制成产品。一般来说，特殊的介质常用的是玻璃纤维或无纺布。玻璃纤维和无纺布本身一般是疏水的，胶体金产业一般采用表面活性剂预处理过的玻璃纤维或无纺布，通常配方为1%Tween20+适量PVA。介质处理完成后，免疫胶体金稀释液的配伍才是最关键的。现总结原则如下，不足之处欢迎批评或补充。1 合适的离子种类和强度免疫胶体金毕竟是含有生物活性分子， ...

（一） 原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的抗原进行定位检测。不标记抗体法又可分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。前者利用基因工程方法 ...

一、原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的抗原进行定位检测。不标记抗体法又可分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。前者利用基因工程方法 ...

一、 原理 免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体，再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查，观察到铁蛋白抗体所在的位置，即抗原所在。 二、材料与试剂 1．马脾铁蛋白 2．硫酸铵 3．硫酸镉 4．双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante XC)以0.30Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将XC配制成1%溶液。注意配制的水及容器必须特别清洁，配制后放置4℃数天，以不 ...

电镜组织化学技术样品制备 良好的样品制备是电镜酶细胞化学技术成功的关键。酶电镜组织化学样品制备要求既要保存酶的活性，同时又要保存细胞的超微结构。并能防止酶反应产物扩散。每种酶对固定液的要求和显示方法虽不尽相同．但电镜酶组织化学的基本程序相似，下面简要介绍其基本要求： 1．取材 组织标本的取材是样品制备的第一步，非常重要?所以，取材前应做好计划和充分准备。原则上。目标要明确，操作要 ...

电镜组织化学技术基本原理 电镜组织化学技术是在光镜组织化学基础上发展起来的形态学研究技术，它将组织化学与电镜技术相结合，使组织化学研究从光镜微细结构水平发展到电镜超微结构水平。电镜组织化学技术将组织细胞中特定的化学成分通过特定的化学反应形成反应产物，然后使其形成电镜下易于观察的高电子密度不溶性沉淀物，从而在超微结构水平对特定化学成分进行原位分析，由此将生物化学与超微结构有机联系起来，显示组 ...

免疫铁蛋白电镜技术 1．基本原理铁蛋白的分子量460kD，为一种含铁(约占23％)的蛋白质．直径10―12nm。目前常用的间接免疫染色技术是应用低分子量的双功能试剂将第二抗体与铁蛋白相连，制备标记抗体。此复合物既保留了抗体的免疫活性，又因铁蛋白含有2000―3000个铁原子的致密铁离子核心，形成四个圆形致密区，所以，具有较高的电子密度，易于电镜观察。 早年的研究中，因没有铁蛋白标 ...

电镜免疫胶体金―银法染色技术 免疫胶体金―银染色(1mmunogold-sliverstaining)技术系20世纪80年代Holgate将免疫金染色和银显影方法结合而建立的一种新型检测技术，亦可用于电镜包埋前染色。其基本原理是先进行免疫胶体金染色标记抗原，使其结合在组织细胞抗原所在位置，然后进行物理显影，当显影剂中的对苯二酚将银离子还原成银原子时，后者将围绕金颗粒形成一个“银壳”。“银壳 ...

免疫纳米金电镜技术银加强液漂洗缓冲液定影液配置 A液(HEPES贮存液)：称取23．83gHEPES溶于80ml双蒸水，用1mol/L NaOH调至pH 6．8(不能用HCl)，用双蒸水补充至终体积100ml即为lmol／lHEPES贮存液。4℃保存。 B液(阿拉伯胶)：称取50g阿拉伯胶粉(gum arabic)加入250ml烧杯中，加100ml双蒸水，室温下搅拌l～2天，用4层 ...

（一） 原理 免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体，再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查，观察到铁蛋白抗体所在的位置，即抗原所在。 （二）材料与试剂 1．马脾铁蛋白 2．硫酸铵 3．硫酸镉 4．双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante，XC)以0.30mol/L pH9.5硼酸盐缓冲液将XC配制成1%溶液。注意配制的水及容器必须特别清洁，配制后放置4 ...

免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物，是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。

白磷还原法制备胶体金分散颗粒：胶体金可用多种方法制备，其中应用较为广泛的是化学还原法。这一方法的基本原理是在氯化金水溶液中加入一定量的还原剂，使金离子还原为金原子，可用于制备胶体金的还原剂有50余种，但在生物医学领域内最为常用的还原剂是白磷、柠檬酸三钠以及鞣酸等。

制备胶体金分散颗粒的其他方法：乙醇-超声波还原法（Baigent和Muller,1980），硼氢化钠还原法（Tschopp等，1982），放射性胶体金制备法（Kent等，1981）

当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后，便可进行标记。具体步骤如下：（1）根据标记所用胶体金的总量计算出所需要待标记蛋白质的总量。

胶体金标记蛋白质的纯化:标记好的免疫金探针必须经过纯化处理才能用于IHC染色，尤其是免疫电镜的染色。纯化的目的就是除去其中未标记的蛋白质，未充分标记的胶体金及在标记过程可能形成的各种聚合物。其纯化方法有超速离心法、色谱柱法以及以上二者相结合应用。

免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样，要想得到好的染色效果，关键取决于标本处理是否合适，只有使抗原性及组织结构保存的好，才能使以后的染色成功成为可能，其次要用高特异性和高效价的一抗，选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科，所要检出的抗原种类繁多，性质也各不相同。因此，不可能有一种适用于所有抗原的固定剂，而是根据不同的抗原性质区别对待。根据我们使用的固定剂介绍如下，仅供参考 ...

1、基本原理 彩色免疫金银法（coloured IGSS简称CIGSS）是在IGSS基础上发展起来的一种新方法。其基本原理与彩色显影相似。IGSS方法染色在抗原位点处生成银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的作用即被氧化成溴化银，后者与彩色显影剂相接触立即被还原成金属银，而彩色显影剂本身则被氧化，其氧化产物使彩色成色剂由无色变成有色的染料并沉积在银颗粒的部位，金属银变成了银离子。由于染料只能通过彩色显影剂沉积 ...

制备好免疫胶体金后，还需要将其稀释到一定浓度，并吸附于特殊的惰性介质中才能够最终制成产品。一般来说，特殊的介质常用的是玻璃纤维或无纺布。玻璃纤维和无纺布本身一般是疏水的，胶体金产业一般采用表面活性剂预处理过的玻璃纤维或无纺布，通常配方为1%Tween20+适量PVA。介质处理完成后，免疫胶体金稀释液的配伍才是最关键的。现总结原则如下： 1、合适的离子种类和强度 免疫胶体金毕竟是含有生物活性分子，应 ...

一、基本原理 免胶体金检测技术是用金属离子和金属蛋白复合物应用免疫组化原理检测组织内抗原抗体的技术，常用胶体金（铁、汞等）重金属离子。由于胶体金容易制成各种大小的颗粒且有很高的电子密度及分辨率，又不影响抗体的活性，因此既可用于免疫组化又适于免疫电镜技术。 二、操作步骤 1、脱蜡至0.05 mol/L TBS PH7.4缓冲液。 2、抗原修复。 3、1％卵蛋白（EA）15 min，不洗。 4、特异性 ...

一、免疫胶体金技术的基本知识 ㈠ 胶体金的概念 氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。 ㈡ 免疫金标记技术 胶体金颗粒表面负电荷与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。胶体金对蛋白质有很强的吸附功能，蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面，无共价键形成，标记后大分子物质活性不发生改变。 ㈢ 胶体金的 ...