基础知识

第二十一章 原核表达及其表达载体——【蛋白质技术版】第二十三章 蛋白电泳——【蛋白质技术版】已有BeetleHead报名编写初稿，请及时更新！第二十四章 Western——【蛋白质技术版】已有drake015报名编写初稿，请及时更新！第二十五章 表达蛋白的分离与纯化——【蛋白质技术版】已有princessann 报名编写初稿，请及时奉上！第二十六章 表达蛋白的生物学活性的检测——【蛋白质技术版】注：对蛋白质方面感兴趣的战友请到此跟贴！请申请的战友及 ...

我提出这个话题是因为见到了很多人问到关于磷酸化的问题，我在此抛砖引玉，希望大家在这方面有心得的多谈一谈。看了觉得好可千万不要让它沉了。 :-P:-D:D:D①如果目标蛋白是膜蛋白或是胞浆蛋白，操作需要注意什么？答：如果是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，这时最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性。②做细胞信号传导，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？答：对二抗无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用 ...

Difference Gel Electrophoresis (DIGE)即差异凝胶电泳是目前2D领域相当热门的一项技术，可以说它的出现消除了传统双向的一些弊端，使得好多实验室对双向重拾信心:P先简要介绍一下DIGE技术的历史和路线。DIGE技术最早在1997年由Jon Minden实验室提出，后来Amresham成为此项技术的主要推动者，其技术路线是将样品在电泳前标记Cy2、Cy3 和Cy5 这3 种荧光染料（其中Cy2 作为用Cy3、 ...

花了点时间整理了园内有关考染的帖子，拿出来共享，希望对刚动手做WB的战友有所帮助。12.5％考马斯亮蓝染色液的配制（含30％甲醇，10％乙酸）考马斯亮蓝R250 0.125g甲醇 30ml冰乙酸 10ml加ddH2O至 100ml染胶1h~2h脱色液配制（含30％甲醇，10％乙酸）甲醇 30ml冰乙酸 10ml加dd H2O至 100ml注：1. 染色液可回收利用；室温保存即可；甲醇可以用乙醇代替。2.其它脱色液：（1）用水脱色，但效果非常不好，建议不要用。（2 ...

关于这个主题想了很久，联想到篮球公园，因拟此题。想了很多方面，总觉得还是大点好，这样可以容纳更多观众与选手，呐喊、助威，才能畅所欲言，充分享受自由的空间，否则就像我们的宿舍一样狭小，大家都不愿意呆，就是回去了，也就是睡觉（不说话，哈哈）SELDI的出现，也就一、两年的事情，现在还没有人去关心他的原创，就像MALDI在它没被大家接受并被证明是蛋白质分析领域强有力的工具之前，没有人关心田中耕一一样。在基因组学取得巨大成功之 ...

在园子里看到有好多战友询问有关蛋白保存的问题，自己对于这个问题也一直模模糊糊，今天特意搜集了一下园子里有关蛋白质保存的一些有价值的帖子，希望能给各位战友提供一些方便http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1790263_1.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4680926_1.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs ...

General Western Blot ProtocolMany variations exist among protocols for running Western blots. These variations address all aspects of the procedure from the choice of gel buffers and membranes to transfer conditions, blocking and processing steps. The following procedure was wri ...

PubMed医学文献检索服务系统，其检索内容包含MedLine，PreMedline（不含Mesh检索主题词）医学文献数据库及其他电子出版文献。1.PubMed基本检索方式(Basic PubMed Search)进入PubMed基本检索方式主页，在检索框中可以输入任意词，包括文献作者，出版杂志等：键入一个或多个检索词(可以为任意词)，如protein disulfide isomerase ,也可以输入缩略名如pdi等；输入多个词 ...

为了方便战友，方便版面管理，经过蛋白技术讨论版几位主任协商一致决定于近期对蛋白技术讨论版版面进行整理，规范发贴，请大家在发贴求助或分享资料时注意以下几个方面：1 请您在发贴前务必对发贴内容在版内或丁香园进行全面搜索，检查是否已经有过类似内容的讨论，以免造成重复。对重复发帖，重复求助锁贴扣分处理，有特殊情况请pm本版主任 2 发贴时请规范发贴格式，对于标题，请在其前方选择相应的分类标记，如：【原创】、【转帖】、【求助】、【求购】、【建议】、 ...

一、质粒绝大多数的生物都是以DNA的形式来储藏其遗传信息。遗传物质要能生生不息地传给后代的首要条件就是它至少要具有一个复制原(ori, origin of replication，或译为复制起点)，使整个基因体得以复制。含有复制原的遗传物质称为replicon，我们姑且把它译为为复制体吧！。原核性复制体分为原核染色体、质粒(plasmids)和噬菌体基因体(phage genome)等三类。其中质粒的基因体和原核染色体类似，是由双 ...

