光合作用

实验原理组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法．一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状、密度、离心力及介质黏度等．同一离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒沉降速率不同．依次增加离心力和离心时间，就能使非均一的悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，从而可分批收集各种亚细胞成分．在等渗溶液中将叶绿体匀浆液在1000 r/min的条件 ...

叶绿素是一种二羧酸酯，在碱作用下，发生皂化反应；在弱酸作用下，叶绿素中镁可被H取代而成为褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素，叶绿素具有荧光，故从与入射光相垂直的方向观察叶绿素溶液呈血红色。叶绿素的化学性质不稳定，易受强光氧化，特别是当叶绿素与蛋白质分离后，破坏更快。 器材与试剂 器材：FS分液漏斗、移液管、试管与试管架、量筒、烧杯、酒精灯、滴管、药匙等。 ...

绿色植物的光合作用是在叶绿体中进行的，了解叶绿体色素的组成和性质对于理解光合作用的本质很有帮助。叶片中叶绿素含量与光合强度以及氮素营养又有密切关系。因此，测定叶绿素含量便成为研究光合作用与氮代谢必不可少的手段，在作物育种、科学施肥、看叶诊断中有着广泛的应用。 原理 当溶剂沿支持物不断向前推进时，由于叶绿体中不同色素分子结构不同，在两相(流动相与固定相)间具有不同的分配系数，因此它们移动速率不同。 ...

绿色植物的光合作用是在叶绿体中进行的，了解叶绿体色素的组成和性质对于理解光合作用的本质很有帮助。叶片中叶绿素含量与光合强度以及氮素营养又有密切关系。因此，测定叶绿素含量便成为研究光合作用与氮代谢必不可少的手段，在作物育种、科学施肥、看叶诊断中有着广泛的应用。 一、叶绿体色素的提取 原理叶绿体中含有叶绿素(叶绿素a与b)和类胡萝卜素(胡萝卜素和叶黄素)，这两类色素均不溶于水，而溶于含有水的有机溶剂 ...

伊夫塔克·雅克比手持两管物质：右边为从植物中提取的细胞膜；右边为铁氧还蛋白，该物质将有效提高氢能产量。（图片来源：Patrick Gillooly） 伊夫塔克·雅克比（左）与张曙光（图片来源：Patrick Gillooly） 一个国际合作研究小组近日宣布，他们找到可提高海藻的氢气产量的方法，这或将使未来氢能大规模、低成本获取的想法成为现实。研究报告发表在近期的美国《 ...

光合速率测定是植物生理学的基本研究方法之一，在作物丰产生理、作物生态、新品种选育、以及光合作用基本理论研究方面都有着广泛的用途。

叶绿素是一种二羧酸—叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。根据其光学特性的不同，又可以用分光光度计精确测定。

叶表皮对细胞起保护作用，壁厚，且排列紧密，其中有许多气孔，是叶片与外界环境之间进行气体交换和水分蒸腾的孔道，它既要让光合作用需要的CO2通过，又要防止过多的水分损失。气孔两侧的保卫细胞有控制和调节气孔启闭的作用，它们的胀缩变化直接影响气孔的启闭，从而显著地影响叶片的光合、蒸腾等生理代谢速率，因此，研究气孔运动有着非常重要的意义。

植物进行光合作用形成有机物，而有机物的积累可使叶片单位面积的干物重增加，但是，叶片在光下积累光合产物的同时，还会通过输导组织将同化物运出，从而使测得的干重积累值偏低。为了消除这一偏差，必须将待测叶片的一半遮黑，测量相同时间内叶片被遮黑的一侧单位面积干重的减少值，作为同化物输出量（和呼吸消耗量）的估测值。这就是经典的“半叶法”测定光合速率的基本原理。测定时须选择对称性良好、厚薄均匀一致的两组叶片，一组叶片用于测量干重的初始值，另一组（半叶遮黑的）叶片用于测定干重的终了值，不但手续烦琐，而且误差较大。“改良半叶法”采用烫伤、环割或化学试剂处理等方法来损伤叶柄韧皮部活细胞，以防止光合产物从叶中输出（这些处理几乎不影响木质部中水和无机盐分向叶片的输送），仅用一组叶片，且无须将一半叶片遮黑，既简化了手续，又提高了测定的准确性。

