细胞功能测定

细胞诊断要诀镜下观察要周到，每个视野不漏掉；看完背景看细胞，低倍高倍仔细瞧；先看形态和大小，核浆比例有多少；核的结构最重要，核质又多又粗糙；核膜核仁均异常，病理分裂偶见到；单个细胞不能断，足量细胞方有效；只有成堆无分散，重复检查再报告。肿瘤细胞分类要诀肿瘤细胞四类型，抓住特点能分清；鳞癌细胞多形性，核如墨染胞浆红；（角化型）腺癌细胞类圆形，胞浆空泡是特征；核膜增厚核仁大，核的位置偏正中；未分化癌容 ...

1.如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。在开始进行新的细胞培养时，可以参考下表所列的条件： 细胞系 细胞类型 种 组织 推荐使用的培养基 293 成纤维细胞 人 胚胎肾 MEM 10% 热灭活马血 ...

１　原理　　用稀乙酸将血液稀释２０倍，使红细胞全部溶解，滴入白细胞计数池中，在显微镜下计数，求得每立方毫米血液中的白细胞数。２　器材和试剂２．１　器材　　生物显微镜、Ｎｅｕｂａｕｅｒ氏血细胞计数池、０．０２ｍｌ吸管、小试管、刺血针、２ｍｌ吸管。２．２　试剂　　白细胞稀释液：采用３％乙酸溶液。３　稀释液的配制　　采用３％乙酸溶液。即取冰乙酸３ｍｌ，加蒸馏水至１００ｍｌ混合。亦可于上述稀释液中加美蓝或 ...

基本原理NK 细胞克隆来源于NK 细胞，该细胞的分离方法参见第一节之四。这些NK 细胞与经γ射线照射的饲养细胞苓而获得的NK 细胞克隆。试剂和材料● 植物血凝素（PHA）母液为100μg/ml● 重组IL－2（rIL－2）母液为105u/ml，分装小瓶（0．5ml/瓶），置－20℃长期保存，或置4℃下短期存放。应避免反复冻融，IL－2 不能用滤器过滤除菌处理。● 培养基1.接种培养液：RPMI16 ...

可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂凝胶内扩散，二者相遇，在比例合适处形成白色沉淀。双向琼脂扩散试验（Doubleimmunodiffusiontest） 抗原和抗体加到琼脂板上相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如两者相对应，浓度比例合适，则经一定时间后，在抗原、抗体孔之间出现清晰致密的白色沉淀线。每一抗原与其相对应抗体只能形成一条沉淀线，若同时含有若干对抗原抗体系统，因其扩散速度的不同，可在琼脂 ...

1） 瘤细胞培养（无特殊要求）骨髓瘤细胞呈悬浮或轻微附着形式生长，如附着性生长的细胞多时，用吸管轻轻吹打或轻轻叩击培养容器即可分离下来。通常要维持细胞于指数生长期（细胞培养时间为15~20小时），每3~5天取细胞0.2~1ml移入到10ml新培养液中，其最大细胞密度不能超过5×105~106/ml。一般使用含有高糖的DMEM培养液，并补加有pH的稳定剂HEPES。2）免疫小鼠和脾细胞的制备免疫：取 ...

1 血清一定需要加热灭活　　人们通常通过在56°C加热30分钟的办法，来灭活血清中的补体，以及其中可能的微生物（比如支原体）的污染。加热灭活带来的问题是，血清中的氨基酸、维生素和生长因子等也会不同程度的被破坏。　　Triglia and Linscott 的研究发现（1），胎牛血清中的补体含量很低，即使在未稀释的胎牛血清中，也观察不到溶血现象。另外37°C的加热能够有效灭活补体。所以对胎牛血清而言 ...

污染是细胞培养技术中面临的主要问题。某些污染的发生往往难以察觉检测，而且污染源能长期共存于培养体系中，这类染事实上大部分被人们忽视了。培养的细胞作为个生物体，会对培养环境以及环境中的污染物作相应的反应，造成培养细胞生物学特性的改变，而实验结果造成潜在的威胁，而且随着污染时间的长而增加。培养环境中的物理、化学及生物因素都可能入培养环境造成污染。由于入侵的微生物在培养系中不断增殖、代谢，因此生物性的污 ...

问：在培养细胞取材做其他检测时，为了各个培养瓶中的细胞的齐同性，常须通过同步而实现。具体方法不明，好象是用维持培养液（含较低浓度培养血清），而不是用生长培养液。答：1.细胞同步化是指为研究细胞周期的不同阶段的生化特征必须获得细胞周期一致性的细胞.因此你首先看看是否需要用同步化的细胞2.细胞同步化分为自然同步化和人工同步化二种方法前者由于细胞群体受多种条件限制对结果有很大影响，所以一般都采取后者.3 ...

