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基础知识

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【转帖】毕赤酵母表达从入门到精通

毕赤酵母表达从入门到提高本文所涉及的技术要点主要来源于相关文献、网络和书籍,此外,一些操作中的技巧及经验等来自于本人及同学、朋友的总结,仅供大家参考,同时也请下载者不要传播尤其是以商业为目的的复制、传播等等;如有转载、传播请注明来源于“螺旋网”。若本文侵犯了您的版权或有任何不妥,请Email:kaosy@163.com告知。此外,由于学识、经验有限,本文难免会存在一些错误或缺陷,敬请不吝赐教,联系方式:kaosy@163 ...

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SPR(表面等离子体共振)技术

生物传感器是利用附着在传感器界面上的待测生物分子与环境化学物质,或特定分子间专一性的交互作用后产生 感应信号,作为生物分子间交互作用(biomolecular interaction analysis,BIA)的检测装置。随着微机电及光电技术迅速发展,整合了光机电并应用于生物传感器上,已经开发出不同的研究领域,如:共轭焦镭射扫描荧光显微术 (confocal laser scanning fluorescence microscopy,C ...

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包涵体表达的蛋白的复性包涵体表达的蛋白的复性

蛋白的复性是一个世界性的难题,没有通用的方法,甚至没有靠得住的规律,只能试。可以参考以下文章。该文出处已经忘了,如果有人知道原创作者或网上出处,请补充。包涵体表达的蛋白的复性包涵体表达的蛋白的复性包涵体:包涵体是指细菌表达的蛋白在细胞内凝集,形成无活性的固体颗粒。包涵体的组成与特性:一般含有50%以上的重组蛋白,其余为核糖体元件、RNA聚合酶、外膜蛋白ompC、ompF和ompA等,环状或缺口的质粒DNA,以及脂体、 ...

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[资源] 申请上传 Current Protocols In Protein Science (60M) 见公共邮箱

如题。本书全面介绍目前蛋白质技术理论及应用,全书共 3843 页,够厚的吧。目录如下。Chapter 1 Strategies of Protein Purification and CharacterizationUnit 1.1 Overview of Protein Purification and CharacterizationUnit 1.2 Strategies for Protein PurificationUnit 1.3 Protein Purification Flow ChartsU ...

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[资源]双向电泳的操作流程---个人经验整理

双向电泳实验前一天将所需的烧杯,试瓶,玻棒,量筒等泡酸.并向准备间要求大量的双蒸水.第一天,准备试剂.1.水化液Reagent Quantityurea12gChaps0.5gBromphendblue50μl 1%solution加双蒸水定容至25ml,1ml分装贮存于-20℃1)加双蒸水搅拌均匀,要求没有气泡和颗粒,否则会影响实验结果.尿素可以在27℃水浴中溶解,温度不可过高.2)DTT和IPGbuffer临用前加:1ml ...

