化学生物学实验技术

基因芯片的制造技术主要有原位合成技术和点样技术。目前流行的基因芯片大致可分为以下四类：(一).光引导原位合成DNA微阵列 光引导聚合技术是原位合成的主要技术，照相平板印刷技术（photolithography）与传统的核酸、多肽固相合成技术相结合的产物。半导体技术中曾使用照相平板技术法在半导体硅片上制作微型电子线路。固相合成技术是当前多肽、核酸人工合成中普遍使用的方法，技术成熟且已实现自动化 ...

功能克隆是从异常表型人手，找出造成这种表型的代谢缺陷或蛋白质结构异常，如酶的失活或缺失，结构蛋白质分子的异常等，最后确定编码这种蛋白质的基因并将其定位。换句话说，这是从表型异常出发，找出导致出现异常表型的异常功能蛋白质，根据蛋白质的氨基酸序列推导出编码的核苷酸序列，以此作为探针，在基因组文库或cDNA文库中去筛选目的基因或目的cDNA，最后克隆和定位这种异常蛋白质的编码基因。与苯丙酮尿症相关的酪氨 ...

定位克隆首先是获取基因在染色体上的位置的信息，然后采用各种实验方法克隆基因和进行定位。基因的定位克隆策略大体上可以分成四个步骤。①通过家系连锁分析资料或染色体微小缺失(杂合性丢失，LOH)等数据，确定基因在染色体上的位置；②通过染色体步移(chromosome walking)、染色体区带显微切割等技术，获得基因所在区段的DNA片段叠连群(contig)，绘制出更精细的染色体图谱；③确定含有候选基 ...

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一般说来应用DNA芯片进行实验包括5个过程：生物学问题的提出和芯片设计；样品制备；生物杂交反应；结果探测；数据处理和建模。 1．样品制备。一般所需mRNA的量是以一张表达谱芯片需要3μg mRNA计算的不同组织抽提3－10μg mRNA所需组织量 器官/组织提取3μgmRNA所需组织量(克)提取10μgmRNA所需织量(克)总RNA得率单位:毫克RNA/克组织mRNA所占百分比成人正常组织肝0. ...

体细胞是生物体除生殖细胞外的所有细胞。将从身体分离的体细胞做组织培养进行遗传学研究的学科称为体细胞遗传学（somatic genetics）。体外培养细胞可人为控制或改变环境条件，并可建立细胞株，长期保存，进行各种正常和病理研究。与基因定位有关的是体细胞杂交（somatic cell hybridization）。细胞杂交又称细胞融合（cell fusion），是将来源不同的两种细胞融合成一个新细 ...

一旦生物样品被收集采摘，它的RNA会立刻变得非常不稳定，极易被降解。由于特异及非特异的RNA降解，或者由于应激反应产生新的RNA都会引起RNA状态的改变。对于生物芯片、基因表达矩阵分析（Array Analysis）、定量RT-PCR等实验来说，采样后立即稳定样品里的RNA以保存当时RNA的表达状态，是精确/定量研究基因表达分析的重要前提。为了达到这个目的，往往需要将液氮或者干冰带到采样现场，采样 ...

克隆嵌板法（clone panel method）是应用杂种细胞保留或丢失人染色体有时有重叠现象而设计的一种简便有用的基因定位方法。如果某一表型特征只出现于克隆A、C而不见于B，就可决定该特征的基因只能在3号染色体上，因为A、C克隆都有3号染色体，而B克隆则无，其它亦可同理判断这样3个克隆可对8条（23=8）染色体作出判断；如果是5个克隆（25=32）就可对人类22条常染色体和2条性染色体作出判断 ...

体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究有助于我们了解蛋白质结构和功能的关系，探讨蛋白质的结构/结构域。而利用定点突变技术改造基因，相信大家也非常熟悉 ...

无论是从一个胚胎细胞分化为不同的组织器官，或者是从正常的组织突变为肿瘤组织，都可能涉及在同一基因组背景下不同基因的差异性表达。寻找差异表达的基因就有可能揭示细胞分化的机制或者肿瘤的成因，因而也就成为一项热门的技术。 寻找差异表达的基因有不少方法，抑制消减杂交（SSH）是比较有效的一种方法。以Clontech的PCR-Select cDNA Subtraction Kit为例：将样品（test ...

单拷贝克隆产量低，高拷贝克隆稳定性差，一直让研究者在克隆表达时难以选择。蛋白的表达就有诱导表达系统，可以实现人为地控制蛋白的表达时间和表达量——现在连质粒的拷贝数可以借助诱导的方法来人为控制了！Epicentre的专利技术——CopyControl克隆系统能够让您共享单拷贝和高拷贝的优点。CopyControl克隆首先以单拷贝形式生长——单拷贝可以确保插入稳定及成功克隆编码毒性基因序列——在需要的 ...

