细胞功能测定

相关专题 1.打开无菌工作台及净化室的紫外灯，消毒半小时以上。 2.进入净化室前先关闭紫外灯，打开超净台风机，等待30min以上，以排尽臭氧。 3.穿好隔离衣，戴好口罩，帽子。 4.风淋2分钟。 5.0.1%过氧乙酸水泡手，擦干。 6.点燃酒精灯;超净台内应避免放入过多的物品;使用的吸管，滴管，试管，培养瓶等均事先灭菌。 7.打开各类瓶盖前 ...

相关专题 生命活动的基本单位——细胞 细胞因受严重损伤而累及胞核时，呈现代谢停止、结构破坏和功能丧失等不可逆性变化，此即细胞死亡。死亡的原因很多，一切损伤因子只要作用达到一定强度或持续一定时间，从而使受损组织的代谢完全停止，就会引起细胞、组织的死亡。在多数情况下，坏死是由组织、细胞的变性逐渐发展来的，称为渐进性坏死。在此期间，只要坏死尚未发生 ...

相关专题 MEM培养基常常用于培养哺乳动物贴壁细胞的培养，增加或者减少MEM培养基中的某些成分即可用于其它类型的细胞培养。alpha-MEM培养基中的成分也比MEM要多很多，常被用来培养比较难培养的细胞。 一、alpha-MEM 的成分列表如下: COMPONENTS Molecular Weight Concentration (mg/ ...

相关专题 N2培养基是细胞分化中运用的一种培养基，主要包括成份为：DMEM/F12，N2添加剂(N2 supplement )，谷氨酰胺，青霉素，链霉素， Hepes和，肝素等，N2 supplement购买的一般是gibico的，那么如何配置N2 supplement呢?N2 Supplement操作流程是什么呢? 怎样配制N2 supp ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 一、筛选之前确定G418浓度： 1、由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为0.722g。 2、G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是新霉素对真核细胞无作用而G418对细菌和真核 ...

相关专题 在稳定转染实验中，G418的地位毋庸置疑。本文对G418的基本信息、使用方法、浓度选择、实验PROTOCOL、实验心得做详细介绍。 基本信息 G418是一种氨基糖苷类抗生素，这种氨基糖类抗生素的结构和新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似，在分子遗传试验中，是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。它通过抑制转座子Tn601，Tn5的基因，干扰核糖 ...

相关专题 细胞培养基的配制细胞培养专题ELISA免疫实验技术 大部分ELISA 检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP 为标记的ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。 ...

相关专题 RNA转染技术是将RNA分子如mRNA、siRNA、病毒RNA等导入细胞并进行表达的过程。RNA转染技术主要用于研究RNA的功能，其中miRNA的转染已经成功应用于抑制目的基因的表达及其功能研究中。 不同的实验技术都是为了满足不同的实验需要，RNA转染提供了另一种有别于DNA转染的研究探索手段——直接将体外翻译的RNA、或者病毒 ...

相关专题 TOR属于PIKK超家族，最先发现TOR是在酵母中。mTOR信号通路在酵母中的功能主要是感受酵母自身的营养状况，从而控制细胞的生长，在适宜条件下mTOR通路就会被激活促进酵母细胞的生长和出芽。 mTOR信号通路是调控细胞生长与增殖的一个关键通路，该通路将从营养分子、能量状态以及生长因子传来的信号整合在一起，调控大量的生命过程，包 ...

相关专题 一般干细胞的冻存方法 1、材料： 生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene　5000-0020)、0.4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII)。 2、冷冻保存方法： ( ...

相关专题 细胞冻存有两种方法：传统的方法是利用冷存管处于4℃、 -20℃、 -80℃保存，程序降温方法是利用程序降温盒设定程序由室温降低至-80℃，最后再放置到液氮槽中长期保存。程序降温盒的使用注意事项如下： 实验室虽然有程序降温冻存盒，但怎么使用一直都搞不明白，我觉得是不是应该把程序降温冻存盒先从-80度移到室温放一段时间(细胞刚开始还 ...

相关专题 在实验室中，M199培养基可分为粉状和液体两种形式，主要应用于细胞培养。本文介绍M199培养基的组成成分、主要性状、配制和贮存方法、以及有效期限等，以利于大家对其正确有效地使用。 一.【组成成分】 无机盐：氯化钠、氯化钙、氯化钾、无水磷酸二氢钠、六水合氯化镁等。 氨基酸：L-盐酸精氨酸、L-盐酸赖氨酸、L-谷氨酰胺、L-酪氨酸、L ...

相关专题 Invitrogen—全球领先的生命科技公司 说到转染，怎么能忘了Invitrogen，也就是现在的Life Technologies呢?自1993年Lipofectamine™ 试剂上市以来，它一直是市场上卖得最火的转染试剂。直到后来Lipofectamine 2000、RNAiMAX、LTX上市，Lipo旋风越刮越猛。至于小分子 ...

相关专题 不可不知的细胞检测方法——MTT 1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行mtt 试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证 ...

相关专题 Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深;细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细 ...

相关专题 不可不知的细胞检测方法——MTT mtt主要有两个用途 1.药物(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培养的细胞毒性的测定; 2.细胞增殖及细胞活性测定。 检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲 ...

相关专题 不可不知的细胞检测方法——MTT 通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。 需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活 ...

相关专题 不可不知的细胞检测方法——MTT 细胞过了30代以后就不要用了因为状态不好了;培养板要用好的(最好进口板)，不好的板或重复利用的板只可做预实验。 接种时最好按照预实验摸索出的密度接种 因为细胞密度在10000/ml左右时，所测得的OD值的区间即细胞抑制率(或者增值率)的所呈现的线性关系最好，结果最可信。如果铺的太稀细胞的杀伤不会很明 ...

相关专题 不可不知的细胞检测方法——MTT 1. Fen细胞培养于含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中，在25cm2培养瓶中生长到接近汇合。用含0.05%胰蛋白酶，0.02% EDTA的PBS消化细胞5分钟，洗涤后，用细胞培养液将细胞配成1×105/ml。 2. 取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml细胞悬液，在37℃ 5% CO2的饱 ...

相关专题 不可不知的细胞检测方法——MTT 1．取96孔细胞培养板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2～3小时让细胞帖壁（如果是悬浮细胞可直接进行下一步） 2．用RPMI-1640培养液2～10倍递次稀释细胞因子标准品 ...