基础知识

概要对于基因工程技术构建的重组蛋白，通常分为可溶性重组蛋白和不溶性重组蛋白，可溶性的重组蛋白一般常常存在于细胞质内、细胞分泌到培养基、分泌到周质间隙中等。不可溶性的蛋白主要是由于表达系统的高效表达，在细胞内形成了包涵体。E.coli是应用最为广泛的重组蛋白质表达系统，但是表达的外源性蛋白多以包涵体的形式存在，为了重新获得生物活性，需要对包涵体蛋白质进行体外变复性操作。蛋白质复性模型根据对蛋白质折叠过程的研究， ...

clariceerica 要看某个基因对应的DNA及mRNA上,它翻译出的蛋白的锌指区以及脱乙酰酶作用区各在那一段.B)谢谢啦谢谢啦~~woxingwosu http://www.genecards.org/看看有没有需要的clariceerica woxingwosu wrote:http://www.genecards.org/看看有没有需要的:O):O):O):O)打开了一封天书!!!clariceerica 我..我被打败了.吭哧看了那许多 ...

霍一刀hxs 如何由已知蛋白查询其调控的基因？已知一个蛋白质，通过哪些方法可以查询其调控的基因？谢谢。woxingwosu 比较直接的是察看看这个蛋白是否含有与潜在的DNA结合（特别是promoter）的区域，然后做一下real time或reporter assay等验证一下，有效果就可以通过点突变等进一步验证。如果要大范围的筛选受其调控的基因，需要microarray或者2D吧，我想。zjubell 呵呵，这个是最典型的免疫 ...

chenccy 各位老师好，我想问一下，如何寻找一个已知蛋白和其他因子是否结合，以及探寻该蛋白是否作用某些未知的基因？问题问的不好，希望各位老师能帮忙吴佰霖 Co-IP,打质谱woxingwosu 1） 如果是要检验一个蛋白和另外的一个目的蛋白是否结合，有很多方法，包括免疫共沉淀（IP）,pulldown（包括GST和His tag的pulldown等等），免疫荧光染色共定位，BIACORE，FRET（或者BRET）甚至还有超速离心的方 ...

13163666257 there are many proteins can be constrainted. first of all ,you should find a effective method of target proetin constrainting. you can usesoftware to find a method. the method is better than the method from software. the method adopt software and hydrophilemechanism,compari ...

jairsa 求助：蛋白长期保存在处于等电点附近的缓冲液中，是否会影响其稳定性呢？freecell 为何有此说法？一般说如果溶液pH值和其本身等电点相近，蛋白质溶液沉淀。xuezhishui 蛋白质要长期保存最好能够冻干以干粉状保存！另外如果要在缓冲液中保存最好应该避免极端pH值缓冲液和近等电点pH值缓冲液；如果由于实验的需要不好避免的话还是分装以后低温保存，每次解冻后即用，避免反复冻融对蛋白的影响！gaolisuo 在等 ...

zhang7513 请问各位大侠！Myd88代表什么意思？请指教！谢谢！77472087 髓样分化蛋白-88 myeloid differentiation factor 88, MyD88happylife004007 髓样分化蛋白88， 它是一种接头蛋白分子，含有TIR结构域，在天然免疫中介导信号传导。zhouasd 细胞分化因子88.含有TIR结构的接头蛋白刘芯0220 髓样分化因子(myeloiddifferentiationfactor88, ...

zhtiantao 各位大侠好，我现在正在做蛋白的结合实验，但是做了之后不知道怎么计算结合常数，我用的荧光探针是1-NPN,先加入缓冲液和蛋白，然后梯度加入荧光探针，从2uM一直加到20uM，每个浓度得到一个相应的荧光值，现在很多文章上写就是根据Scatchard方程计算结合常数，我不知道怎么算，请高手指教，谢谢！！waterbeijing 到底是什么蛋白结合实验啊，说清楚了大家才好对症下药啊lastone9853 参考你 ...

kevenhui 求教高人，如何在http://www.ebi.ac.uk/网站上作多物种Pendrin蛋白保守性分析呀。gingivalis 打开网站，选择 tool - sequence analysis - ClustalW2 ，新的页面打开以后，输入fasta 格式多个序列。 然后 RUN。kevenhui 谢谢高人，问题解决了 (~R~S~S~undefined) 嘻嘻……本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shi ...

