细胞功能测定

1．Transwell肿瘤细胞迁移实验过程与Transwell侵袭实验基本一致，不同的只是不需要铺Matrigel。个人认为，由于没有基质胶的阻挡，细胞穿过膜的速度较侵袭实验明显加快，所以细胞量要更大。我做侵袭实验的细胞密度是1×105，而迁移实验的密度是1×106。另外，下层培养液的FBS浓度也可适当下调，我做侵袭实验的浓度是5%，迁移实验的浓度是2.5%。2．Transwell上皮细胞培养步骤 ...

293细胞培养293细胞是用5型腺病毒75株系转化，含有Ad5 E1区的人胚肾亚三倍体细胞系，是一种E1区缺陷互补细胞系。它是加拿大McMaster University的F.L.Graham与J.S.Miley于1976年用DNA转染技术构建而成。293细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞，表现出典型的腺病毒转化细胞的表型，细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。哺乳细胞的大规模培养方式有三种：贴壁 ...

293细胞培养293细胞是用5型腺病毒75株系转化，含有Ad5 E1区的人胚肾亚三倍体细胞系，是一种E1区缺陷互补细胞系。它是加拿大McMaster University的F.L.Graham与J.S.Miley于1976年用DNA转染技术构建而成。293细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞，表现出典型的腺病毒转化细胞的表型，细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。哺乳细胞的大规模培养方式有三种：贴壁 ...

1..培养人脐静脉内皮细胞：1 材料与方法1．1 材料1．1．1 新生儿脐带 由重庆医科大学附属第一医院提供。在无菌条件下，于健康产妇分娩后立即取新生胎儿脐带。长度20 cm，两端扎紧投入到4℃脐带保存液中，1 h内送细胞培养室。1．1．2 仪器与试剂倒置相差显微镜(日本Olympus公司)；超净工作台(苏州净化仪器厂)；5％C02培养箱(美国Heraeus公司)；离心机(上海安亭仪器厂)；2 ...

1..培养人脐静脉内皮细胞：1 材料与方法1．1 材料1．1．1 新生儿脐带 由重庆医科大学附属第一医院提供。在无菌条件下，于健康产妇分娩后立即取新生胎儿脐带。长度20 cm，两端扎紧投入到4℃脐带保存液中，1 h内送细胞培养室。1．1．2 仪器与试剂倒置相差显微镜(日本Olympus公司)；超净工作台(苏州净化仪器厂)；5％C02培养箱(美国Heraeus公司)；离心机(上海安亭仪器厂)；2 ...

前几天为自己养的PC12是未分化还是分化型困扰查了一些资料现发上来希望能给有同样问题的战友有一点帮助!培养条件:ＰＣ12细胞培养于铺有鼠尾胶原的玻璃培养瓶中置于ＣＯ2培养箱(37℃95%空气5%ＣＯ2)培养基选用ＤＭＥＭ(ｐＨ7.4高糖)加入10%灭活小牛血清及5%灭活马血清。分化前:ＰＣ12细胞在培养基中多呈圆形直径15～20μｍ也有椭圆或多角形的扁平的细胞少见倾向于聚集成小团簇状(A图)。分化 ...

前几天为自己养的PC12是未分化还是分化型困扰查了一些资料现发上来希望能给有同样问题的战友有一点帮助!培养条件:ＰＣ12细胞培养于铺有鼠尾胶原的玻璃培养瓶中置于ＣＯ2培养箱(37℃95%空气5%ＣＯ2)培养基选用ＤＭＥＭ(ｐＨ7.4高糖)加入10%灭活小牛血清及5%灭活马血清。分化前:ＰＣ12细胞在培养基中多呈圆形直径15～20μｍ也有椭圆或多角形的扁平的细胞少见倾向于聚集成小团簇状(A图)。分化 ...

本人总结了下大鼠内皮细胞的培养方案一，消化法。优点：获得的细胞比其他方法纯。缺点：获得细胞比较少。常见问题及解决方法：1.消化的时间不好控制时，建议大家分两段时间消化，消化30分钟时收取消化液放入一个离心管，30分到45分钟段收集的放入另一离心管，离心后看看第二管是否有杂细胞，若没有就把两管混合用，若有就只用第一管的。2.消化液，我的经验是5份0.2％胶原酶和1份0.125％胰酶。3.若很难消化时 ...

本人总结了下大鼠内皮细胞的培养方案一，消化法。优点：获得的细胞比其他方法纯。缺点：获得细胞比较少。常见问题及解决方法：1.消化的时间不好控制时，建议大家分两段时间消化，消化30分钟时收取消化液放入一个离心管，30分到45分钟段收集的放入另一离心管，离心后看看第二管是否有杂细胞，若没有就把两管混合用，若有就只用第一管的。2.消化液，我的经验是5份0.2％胶原酶和1份0.125％胰酶。3.若很难消化时 ...