由于铁氰化钾不能透过被膜，故完整叶绿体在等渗介质中不能进行铁氰化钾光还原的Hill反应。而失去完整被膜的叶绿体，铁氰化钾可以进入类囊体进行Hill反应。根据这一原理，比较胀破与未胀破的叶绿体Hill反应速率，就可计算叶绿体被膜的完整度。

研磨叶片得到的匀浆，经过滤、离心可制备叶绿体。叶绿体的被膜比较脆弱，分离叶绿体应在等渗的缓冲溶液中，0~4℃温度下进行。叶绿体活力会随着离体时间延长而不断下降，因此，分离工作尽可能在短时间内完成。

根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其光密度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的光密度D与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比。

叶绿素是一种二羧酸—叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开；叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光镜检查或用分光光度计精确测定；叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而类胡萝卜素则较稳定。叶绿素中的镁可以被H+所取代而成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。

根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其消光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。 根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的消光度D与其中溶质浓度C和溶液层厚度L成正比，即：D=kCL式中：k为比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，k为该物质的比吸收系数。各种有色物质溶液在不 ...

叶绿素是一种极不稳定的化合物。它是一种二羧酸-叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与胡萝卜素分开。叶绿素与胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光镜检查或用分光光度计精确测定。叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。叶绿素中的镁可以被H离子所取代而成褐色的去镁叶绿素。去镁叶绿素遇铜则成为铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而胡萝卜素则较稳定。在有氧存在下，叶绿素在甲醇中放置一、二天就转变成加温或室温长期放置会转变成叶绿素a‘和叶绿素b’。因此，在试验中要注意控制这些因素。皂化反应式如下：C32H30NMg

叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类。它们与类囊体膜蛋白相结合成为色素蛋白复合体。它们的化学结构不同，所以它们的物化性质（如极性、吸收光谱）和在光合作用中的地位和作用也不一样。这两类色素是酯类化合物，都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙醇等有机溶剂提取。提取液可用色谱分析的原理加以分离。因吸附剂对不同物质的吸附力不同 ...

叶表皮对细胞起保护作用，壁厚，且排列紧密，其中有许多气孔，是叶片与外界环境之间进行气体交换和水分蒸腾的孔道，它既要让光合作用需要的CO2通过，又要防止过多的水分损失。气孔两侧的保卫细胞有控制和调节气孔启闭的作用，它们的胀缩变化直接影响气孔的启闭，从而显著地影响叶片的光合、蒸腾等生理代谢速率，因此，研究气孔运动有着非常重要的意义。关于气孔运动的无机离子吸收学说认为，气孔运动主要是K+离 ...

GSH和GSSG 参照 Anderson等 （1992）。取0.5 g样品，加入3 mL冰冷的6%的偏磷酸（含1 mmol•L-1 EDTA ， pH 2.8），冰浴研磨，匀浆液以20,000 g，4 ℃离心15 min，取上清液来马上测定GSH和GSSG的含量或储存在-20 ℃下等待测定。总的GSH和GSSG含量测定如下：200 μL提取液加 1.2 mL反应液包含400 μL反应液1（110 mmol•L-1 Na2HPO4•7H20， 40 mmol•L-1 NaH2PO4•H2O， 15 mmol•L-1EDTA， 0.3 mmol•L-1 5,5‘-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid） DTNB， 0.04% BSA）、320 μL反应液2 （1 mmol•L-1 EDTA， 50 mmol•L-1 imidazole 咪唑solution and 0.02% BSA）、 400 μL反应液3（5% Na2HPO4， pH 7.5的溶液稀释50倍）、80 μL 9.0 mmol•L-1 NADPH。测定OD412下的吸收值。GSSG含量测定如下：20

1. 目的 学习测定叶绿素总量及吸收光谱的技术 2. 器药品及材料 菠菜叶或其他新鲜叶子，80%丙酮、研钵、瓷漏斗、分光光度计、吸滤甁 3. 实验步骤 a) 绿素提取 称取0.5g鲜重切成小块的菠菜叶片。放于干净的研钵内。加20ml80%丙酮（V/V），把组织研成匀浆（大约研3分钟），小心地把绿色液体转移到一个有滤纸垫的瓷漏斗内。当过滤提取液时（抽滤），用另外10ml80%丙醇重复研磨匀 ...

一、原理 叶绿素a、b在长波方面最大吸收峰分别位于663nm和645nm。 同时在该波长时，叶绿素a、b的比吸收系数K为已知，我们即可以根据Lambert－Beer定律，列出浓度C与光密度D之间的关系式： D663＝82.04Ca＋9.27Cb ………………………&h ...