分子实验

利用转基因手段为主的反向遗传学实验设计时，通常要求外源基因按照预先设定的模式进行表达，而有关特定启动子的基因表达谱信息则很有限。鉴于相同的启动子-转基因构建在不同的物种中可产生不同的表达模式，预先确定待转化外源基因的表达模式就显得尤为重要。本章就禾谷类作物已鉴定的组成型、特异型或诱导型启动子进行了比较。

燕麦是一种在全球广泛种植的温带禾谷类作物，对干旱和/或高盐造成的渗透胁迫缺乏耐受能力。为了实现对现有商业化的燕麦栽培品种的遗传转化，我们建立了一套不受基因型影响的高效茎尖分生组织再生体系，4个燕麦品种 Prairie、Porter、Ogle和 Pacer 都能在体外高效地从茎尖分生组织分化出再生苗。应用这一再生体系，我们用基因枪对3个燕麦品种进行了质粒 pBY520 (带有 hva1 和 bar)和 pActl-D(带有gus)的共转化。用除草剂抗性和GUS作为标记，选择转基因阳性株系。用分子和生化的方法分析可能的转基因阳性株系，发现其中 100% 的植株带有 hva1和 bar基因，61.6%的植株同时带有三个基因（hva1、bar和进一步分析R0、R1、R2代转基因植株，显示三个基因都已稳定地整合到基因组中，其分离比符合孟德尔遗传。组织化学分析显示，在维管组织和成熟颖花的花粉粒中GUS表达水平较高。免疫化学分析显示hva1 在各个发育时期组成型表达，不过在苗早期表达水平较高。 我们分析了燕麦转基因后代 HVA1 的表达对其体内及体外渗透胁迫耐受性的影响。转基因燕麦对胁迫条件的耐受

高通量测序技术已广泛应用于植物研究中，但植物材料中较多的蛋白质、多糖以及酚、脂类等次生代谢物质，提取核酸的难度往往比动物或原核生物样本大，因此如何从植物样本中得到高质量的核酸进行后续的测序，成为在植物高通量测序应用中的首要因素。根据核酸类型，可有如下制备方法可参考：1. 植物基因组 DNA主要应用于植物的全基因组测序、重测序等。植物的全基因组测序要求基因组 DNA 量至少在 50~100 μg，可采用经典的 CTAB 抽提方法，配方和步骤如下： ...

一、实验目的 1.了解植物组织中叶绿素的分布及性质。 2.掌握测定叶绿素含量的原理和方法。 二、实验原理 叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳定，对光、热较敏感；在酸性条件下叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于 ...

美国研究人员5日在美国《胃肠病学》杂志上发表研究报告称，大量摄入叶酸可以降低患结肠癌的风险。 美国癌症学会的研究人员在1999年至2007年对近10万人展开了研究，其中一部分人有大量摄入叶酸的习惯。在这期间，1023人被诊断出患结肠癌。结果显示，在两年内人们摄入多少叶酸对罹患结肠癌的影响差别不大，但坚持大量摄入叶酸两年以上者，患结肠癌的风险明显降低。 研究报告的主要作者、美国癌症学会的维多利亚史 ...

果蝇是最好的胚胎发育和功能性神经系统科学研究模型。视频将介绍果蝇胚胎的收集和准备方法，接下来可作胚胎电生理学记录及其它实验。

Use from 0.01 - 0.1 gram plant material.Grind the plant material with liq.N2 in a mortar.We normally use some alumina to crush hard tissue.Transfer the ground tissue to a eppendorf tube.Add 1 ml extra ...

研究人员在Plant Biotechnology Journal发表文章称，表达了StGCL-GS的转基因烟草的叶子中GSH的积累量非常高（最高达12μmol GSH/gFW，取决于不同的发育阶段），这一数值是野生品种含量的20~30倍，而且在施加硫酸盐肥料的情况下还会进一步提高。研究人员还说这种转基因作物对非生物胁迫的耐受性也得到加强。因为StGCL-GS的表达不会对植物生长产生影响，因此可与现在的酵母生产体系进行竞争。

还原型抗坏血酸（AsA）可以把铁离子还原成亚铁离子，亚铁离子与红菲咯啉反应形成红色螯合物。在534nM波长的吸收值与AsA含量正相关，故可用比色法测定。脱氧抗坏血酸（DAsA）可由二硫苏糖醇（DTT）还原成AsA。测定AsA总量，从中减去还原型AsA，即为DAsA含量。

LoWry法是双缩脲法（Biuret）和福林酚法（Folin-酚）的结合与发展。LoWry法适于微量蛋白的测定，对多个样品同时测定较为方便。但对不溶性蛋白和膜结合蛋白必须进行预处理。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

水果、蔬菜中含糖量的多少，也是鉴定其品质的重要指标。其它碳水化合物，如淀粉、蔗糖等，经水解也生成还原糖。因此，测定还原糖的方法在研究植物体内生理生化变化和测定植物体内碳水化合物方面都是很重要的。

脂肪含量的测定有很多方法，如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、电测和核磁共振法等。目前国内外普遍采用抽提法，其中索氏抽提法（Soxhlet extractor method）是公认的经典方法，也是我国粮油分折首选的标准方法。

Reagents (a) Metaphase arresting agents: Choose one of the following (Note 2) and shake vigorously to aerate before putting in living plant material; except for ice water the solution should be ...

Generation of a Light Curve To address the hypothesis concerning photosynthetic efficiency it is necessary to expose sun and shade leaves to a range of light intensities long enough for them to fix s ...

1 植物群体遗传蛋白质组学 1.l 遗传多样性蛋白质研究 基于基因组学的一些遗传标记，如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequence Repeat)、ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat)等，已经广泛 ...

植物病毒病是农业生产上一种重要病害，严重影响农作物的产量和质量 目前还没有1种治疗效果较理想的药剂，对发病植株做到早期诊断及提前检测就显得尤为重要。植物病毒学历经近百年的发展，植物病毒的检测方法与手段也在不断发展与改进。常用的方法有侵染力测定法、血清学方法、电子显微镜计数和分子生物学法等。 1.4.1侵染力测定法 侵染力测定法是将病毒样本接种在植物上，根据侵染力的大小定量。它的灵敏度在所有定量 ...

This protocol is adapted from protocols by Nicole Bechtold (Bechtold et al. 1993) Andrew Bent (Bent et al. 1994) and Takashi Araki. No claims are made that any of the steps are necessary or ideal; the ...

day 1 1. Start 75 mL overnight cultures of agro (strain GV3101 C58C1 Rifr pMP90 Gmr Koncz & Schell) in YEP in 250 mL baffle flasks. 2. Grow at 28 °C shaking. 3. Prepare: ~ 3.5 L sterile H2 ...

(Brief version for those who are familiar with the method) Steve Clough and Andrew Bent University of Illinois at Urbana-Champaign. Our present protocol (Clough and Bent 1998; modified from Bechtold ...