化学生物学实验技术

在肽合成的技术方面取得了突破性进展的是R.Bruce Merrifield，他设计了一种肽的合成途径并定名为固相合成途径。由于R.Bruce Merrifield在肽合成方面的贡献，1984年获得了诺贝尔奖。下图给出了肽固相合成途径的简单过程（合成一个二肽的过程）。 氯甲基聚苯乙烯树脂作为不溶性的固相载体，首先将一个氨基被封闭基团（图中的X）保护的氨基酸共价连接在固相载体上。在三氟乙酸的作用下，脱 ...

合成的理论来讲主要就是把氨基酸按一定的顺序排列起来，利用氨基和羧基的脱水形成肽键，进而形成我们所需要的结构。为了避免副反应的进行，我们需要事先把不需反应的氨基进行保护，使它们在合成过程中不会参与反应，从而避免副产物的生成。否则，一般羧基活化方法使反应活性提高的同时总伴随着反应选择性下降;反之，选择性虽然改善，但反应活性则又不够。 因此，肽合成的根本问题是氨基的保护问题。合成多肽可以通过溶液相和固相 ...

基于将单个N-α保护氨基酸反复加到生长的氨基成份上，合成一步步地进行， 通常从合成链的C端氨基酸开始，接着的单个氨基酸的连接通过用DCC，混合炭酐， 或N-carboxy酐方法实现。Carbodiimide方法包括用DCC做连接剂连接N-和C-保护氨基酸。重要的是， 这种连接试剂促接N保护氨基酸自己炭基和C保护氨基酸自由氨基间的缩水，形成肽链， 同时产出N，N?/FONT>-dy ...

多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序一般从C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成。固相合成法，大大的减轻了每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链都是保护的。羧基端是游离的，并且在反应之前必须活化。固相合成方法有两种，即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很多优势，现在大多采用Fmoc法合成。 具体合成由下列几个循环组成： 1. 去保护：Fmoc保护的柱 ...

本实验中由苯胺和醋酸经高温脱水而生成酰胺，由于反应温度高，会引起反应原料苯胺的氧化，所以此反应中加入还原剂金属锌以抑制苯胺的高温氧化。 本实验中产品是经水结晶而纯化的，结晶是最简单、有效、经济的纯化手段，结晶时常有少量絮状物不溶，导致加入过多溶剂形成不饱和溶液，使结晶收率低或不结晶。为此结晶溶液需过滤除去絮状不溶物杂质，对于遇冷结晶的溶液需保温过滤。为了得到好的结晶，常需保温结晶，结晶时间较长。 ...

1. 如何保存合成的多肽？ 多肽在-20℃很稳定，特别是冷冻干燥并保存在干燥器中，在将它们暴露于空气之前， 冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少，当无法冷冻干燥时，最好的方法是以小的工作样量存放。 对于含Cys Met orTrP的多肽，脱氧缓冲剂对其溶解必不可少，因为这种多肽可易空气氧化， 在封瓶前，慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解，所有这些肽 ...

倘若要将两种模拟肽段A和B（两者的氨基酸序列已知且已制备成功）合成一种新的嵌合肽，其多肽合成策略是否应该选用“固相合成法”中的以下策略：在固相载体上进行片段组合，即把一个个纯制过的保护多肽片段按次序接到固定在载体上的一个多肽片段上，从而得到需要的多肽。 也有文献提示，只需把A和B共轭联合在一起便可以到嵌合肽C（因为嵌合肽C仅仅是A和B的单纯连接，而并不改变A和B的序列）.倘 ...

固相合成法对于肽合成的显著的优点：简化并加速了多步骤的合成；因反应在一简单反应器皿中便可进行，可避免因手工操作和物料重复转移而产生的损失；固相载体共价相联的肽链处于适宜的物理状态，可通过快速的抽滤、洗涤未完成中间的纯化，避免了液相肽合成中冗长的重结晶或分柱步骤，可避免中间体分离纯化时大量的损失；使用过量反应物，迫使个别反应完全，以便最终产物得到高产率；增加溶剂化，减少中间的产物聚焦；固相载体上肽链 ...