相关专题 细胞培养相关用品细胞培养专题 器材与试剂 干粉型培养基、胰蛋白酶,青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器等 具体步骤 1. 水: 细胞培养用水必须非常纯净,不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水. 2. PBS (也可用于其它BSS,如:Hanks,D-Hanks液的配制): 主要用于免疫组化 ...
相关专题 细胞培养相关用品细胞培养专题 (一)细胞培养实验室的设置 组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因素的影响。目前,超净工作台的广泛使用,很大程度上方便了组织细胞培养工作,并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。 细胞培养实验室应能进行六方面的工作:无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭 ...
相关专题 细胞培养相关用品细胞培养专题 动物细胞培养技术能否大规模工业化、商业化,关键在于能否设计出合适的生物反应器(bioreactor)。由于动物细胞与微生物细胞有很大差异,传统的微生物反应器显然不适用于动物细胞的大规模培养。首先必须满足在低剪切力及良好的混合状态下,能够提供充足的氧以供细胞生长及细胞进行产物的合成。 一、生物反应器分类 ...
相关专题 细胞培养相关用品细胞培养专题 【实验原理】 在组织培养过程中,离体细胞对任何毒性物质都十分敏感。毒性物质包括解体的微生物及细胞残余物以及非营养的化学物质,因此对新采用和重新使用的培养皿等培养用品都要严格清洗和消毒。 【实验目的】 学习并掌握细胞培养使用的器皿、器械的洗涤和消毒。 【仪器、材料及试剂】 1.仪器:超净工作台,干燥箱,高 ...
相关专题 细胞培养相关用品细胞培养专题 细胞学在生命科学科中起着至关重要的作用,近年来细胞学蓬勃发展,并取得了重大的进展,细胞实验室的构建也是各个院校生物学科必备的实验室。 细胞实验谨慎复杂,需要的实验设备种类繁多,下面就一些动物细胞实验室必备仪器进行简单介绍: 一、CO2培养箱 CO2培养箱是细胞培养的必备仪器,它为细胞提供了一个体外培养的 ...
相关专题 细胞培养基的配制细胞培养专题 小技巧之避免牛血清沉淀: 各位童鞋在细胞培养过程中,应该遇到过使用的牛血清产生沉淀的问题,溶解后有沉淀,往往还怕是染菌,即使不是染菌有些沉淀在细胞瓶内也会影响生长,注意一些小的细节还是非常有必要的: 一般推荐在-20℃储存胎牛血清,避免反复冻融。 解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室 ...
相关专题 为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑,考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异,有时因寄赠、交换和购买,培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室,最佳的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是:在-70℃以下时,细胞内的酶活性均 ...
相关专题 DNA连接与转化 SOC培养基 成分、方法同SOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外,再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌)。 TB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨12g 酵 ...
相关专题 细胞培养相关用品 细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底(U型和V型);培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。 (1)平底和圆底(U型和V型)培养板的区别和选择: 贴壁细胞一般用平底培养 ...
相关专题 细胞培养相关用品 1、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁、空气清新,干燥和无烟尘。细胞培养工作包括:工作液配制、无菌操作(采样)、温育、无菌处理,细胞和用品贮存等。细胞培养室的设计实施原则一般是无 ...
相关专题 细胞培养相关用品细胞培养专题 细胞在体外培养中所需的条件与体内细胞基本相同。 1、无污染环境 培养环境无毒和无菌是保证细胞生存的首要条件。当细胞放置于体外培养时,与体内相比细胞丢失了对微生物和有毒物的防御能力,一旦被污染或自身代谢物质积累等,可导致细胞死亡。因此在进行培养中,保持细胞生存环境无污染、代谢物及时清除等,是维持细胞生存的 ...
相关专题 细胞周期 一、原理 细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。 单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法,但它不能代表细胞群体的周期,故现多采用其他方法测群体周期。 测定细胞周期的方法很多,有同位素标记法、细胞计数法等,这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。 ...
相关专题 细胞周期 Ⅰ、样品准备 准备以下一种或几种样品 A、组织单细胞悬浮液(如淋巴腺、脾、骨髓、胎盘细胞) B、组织培养细胞 C、Ficoll-hypaque分离的单核细胞 Ⅱ、反应体系-DNA低渗缓冲液 柠檬酸三钠 0.25g Triton-X 100 0.75ml Propidium iodide 0.025g 核糖核酸酶 ...
相关专题 293细胞 293细胞是腺病毒载体的包装细胞。腺病毒是继逆转录病毒后用于基因治疗研究的热门载体。直接将腺病毒载体导入人体内表达目的基因,治疗恶性肿瘤,心血管疾病或一些遗传疾病已取得可喜进展;利用腺病毒载体在包装细胞 293中表达分泌性蛋白质,如蛋白酪氨酸激酶 1C等亦成为生产重组蛋白的一条途径。因此完善 293细胞的大规模培养技术具 ...
相关专题 293细胞 293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。 大家注意293T细胞的一个重要特性:室温下不贴壁,但37度时可以重新贴壁。 我的293T细胞时老板从美国千里迢迢带回来的,当时正是冬天,老板把瓶子放在大衣口袋里在飞机 ...
相关专题 293细胞 包装细胞293T细胞的培养 293T细胞的培养主要有以下步骤: 一、293T细胞的冻存 1. 随着传代的次数增加,293T细胞会出现生长状态下降,出现突变等。所以要在细胞购进时就进行大量冻存,以保证实验的稳定性和持续性。 2. 在细胞对数生长期进行冻存,增加细胞复苏成活率。 3. 倒去细胞上清液,加入D-Hank ...
相关专题 293细胞 HEK293细胞中是否能查到p53蛋白 提问: 请问各位同行,正常的人胚肾HEK293细胞做免疫细胞化学染色是否能测到p53蛋白呢?因为p53蛋白在正常细胞中含量很低,所以担心会测不到,有谁做过可以告诉我吗,谢谢! 回答: 你的问题提得好。 HEK293的详细资料请参看美国ATCC网: http://www.atcc.o ...
相关专题 293细胞总有一种转染方法适合你 问: 这几天做293细胞的脂质体转染,为腺病毒的包装阶段. 用最小的培养瓶(好像是25ml的),加入脂质体10μl,pacI酶切纯化物8μg 进行转染.细胞最密处为80-90%,大部分为60%左右. 48小时后,1/3的细胞漂起来,但有荧光出现.4天后漂起来一半,最密处的视野见20个左右 ...
相关专题 293细胞 293T细胞差点被我养死,幸好我又将它起死回生,一点心得。 细胞传代:当细胞在细胞培养瓶内长满达到80%时就要传代,一传二,24小时后再传代。48小时传就不好了,如果在24小时后细胞没有长到80%,应该换新的培养基,不然,培养基变黄,细胞脱落。 细胞消化:将细胞培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明 ...
相关专题 293细胞总有一种转染方法适合你 xuwenpku:用pTRACER转染293细胞,约70-80%汇合度,3μl lipo,2μg质粒,36h后没有表达荧光,请教可能是什么原因?另外,想问是不是lipofectamine转染,要求细胞必须是传代之后24小时以内的细胞?延长转染时间是否会有好处呢? 在另外,pTRACER这 ...