如何设计有效的siRNA一直是当前RNAi研究的热点话题，不同的实验室有不同的结果，生物通将陆续为你介绍有关siRNA设计的最新资讯。1.从转录本（mRNA）的AUG起始密码开始，寻找“AA”二连序列，并记下其3’端的19个碱基序列，作为潜在的siRNA靶位点。有研究结果显示GC含量在30%—50%左右的siRNA要比那些GC含量偏高的更为有效。 Tuschl等建议在设计siRNA时不要针对 ...

差异消减展示(differential subtraction displayDSD)是1998年Jose等针对差异展示的缺点而提出的改进方法。此法可显著降低假阳性，增强重复性及敏感性，同时保持了对轻度、中等程度改变的(up- or down-regulation)RNA的识别。它的最大改进是：在DDRT-PCR呈现出差异条带之后，克隆差异条带之前，先对PCR扩增产物进行消减杂交，即在回收目的方差 ...

蛋白质是构成生命体的最小活性单位，按目前的认识，人体中存在着十万种以上的蛋白质，它们在肌体中分别承担不同任务，发挥着各自的作用。而蛋白质的组成具有多样性和可变性，蛋白质的表达受着多种因素的调控，在生命发育不同阶段的蛋白质的种类和构成是不一样的，不同的组织中细胞表达的蛋白质也有很大的差异，在病理或治疗过程中，细胞蛋白质的组成及其变化与正常过程中的不同，因此，蛋白质研究是在一个更加深入、更贴近生命本质 ...

甲基化研究对于基因的调控和肿瘤的发生有非常密切的关系。在一般正常的细胞中，基因调控区CpG岛处于非甲基化的状态。而当细胞发生癌变后，这些CG区域往往呈现甲基化状态。英国医学刊物《Lancet》报道奥地利因斯布鲁克医学院的专家们早就可以通过检测大便中DNA的甲基化变化，把健康人的大便与结肠癌患者的大便区分开。大便标本中SFRP2 甲基化的程度是诊断结肠癌最灵敏的标记。研究人员发现，肿瘤的发生以及一 ...

原理和应用： Ettan DIGE荧光差异蛋白表达分析系统在传统双向电泳技术的基础上，结合了多重荧光分析的方法，在同一块胶上共同分离多个分别由不同荧光标记的样品，并第一次引入了内标的概念，极大地提高了结果的准确性，可靠性和重复性。在DIGE技术中，每个蛋白点都有它自己的内标，并且软件全自动根据每个蛋白点的内标对其表达量进行校准，保证所检测到的蛋白丰度变化是真实的。DIGE技术可检测到样品间小 ...

（一）透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30％－40％浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后，可放入温箱中烘干或自然干燥后，仍可再用。（二）冷冻干燥浓缩法这是浓缩蛋白质的一种较好的办 ...

1．凝胶的选择 根据层析物质分子量的大小选择不同型号的凝胶，如除盐和除游离的荧光素，则可选用粗、中粒度的G28或G500，G250多用于分离蛋白质单体，G200多用于分离蛋白质凝胶聚合体等。2．凝胶的预处理 称取适量的凝胶加入过量的缓冲液在冰箱（或室温）中充分膨胀，或在沸水中煮，膨胀时间应根据不同型号的凝胶而定。为使粒子均匀一致需进行浮选，即加入凝胶粒子后，轻轻搅拌，静置20min，倾去沉淀的 ...

技术主要特点捕获中度纯化精制样品起始状态样品最终状态IEX高分辨率高容量高速度★★★★★★★★★低离子强度样品体积不限高离子强度或pH改变。样品浓缩HIC分辨率好容量好高速度★★★★★★高离子强度样品体积不限低离子强度样品浓缩AC高分辨率高容量高速度★★★★★★★★结合条件特殊样品体积不限洗脱条件特殊样品浓缩GF高分辨率（使用Supedex） ★★★★样品体积（总柱体积的5%）和流速范围有限制缓冲 ...

（一）基本原理 混合样品的气流通过固定相时，根据各组分对固定相的吸附强弱不同使不同成分得到分离。 利用气相色谱层析技术做为微生物诊断的工具已成功地用于微生物的分类和鉴定。该法敏感性强，能够分离和检测到毫微克的水平。它具有快速的特点，常在数十分钟甚至数小时就可以对传染病做出早期诊断。其结果稳定，重复性好，但不足之处是操作中各因素不易控制，方法不易标化等。 （二）气相色谱仪的基本部件 ...