前阵子做单抗，做了几次细胞融合都没做出来，后面怀疑是SP2/0受支原体污染，细胞生长速度减慢，出现细胞碎片，换液后情况稍好。怀疑受污染后我对细胞做了一系列的处理，终于有一种处理成功地削除了支原体污染，细胞融合也成功了，现在单抗已经做出来。现在想把我的处理方法贴出来，希望对一些遇到同样问题的朋友有用。处理方法：以两种抗生素交替使用，第一种是2-3倍于正常浓度的双抗（青霉素、链霉素），第二种是10ug ...

前阵子做单抗，做了几次细胞融合都没做出来，后面怀疑是SP2/0受支原体污染，细胞生长速度减慢，出现细胞碎片，换液后情况稍好。怀疑受污染后我对细胞做了一系列的处理，终于有一种处理成功地削除了支原体污染，细胞融合也成功了，现在单抗已经做出来。现在想把我的处理方法贴出来，希望对一些遇到同样问题的朋友有用。处理方法：以两种抗生素交替使用，第一种是2-3倍于正常浓度的双抗（青霉素、链霉素），第二种是10ug ...

一、酶消化法。1、胰酶。这是用得最多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-20度。2、胶原酶。这种方法比较少，一般是用原代培养时，从组织消化下细胞。这种方法作用温和， ...

最近在培养细胞中使用胎牛血清由于发现有沉淀不知是否变质在查阅相关文献也没有得到确切的答案.因此不敢再用原来的血清导致浪费.在这提醒大家做细胞培养时要注意血清的分装.血清是细胞培养中最重要的元素之一。在实验室操作中要注意及处理方法：1. 血清保存: 建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。2. 解 ...

一、酶消化法。1、胰酶。这是用得最多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-20度。2、胶原酶。这种方法比较少，一般是用原代培养时，从组织消化下细胞。这种方法作用温和， ...

1　大鼠肝细胞的分离和培养　大鼠4％戊巴比妥麻醉，门静脉插管，先以无钙灌流液灌流，继以37℃通入O2的Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。将肝脏移至一平皿内，轻轻撕去肝包膜后，加入含5％小牛血清的清洗液，用吸管吹打成单个肝细胞悬液，200目尼龙网过滤，低速离心（500 r・min-1，1 min，4℃）弃上清，同法用清洗液反复洗3次。然后用完全1640培养液（内含10％小牛血清，105　U・ ...

1　大鼠肝细胞的分离和培养　大鼠4％戊巴比妥麻醉，门静脉插管，先以无钙灌流液灌流，继以37℃通入O2的Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。将肝脏移至一平皿内，轻轻撕去肝包膜后，加入含5％小牛血清的清洗液，用吸管吹打成单个肝细胞悬液，200目尼龙网过滤，低速离心（500 r・min-1，1 min，4℃）弃上清，同法用清洗液反复洗3次。然后用完全1640培养液（内含10％小牛血清，105　U・ ...

一、材料　纯系SD雄性大鼠，体重180g～200 g，由浙江大学医学院实验动物中心提供。食用酒精选用北京酿酒总厂出品的56度红星二锅头。二、方法　将大鼠随机分成5组，饲养在23℃～25℃室内，自由进食、进水；根据大鼠体重，A、B、C、D组每日用56°红星二锅头白酒以10ml/1Kg分别灌胃 0、4周、8周和12周；E组于酒精灌胃12周后，停止灌胃4周。大鼠通过股动脉采血处死，收集血浆和肝脏标本。三 ...

一、材料　纯系SD雄性大鼠，体重180g～200 g，由浙江大学医学院实验动物中心提供。食用酒精选用北京酿酒总厂出品的56度红星二锅头。二、方法　将大鼠随机分成5组，饲养在23℃～25℃室内，自由进食、进水；根据大鼠体重，A、B、C、D组每日用56°红星二锅头白酒以10ml/1Kg分别灌胃 0、4周、8周和12周；E组于酒精灌胃12周后，停止灌胃4周。大鼠通过股动脉采血处死，收集血浆和肝脏标本。三 ...

1.四氯化碳体外损伤肝细胞模型原代培养的正常大鼠肝细胞培养24h（贴壁良好）后，置培养皿于一密闭的塑料盒，内置四氯化碳0.4M容积，37度90min，造成肝细胞损伤的模型，后转入正常培养，进行下一步实验。(即熏蒸法)肝细胞培养12h后，吸弃上清，更换培养液并加入CCL4 8mM（事先用DMSO溶解，DMSO终浓度1％），作用6h后收集24孔板中培养上清检测AST以及肝细胞MDA含量盒GSHpx活性 ...

1.材料与方法取新生的wistar 大鼠脊髓剪碎0125 %胰蛋白酶消化1h 用含血清的DMEM培养液终止胰蛋白酶的作用; 而后吹打成散在的单个细胞进行细胞计数按5 ×105 个Pcm2 密度进行接种。培养至第10天时加10mM Leu2methy12ester 除杀小胶质细胞。于16d 时用塑料吸管头划刮培养皿产生三条宽约1mm长约1. 5cm 的损伤带对照组未划伤每组共分为7 个时间点分别是划 ...