沉淀实验

co-IP 检测 Hsp90 与 Cdc37 结合情况1、实验材料SKBR3 细胞，PMSF（Amresco，cat:329-98-6），cocktail（上海晶莱生物），脱脂奶粉（cat:66196131T），β-actin（上海晶莱生物）。Anti-Hsp90(santa,cat:sc-69703)、Anti-Cdc37(santa,cat:sc-13129)、Protein A+G agrose(Beyotime)，细胞刮，4 度离心机（eppendorf，centr ...

一、基本原理双向免疫扩散是指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散,彼此相遇后形成一定类型的特异性沉淀线。沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原抗体的特异性及相互间比例，而且与其分子大小及扩散速度相关。当抗原、抗体存在多个系统时，可呈现多条沉淀线乃至交叉反应。依据沉淀线的形态、清晰度及位置可了解抗原或抗体的若干性质，如浓度、特异性等。二、实验材料1%琼脂（生理盐水配制）管，每管约4ml载玻片打孔器及打孔模板微量加样器 ...

一、最近我们实验室想做这个试验，以前也没有做过，如果有战友做过这个试验，希望介绍点经验和教训，谢谢乐。 应战友要求，在网上找乐一下基础资料，方便大家查看，虽然下面也列出了试验方法，但在实际实验室可能并不一样，希望战友们较少些自己的亲身体会，让大家和我本人在即将进行的试验中少走弯路。先谢谢各位了 免疫共沉淀　　免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用 ...

一、裂解细胞 1. 收集细胞。将培养瓶置于冰上，倒掉培养基，用PBS 或生理盐水漂洗两 次，留适量液体于瓶内，然后用特制的细胞刮棒朝一个方向刮取细胞。 将细胞悬液转移到离心管，离心取沉淀，-80℃ 保存。 （收集细胞要迅速， 低温下进行，以减弱蛋白酶的作用） 2. 裂解细胞。采用 RIPA裂解体系，使用前 4℃ 预冷，按 107 个细胞加入 1.0ml 裂解液，吹打混匀，加入适量的蛋 ...

和光纯药工业株式会社 基因研究所 西部隆宏、吉居华子 前言 免疫沉淀法，是利用固相化在磁珠上的抗体与抗原（目的蛋白质）发生沉淀反应原理使蛋白分离、纯化。此方法不仅用于抗原蛋白质的纯化，还可以与抗原蛋白质相互作用，令蛋白质、核酸共沉淀，可应用于蛋白质间的相互作用、染色质免疫沉淀（Chromatin Immunoprecipitation: ChIP）、RNA免疫沉淀（RNA Immunopreci ...

将放射性元素标记的抗体（或抗原）与相应的抗原（或抗体）沉淀时，沉淀线通过自显影而证实。所谓自显影，就是通过复合物中的标记同位素在蜕变过程中放出的射线，作用于感光材料的卤化银晶体而产生潜影，再经过显影把“像”显示出来。这样，能检出肉眼看不见的沉淀线，从而提高反应的敏感性，这种方法可应用于凝胶中的所有反应。

利用酶标记抗原（抗体）和待测抗体（抗原）在电场中向一定方向移动，在比例适当的地方形成沉淀线，通过酶作用底物而显色，指示沉淀线的存在。该法的敏感性大大高于对流免疫电泳。本试验以检测血吸虫抗体为例。

将放射性元素标记的抗体（或抗原）与相应的抗原（或抗体）沉淀时，沉淀线通过自显影而证实。所谓自显影，就是通过复合物中的标记同位素在蜕变过程中放出的射线，作用于感光材料的卤化银晶体而产生潜影，再经过显影把“像”显示出来。这样，能检出肉眼看不见的沉淀线，从而提高反应的敏感性，这种方法可应用于凝胶中的所有反应。

（一）原理 免疫电泳是琼脂平板电泳和双相免疫扩散两种方法的结合。将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳，使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而彼此分开，然后加入抗体做双相免疫扩散，把已分离的各抗原成分与抗体在琼脂中扩散而相遇，在二者比例适当的地方，形成肉眼可见的沉淀弧。 该方法可以用来研究：①抗原和抗体的相对应性；②测定样品的各成分以及它们的电泳迁移率；③根据蛋白质的电泳迁移率，免疫特性及其它特性，可以 ...

1.Crosslink protein DNA complexes in vivo Grow cells in suspension and collect 5 x108 cells by low speed centrifugation.Resuspend cells in 50ml media.In fume hoodadd 1.4ml 37% fomaldehyde solution to ...

1.Wash adherent cells twice in the dish or flask with ice-cold PBS and drain off PBS.Wash non-adherent cells in PBS and centrifuge at 800 to 1000 rpm in a table-top centrifuge for 5 minutes to pellet ...

1.Crosslink protein DNA complexes in vivo Grow 50ml yeast culture to OD600 0.5-1.0.In fume hoodadd 1.4ml 37% fomaldehyde solution to a 50ml conical tube.Fill tube with culture to just below the 50ml l ...

Hancock Laboratory Methods.Department of Microbiology and Immunology University of British ColumbiaBritish ColumbiaCanada http://www.cmdr.ubc.ca/bobh/showmethod.php?methodid=28 MATERIALS: Running buff ...

Purpose and backgrounds About nuclide... 35-S Decay: (b-ray0.167 MeV) Half life: 87.5 days Thick acrylic shield can block most of the emission.Because of the low energyit is impossible to detect spill ...

PIC Cross-linking and Immune Precipitation James FishburnHahn Lab March 2006 References Fishburn et.al.2005Molecular Cellvol.18 #3: Experimental Procedures pg.376 Immobilized Template assay (Hahn lab ...

1)In the cold roomwash cells with cold "Tris" (the same stuff used for TC). Spin down the cells if you are working with suspension cells in a low speed swinging bucket centrifugeresuspend in ...

General Principles of Immunoprecipitation Lysis buffer. The choice of lysis buffer depends on what kind of IP you are doing. RIPA buffer gives the lowest backgroundbut can denature some kinases.It als ...

Lysis buffer. The choice of lysis buffer depends on what the cells were labeled with and whether you want to obtain an active kinase.The lowest background is obtained with RIPA buffer without EDTA.EDT ...

一、实验原理 火箭免疫电泳（rocket immunoelectrophoresis，RIEP）是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时，含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动，而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时，形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰，峰的高度与捡样中的抗原浓度呈正相关。因此，当琼脂中抗体浓度固定时，以不同稀释度标准抗原泳动后形成 ...

一、免疫固定电泳介绍 鉴定某一蛋白成分最好的方法是通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原性。免疫 固定电泳是抗原在载体上电泳后直接用抗血清作用于蛋白，进行抗原抗体反应，使 抗原在电泳位置被免疫固定。 血、尿中游离轻链（本周氏蛋白）的检测对诊断轻链病是不可缺少的步骤，并对多 发性骨髓瘤等疾病的预后判断也有一定帮助。免疫学方法是使用抗轻链（KAP或LAM） 抗血清进行免疫分析。 二、实验仪器 Sebi ...