lwq652 微生物中recA基因编码的是什么酶？他有什么作用，他与限制修饰系统有何联系？对他敲除有何用处？bigbang_0_0 DNA重组，敲除以后就不能重组了，质粒在里面就自由了。lwq652 bigbang_0_0 wrote:质粒在里面就自由了。质粒不会被宿主里面限制性酶酶切掉吗？bigbang_0_0 lwq652 wrote:质粒不会被宿主里面限制性酶酶切掉吗？这个跟RecA的功能没有关系，质粒要保持稳定，除了要敲除感受态细胞 ...

bigyugg825 我想知道HIV中p24蛋白的三级结构和相关的一些参数，该怎么去找呢，还是需要什么特别软件？谢谢了gingivalis chack at here: http://www.rcsb.org/pdb/home/home.do如果 你找不到，把序列贴出来我看看。bigyugg825 gingivalis wrote:chack at here: http://www.rcsb.org/pdb/home/home.do如果 你找不到，把序列贴出来我看看。我在 ...

andrew240 请问单独的GFP（绿色荧光蛋白）由内质网核糖体合成，然后进入高尔基体吗？还是在胞浆核糖体合成？有没有相关文献证明这个的？我想找一个确定不在内质网合成的蛋白作为对照，不知GFP合不合适。谢谢loneman 根据我看的教科书好像蛋白都是在内质网核糖体上翻译的吧？zhujoker 我也看看了相应的知识，感觉是长进不少，但是有一点可以确定的是蛋白质都是在核糖体上加工出来的，但是没有相应的知识提供出到底是胞浆中 ...

mrliuw 提问：一个蛋白单体没活性（或者说很低），发挥作用需要形成同源二聚体并发生自体磷酸化，但是在对照和实验组之间没有发现有统计学意义的表达量差异，请问做过类似研究的同行，应该如何开展研究？（比如从定位，修饰变化等等）mrliuw 这个是已有文献报道的，在细胞内完成。如果能得到天然的二聚体体，下面要如何开展研究呢？freecell 如果能得到天然的二聚体体,你的研究目的是什么呢？只有知道了研究目的，才能探讨研究手段吧？m ...

luoqq1985 DNA Binding and Transcription Factor Pull-Down AssayArray Analysis of DNA-Binding Proteins请问这两个是什么方法？什么原理？谢谢，freecell Pull-down可译作“蛋白质下调”，基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”( ...

感谢pinghw，本帖已经锁定，如果有战友继续上传，请到http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=2457613&sty=1&tpg=1&age=0跟帖！谢谢大家的积极参与！ 蛋白版的公共邮箱为：dxyprotein@163.com ，大小2G,最大附件30Ｍ。点击此处去邮箱为方便大家上传及下载资料，此邮箱已经开放使用，公共邮箱的设想及初步使用方法的相关内容请参看下帖，欢迎大家多提宝贵意见，谢谢 ...

1 蛋白质含量测定法2 WESTERN PROTOCOL3 Western免疫印迹（Western Blot）4 蛋白质沉淀法5 蛋白质提取的方法总汇 1 蛋白质含量测定法本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十 ...

求助：DTT的化学结构式。求助：急寻cayman公司国内代理Purification of a therapeutic recombinant protein using expanded bed adsorption chromatography:protoOptimal solubilization screening strategies for GST-fusion membrane proteins:protocol请教原核表达的问题，为啥没见表达针对蛋白测序 ...

首先欢迎您到蛋白质技术版块来，头次为客，下次为主，希望您在本版有收获，也希望您伸出热情的双手帮助处在实验困难中的战友。如果您已阅读了本版的规则，您已经不全是一名新手了。本话题祝贺您进入下一个阶段，如何使用丁香园资源。这只是一个简装本，更详细更具体的指南，您可在丁香园 --- FTP 资源讨论版找到。链接是：http://www.dxy.cn/bbs/post/page?bid=86&sty=1&age=0进入话题前重申：丁香园资源都由热心 ...

做实验熬夜，暂时只能整理这么些了。：）浅谈分子伴侣与蛋白质折叠http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=451813&sty=1&tpg=3&age=0蛋白一级结构预测三级结构的软件或网站http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=701140&sty=1&tpg=5&age=0《Protein Structure,Stability, and Folding》http:/ ...

1.GST-Pull-Down原理http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3828600_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1168462_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1197579_0.html2.GST-Pull-Down试剂盒购买http://www.dxy. ...