转自http://www.51protocol.com/pro/WesternBlotting/20071031/38744.html1. 在western实验中，通常有人采用TBS，有人采用PBS，能否有人解释一下二者在使用中的区别？　　选择合适的缓冲液对于维持一定PH值下蛋白质的稳定及保证实验的重复性是很重要的。PBS的缓冲能力强于TBS（因为混合缓冲液在一定的离子强度下常常具有更宽的缓冲范围），TBS在PH7.0以下缓冲 ...

以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上， ...

最近做了taq酶的表达和纯化，将优化的实验流程和一点心得贴上来，希望对大家有帮助，更希望得到批评和指正TaqDNA聚合酶表达载体的构建与提取纯化1 .背景重组TaqDNA聚合酶基因及表达载体插入重组Taq DNA聚合酶基因的pET-28a表达质粒，该质粒是由美国Novagen公司推出的能在大肠杆菌中高效表达的一种质粒载体。该质粒在克隆位点前有1个T7启动子，在T7启动子前有1个6×His-Tag coding序列，是T ...

迎来金秋十月，蛋白版作为实验技术讨论区一个重要的板块，长久以来得到众多热心的战友厚爱和支持。为了答谢战友们的关心和维护，现举办九万帖有奖抓图活动，希望广大战友在这个充满激情的十月变得更加富有活力。在这里感谢大家长久以来的热心和关爱，你们才是蛋白版的支柱和主人加分办法：奖励第90000帖发帖战友和首先抓图并贴图者（以贴图时间最先者为准）：1 、抓到第90000贴抓图的可加分，时间以发贴时间/修改时间为判断标准。发贴时 ...

western使用试剂汇总个人做western已快半年，下面把个人用过的试剂总结一下，可能每个人做的蛋白不一样会有少许出入。但以下试剂应该是必备！希望对各位新做western的朋友有个帮助。主要产品可在公司订购。建议刚开始做先不要买小公司产品，尽量用大公司成套产品做稳定了，再想着从小公司买便宜试剂或粉剂自己配制，以节约费用。其实国内许多公司的成套试剂，质量还不错，比自己配要方便，节约时间。一般产品公司的网站都有 ...

针对核酸序列的新蛋白预测就是在核酸序列中寻找基因，找出基因的位置和功能位点的位置，以及标记已知的序列模式等过程。在此过程中，确认一段DNA序列是一个基因需要有多个证据的支持。一般而言，在重复片段频繁出现的区域里，基因编码区和调控区不太可能出现；如果某段DNA片段的假想产物与某个已知的蛋白质或其它基因的产物具有较高序列相似性的话，那么这个DNA片段就非常可能属于外显子片段；在一段DNA序列上出现统计上的规律性 ...

对蛋白组学方面的新手很有用。MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY REVIEWS, Mar. 2002, p. 39–63Molecular Biologist’s Guide to ProteomicsPaul R. Graves1 and Timothy A. J. Haystead1,undefinedDepartment of Pharmacology and Cancer Biology, Duke University,1 and Serenex Inc.,2 Durham, North Carolina 277 ...

后基因组时代，蛋白质研究又掀起新一轮的高潮，掌握基础的蛋白质技术，是蛋白质研究这个行当中所有人都应该做的。蛋白质技术包括太多，我在这里只想与战友们一起讨论关于蛋白质定点突变的技术。结合自己的实验研究，我翻译了一些手头的资料，拿到这里跟大家讨论，园子里高人甚多，希望我这块砖能引出更多的玉来。参考文献：PCR Approaches to DNA Mutagenesis and Recombination---An OverviewBinzha ...

蛋白纯化经验指南（）摘自中国色谱网1) 白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋问有哪些可能会出现这种原因？怎么解决？测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用GST做亲和层析，但效率只有50～60％左右。洗脱完融合蛋白不需要助溶剂，但这样的条件下切割完后目的蛋白会沉淀，我用0.5％CHAPS助溶可勉强溶解部分，目的 ...

把您的实验好习惯说出来！ 作者：judge0zz8 文章来源：科学网论坛 实验中的每个环节都很重要，忽略任何一个都可能导致实验的失败。良好的习惯可以提高工作效率、降低实验成本、实验中出现0失误！每个人在实验中都有自己的一些好的习惯，把您的好习惯说出来吧！让大家相互学习，让大家一起把实验做好！ 下面整合了其他论坛里的一些心血，抛砖引玉，希望大家都把自己的优点说出来： tip头吸完后马上从移液器上取下来，以免忙乱的时候又以同一tip汲取 ...