细胞功能测定

相关专题 293细胞 关于293/293T细胞 1、种属都为人，不是鼠。 2、来源：293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%。蛋白表达水平高，转染后2-3天用碱性磷酸酶分析可较容易地检测到表 ...

相关专题 293细胞总有一种转染方法适合你 一.试剂配制 无菌水ddw： 高温灭菌; 分装; 2XHBS： 280mM NaCl 10mM KCl 1.5 mM Na2HPO4 12 mM glucose 50 mM HEPES Adjust the pH every 0.05pH from 7.00 to 7.45 using 10N N ...

相关专题 293细胞总有一种转染方法适合你 问： 我是新手，我想将一个构建的真核表达载体转染进HEK293细胞中，有人说要先将质粒线性化，也有人说不用，不知道到底应该怎样呢?如果需要线性化，具体怎么操作呢?谢谢了! 答： 要看你的目的，是做瞬时表达还是稳定表达，做稳定表达，为了更好的整合到细胞的基因组上，可将质粒线性化，选择好酶切位点。不酶切 ...

相关专题 293细胞总有一种转染方法适合你 问：我在24孔板里做293细胞的转染，转染试剂是Invitrogen的Lipofectamine2000。奇怪的是，每次加完DNA- Lipofectamine complex，24个孔当中的后面几个孔(比如最后6个孔)里的细胞就明显有一部分死亡，死亡率是10-30%，通常最严重的是最后两个孔。但是 ...

相关专题 293细胞总有一种转染方法适合你 ViraPackTM 病毒转染试剂盒 ——专为转染HEK 293细胞而设计 以病毒为载体将外源基因导入那些难以用质粒-转染试剂法转染的细胞或组织，不仅效率高，而且有可能避免由于转染试剂的毒性造成的假象，因此病毒转染法在基因功能研究中正变得越来越重要了。在制备具有感染能力的病毒颗粒的过程中有几个非常关 ...

相关专题 293细胞 人胚肾细胞系293是一种E1区缺陷互补细胞系。用磷酸钙共转染法很容易使DNA进入细胞。悬浮的293细胞很容易大规模培养，但不容易长期保持稳定，应用时最好采用单层培养。 传达次数较少的单层培养293细胞是成功获得重组病毒和病毒斑的关键。293细胞的培养质量特别是单层培养的品质情况是病毒斑形成的重要因素。也是重组子构建成功与 ...

相关专题 1.细胞种类：293细胞是用5型腺病毒75株系转化，含有Ad5 E1区的人胚肾细胞 2.培养的天数：3天 3.放大倍速：倒置荧光显微镜10×10+（数码拍的） 4. 培养基种类：DMEM+15%胎牛血清+1%非必需氨基酸+双抗 5.细胞状态与特征简述：293细胞是 ...

相关专题 293细胞总有一种转染方法适合你 问：本人刚接触细胞转染，使用的是HEK293和invitrogen的lipo 2000及质粒和opti-mem，看其protocol，有几点疑问：1、种板24h后，是否需要把无抗的DMEM换成opti-mem，再进行转染?如果不换，对转染效率是否有影响?2、HEK293贴壁不是很好，中间换液过程有比 ...

相关专题 293细胞总有一种转染方法适合你 问：我用lipofectamine 2000转染293ft细胞，细胞老是死亡，是什么原因?求各位先知不吝赐教。我的protocol如下： Day 0：细胞传代后计数、seed 2.0x105Cells and 1.0x106 cells per well of plate Day 1：细胞达到70% ...

相关专题 Primary MEFs reprogrammed under suspension culture conditions. 尽管干细胞被广泛地用来测试新药，但是研究人员总是很难在体外生产足够多的有活性的干细胞。通常干细胞是在必须经过刮擦的平面上培养的，然后它们必须分化为其他细胞类型以便阻止这些非常重要的细胞死亡。经证实，这是一 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 Note: This protocol has been optimized for Cos-1 Cells. Successful transfection of each cell type requires optimization of the basic protocol. Variables to ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种： 1.磷酸钙共沉淀 将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成功至关重要。 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 DEAE-葡聚糖介导的转染，其原理还不清楚，可能是通过内吞噬作用而使DNA转导进入细胞核，此法只适合暂时转染实验，转染效率与DEAE-葡聚糖浓度以及细胞与DNA/DEAE-葡聚糖混合液接触时间的长短很有关系，可采用较高浓度的DEAE-葡聚糖(1g/L)作用较短时间(30分钟-1.5小时)，又可用较低浓度(25 ...

相关专题 转染 ，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介 ...

相关专题 基因转染技术在基因治疗和基因组功能研究方面具有广泛应用。其目的是要达到设置转染效率，转染方法不少，根据不同的细胞，贴壁或悬浮细所可选用不同的方法。另外影响转染产率的因素有多种，包括转染方法、操作技术、质粒DNA的纯度、靶细胞的生长状态等。常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法，基因转染技术则是将纯化的含有 ...

相关专题 仪器用具： 37℃培养箱及冰浴 Electroporation cuvette (electrode gap 0.1 cm) Electroporator (Bio-Rad IBI geneZapper 或其它厂牌) 药品试剂： 无菌水 (置冰浴中) 10% glycerol (置冰浴中) SOB 液体培养基 SOB 固体培养基 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 一些真核蛋白在原核宿主细胞中的表达不但行之有效而且成本低廉，然而许多在细菌中合成的真核蛋白或因折叠方式不正确，或因折叠效率低下，结果使得蛋白活性低或无活性。不仅如此，真核生物蛋白的活性往往需要翻译后加工，例如二硫键的精确形成、糖基化、磷酸化、寡聚体的形成或者由特异性蛋白酶进行的裂解等等，而这些加工原核细胞则无 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 DXY721认为： 悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大，主要差别在于转染后的筛选，当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。 其实转染的过程很简单，问题是能不能转的进去的，转染率能有多少，转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。 我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染，说明书上都有具体的操作过程，将脂质体和目的 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 知己知彼，方能百战不殆。做细胞转染也一样道理。细胞转染实验的影响因素很多，如需要转染的细胞类型(对于困难的细胞系尤其如此)，需要被转染的分子(DNA、RNA、寡核苷酸、蛋白质)，转染试剂等。但无论在何种情况下，以下八个要素都不容忽视。 要素一：细胞 分裂细胞相比较非分裂细胞——分裂细胞往往要比静止细胞更易于摄 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 pazj：我的细胞转染48h后在荧光显微镜观察，细胞形态还正常，消化传代以后加G418做稳转，加药以后头两天看，细胞形态还是正常的，但是第三天开始就缩小成小圆点了，感觉就和加胰酶消化后的细胞形态，不知道这个时候细胞是死是活?我还要继续加药吗?还是重新做转染? lanniaoxxx认为： 这种情况应该是细胞死亡 ...