我养了快半年的大鼠气道平滑肌细胞，有一点体会，特发上来和各位战友交流一下，互相进步。壹．器械显微器械：眼科剪一把，直弯眼科镊各一把，细结镊一把，手术刀一把，针头诺干杀老鼠器械：手术剪一把，大镊子一把，弯眼科镊一把，组织钳一把，50ml烧杯一个（锡纸包好）另外：10ml离心管两个，培养皿两个，10ml的瓶子三个，小滤器两个，硅胶板一块，培养瓶盖子诺干贰。试剂D-HANKS液250ml，双抗2ml ...

贴壁法：器械显微器械：眼科剪一把，直弯眼科镊各一把，细结镊一把，手术刀一把，针头诺干杀老鼠器械：手术剪一把，大镊子一把，弯眼科镊一把，组织钳一把，50ml烧杯一个（锡纸包好）另外：10ml离心管两个，培养皿两个，10ml的瓶子三个，小滤器两个，硅胶板一块，培养瓶盖子诺干贰。试剂D-HANKS液250ml，双抗2ml（青霉素16万U/ml链霉素15万U/ml）。FBS和含20％FBS的DMEM叁。步 ...

一、细胞凋亡的形态学检测1 光学显微镜和倒置显微镜　　（1） 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。　　（2） 染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。　　2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜　　一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评 ...

概论§污染是细胞培养的大敌。预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。§一开始就要十分重视，防止污染，否则会前功尽弃，不仅浪费时间，而且浪费人力、物力，甚至造成无法弥补的损失。（一）污染的类型§细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。1、细菌污染§细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素 ...

三、线粒体膜势能的检测 　　线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用，多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡，而线粒体跨膜电位DYmt的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体DYmt崩溃，则细胞凋亡不可逆转。　　线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3，3-Dihexylo ...

五 TUNEL法 　　细胞凋亡中 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal -deoxynucleotidyl transferase ...

细胞爬片是细胞培养中比较经常会用到的，现将自己操作的一些方法与技巧拿与大家分享，如有不当的地方还望大家给与指正：【爬片的准备】1、爬片可用一般的盖玻片，也可用专用爬片；2、应用盖玻片，可根据自己的需要剪裁成合适的大小，以备置于6孔板、12孔板或24孔板；3、将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再用三蒸水冲洗3遍（个人认为主要目的是冲洗干净就可以了），放在饭盒或者培养 ...

七、凋亡相关蛋白TFAR19蛋白的表达和细胞定位分析 　　TFAR19（PDCD5）是由本研究室在国际上首先报导的一个拥有自己知识产权的人类新基因，前期的功能研究表明，它是促进细胞凋亡的增强剂。利用荧光素（FITC）标记的TFAR19单克隆抗体为探针，对细胞凋亡过程中TFAR19蛋白的表达水平及定位研究发现，凋亡早期TFAR19表达水平增高并出现快速核转位现象，伴随着细胞核形态学的变化，持续较长时 ...

1.我们实验室最近一次的情况:我们前后从上海细胞中心买了三批细胞，细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮，也没有见小黑点，但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点，有时候在一夜之间暴长，给培养液加庆大霉素，也无济于事，对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后见减少，但是随后几天又出现，刚开始怀疑操作有问题，但是由有经验的老师操作也出现这种问题，陆续对培养液，血清及胰酶进行 ...

实验步骤：1.EB病毒液的制备复苏B95.8细胞株，使用培养基为10% FCS RPMI-1640逐步添加培养基至细胞长至对数生长期细胞计数，调节细胞数量为1×106个/ml在CO2培养箱中继续续培养10天，中间不换液至第10天收集培养上清，1800rpm，4℃离心15分钟0.22μm滤器过滤，1ml/支分装，冻存于液氮备用2.病人外周血液的采集、分离 ...

一、试剂1、淋巴细胞分离液：避光4度保存，用前在37度水浴中加温。整个分离过程中，温度应控制在8-28度，温度过高或过低均影响分离质量。2、全培养基（用前配置）：RPM1640培养基，内含20%胎牛血清（Gibco）{56℃灭活30分钟}，1.6-1.8% 1M的HEPES，1.2% 0.2mol/L谷氨酰胺，1%青霉素和链霉素。3、环胞酶素A（CyA）：5ml(250mg)/瓶， ...