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【公告】~~~蛋白质技术讨论版170000帖庆典活动圆满结束,大家等奖金呵呵~~~

~~~蛋白质技术讨论版170000帖庆典活动~~~蛋白质技术讨论版作为实验技术讨论区一个重要的板块,长久以来得到众多热心的战友厚爱和支持。为了答谢战友们的关心和维护,现举办十七万帖有奖抓图活动,希望广大战友在这个充满激情的夏天变得更加富有活力。我们有信心把蛋白版办成丁香园的精品版块,我们将向更高的目标迈进!我们期待每一位战友的参与!在这里感谢大家长久以来的热心和关爱,你们才是蛋白版的支柱和主人~~~第十七万帖抓图 ...

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蛋白质测序相关问题!!(汇总)

以下是关于蛋白质测序的论坛帖子,希望有所帮助:蛋白质测序公司http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=1424257&sty=3&keywords=%B5%B0%B0%D7%D6%CA+%B2%E2%D0%F2蛋白质测序联系http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/50023_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65 ...

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【原创】非变性凝胶电泳的方法和应用实例

现在大家都是做SDS-PAGE或者双向电泳比较多,而做非变性电泳的似乎少一些。而我本人接触非变形电泳较多,一直认为它还是很有特点的,能够有很多独特应用之处的,所以在此结合我本人经历向大家介绍一下非变性电泳。非变性电泳,蛋白质在电泳过程中是处于非变性的,电泳时蛋白的迁移率取决于蛋白的电荷和分子量,非变性电泳在完成电泳后,可以进行蛋白质活性测定(如果是酶的话,可以进行酶活检测)或者检测同功酶,或含亚基的完整蛋白的分 ...

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【整理】十月&十一月份无人应助贴

整理了一下十月份无人应助贴,以支持版主的工作已被锁、被扣分、标题为空以及不符合发贴格式的无人应助贴不在此列应助战友请到积分申诉区给出链接,谢谢【求助】我想求教一个关于WESTERN的问题http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4772826&sty=1&tpg=7&age=0【求助】 请问有做pgap表达系统的么http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id= ...

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【Jounal club】无需破坏胚胎,能够量身定做,没有排异反应,甚至可以克隆

无需破坏胚胎,能够量身定做,没有排异反应,甚至可以克隆某年某月的某一天,脑子坏了,不再识字;从口腔刮点细胞,导进几个转录因子,变成干细胞;回种到脑子里,神经再生,突触再连,恍然大悟—原来这就是今夏炒得沸沸扬扬的诱导干细胞(induced pluripotent stem cell, iPS cells),为包括Nature在内的各大媒体竞相报道,为大大小小实验室人员广泛研究讨论,丁香园干细胞版亦有精华讨论【新进展】干细胞新进展--成体细胞 ...

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【专题讨论】itraq实验数据常用的数据分析

给大家分享一下做了两次itraq实验和分析后的一些经验,有什么说的不对的,请各路大神指教蛋白质组学中itraq数据一般来说做如下分析的比较多1.差异蛋白筛选 2.层次聚类分析 3.差异蛋白GO分类 4.差异蛋白pathway分析 5.差异蛋白互作网络构建我也只能简单介绍一下这些数据分析1.差异蛋白筛选,一般用到的两个值是foldchange值和p值,其中前者是表达量的倍数值,后者是学氏-T检验值,一般都是运用这个两个值来筛选的 ...

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【转帖】蛋白质的自述,有趣

蛋白质的自述 我姓蛋,名白质。出生在核仁医院里,从小我就没有见过我的父母,据护士姐姐告诉我,我是由mRNA大叔和tRNA阿姨把我送进医院的,而我的父母DNA早在我还没有出生的时候就过世了,这在常理来说有点奇怪,可我们蛋氏家族向来如此。我的父母在死前留下了一串密码,用了家族的语言—核苷酸语,只有我们家族的人才能看懂,交给了mRNA叔叔:3个核苷酸编码就是一种氨基酸,tRNA阿姨就帮我找来了氨基酸,才让我得以诞生。我非常 ...

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蛋白质组学的网上课程

下面这个网站,大家可以看看。http://www.stcsm.gov.cn/learning/lesson/shengwu/20030211/lesson-1.asp第一课 概论  一、蛋 白 质 组 学(Proteomics)  90年代初期开始实施的人类基因组计划,在经过各国科学家近10年的努力下,已经取得了巨大的成就。不仅完成了十余种模式生物(从大肠杆菌、酿酒酵母到线虫)基因组全序列的测定工作,还有望在2003年提前完成人类所有基因的全序列测定。那 ...

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PDF:墨尔本大学分子生物学实验室实验手册

本人原创制作PDF,内容链接十分齐全,阅读十分便利。感谢墨尔本大学分子生物学实验室的网页内容。同时支持icesugar75 Frederic codegreen 三位版主的工作。(read MM :chhualongdxy)ContentsIsolation of DNA fragments using glass milk (GENE-CLEAN) SOUTHERN BLOTSOUTHERN ANALYSIS OF MOUSE TOE/TAIL DNA Northern transfer p ...

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蛋白质含量测定法 哪个学校的讲义?

实验一 蛋白质含量测定法本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。蛋白质含量测定法,是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法,即定氮法,双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法,即考马斯亮蓝法(Bradford法)。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高,比 ...

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蛋白质磷酸化的检测方法 欢迎大家授业解惑

我总结了一下:具体有几类,但有些问题想请教大家。1,由于很多蛋白有各自的特性,我们遇到需要检测磷酸化的时候,可以检索文献资料,看看是否有可靠的方法可选择。2,一些蛋白磷酸化后其生物学功能会发生改变,可以通过检测生物学功能的变化来间接检测其磷酸化是否发生。但是这个办法操作性很差,因为需要提取蛋白并且需要保证其活性,同时也需要一定量才可以达到可以检测到活性变化的水平。3,此外有非特异性的丝,酪氨酸磷酸化抗体,具体情形 ...

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【进展.热点】新的候选药逆转小鼠老年性记忆丧失

选择性阻止大脑中称之为11beta-HSD1的酶在实验中成功逆转了年老小鼠的记忆丧失, 在全球人口老龄化的背景下,这一研究成果将有深远的影响意义。—— Docofsoul Promising Drug Candidate Reverses Age-Related Memory Loss in MiceScienceDaily (Oct. 13, 2010) — Researchers at the University of Edinburgh report a new experimental compou ...

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【原创】western荧光淬灭的解决办法

不记得是07还是08年我发过一个帖子,询问western淬灭的解决办法,至今,仍有站有私信我关于这个问题的解决办法。与其一个一个的回复,还是发个帖子,特别说明,帮助更多的朋友走出这个困扰。从私信我的站友的数量上看,western淬灭的现象还是挺普遍的。解决的办法其实非常简单,也常常有人提及,只是我们对这个改进有时不敢相信,或者没有做到相应的程度。呵呵,不卖关子了,下面就对荧光淬灭的现象形成和解决办法做一个详细的解 ...

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【原创/分享】GS115毕赤酵母表达外源蛋白较详细步骤!!!(从验证到阳性克隆的筛选)

小弟把最近一个多月来所做的工作,做了个总结,供大家一起分享,希望版主能加分,现在我还是0分,很多帖子不能阅览,希望版主加分,今后我实验有了新的进展,我会把总结发上来,和大家一起分享。我做的是GS115表达VEGF,目前已经做到阳性克隆的筛选这一步。待以后再次做了总结,再与大家分享。希望大家支持,绝对原创!!!一.实验材料1.菌珠E.coli DH5αGS115酵母菌2.质粒PIC9K/VEGF165重组质粒3.试剂NB酵母氮 ...

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【公告】蛋白质技术讨论版公共邮箱启用,欢迎广大战友上传资料!!!

丁香园蛋白质技术讨论版公用邮箱正式开通===============================================蛋白质技术讨论版目前的公共邮箱之供战友下载资料用,因此导致很多战友的大于300Kb的资料无处上传。鉴于此,特开通这个公共邮箱供广大战友上传以及下载资料用。帐号:dxy-protein@56.com空间大小:2G单个邮件附件上限:15M备份邮箱:backup-protein@56.com空间大小:2G单个邮件附件上限:15M1、上传 ...

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