细胞免疫荧光

免疫荧光（immunofluorescence）是一种常用的光学显微术，即用荧光显微镜来观察细胞中的特定生物分子。免疫荧光依赖于抗体抗原的特异性结合，然后通过直接标记或间接标记方法使用荧光分子指征抗体-抗原结合的位置，以确定目标生物分子在细胞中的位置、丰度和分布情况。免疫荧光实验流程1. 固定固定液种类：有机溶剂（甲醇、乙醇、丙酮等）；交联剂（4%PFA、10%中性福尔马林），固定液的选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的 ...

就如上新手进阶要点总结之后，笔者总结了一下免疫荧光需要特别关注的细节，以期作出更完美的图片效果。1、了解及预测蛋白的定位例如：下图使用肺动脉内皮细胞（ BPAE）观察线粒体的显色，采用 405nm，488nm，561nm 的激光，100x NA 1.49 的物镜对细胞内线粒体的分布进行简单的观察，此图可见，单纯的 mito-tracker 并不能清晰看见线粒体内部的结构和蛋白相关关系，因此，明确蛋白定位，根据所需分辨率选择显微镜、相应的荧光蛋白和 ...

如果结合充分优化的配色方案和优质的试剂，多色流式细胞术将成为同时检测、监控多个样品参数的强大工具。但是，数据质量在很大程度上取决于优化的配色方案设计和适当调整的仪器。以下 7 个秘诀可以帮助你改善流式细胞仪数据质量，避开多色流式细胞实验中的常见问题。

制定 10 色免疫表型 Panel，以鉴定人自然杀伤细胞（NK）。用于量化 NK 细胞群子集的设门策略。

细胞在肿瘤、病毒、细菌、寄生虫、移植组织、过敏原、甚至自身抗原的适应性免疫应答中都发挥着重要的调节作用。大部分 T 淋巴细胞在其细胞表面表达单一的、高度特异性的抗原受体（TCR），与 MHC-抗原肽复合物相结合并识别其中特异的抗原肽，启动获得性/特异性免疫应答机制，比如 T 细胞介导的细胞免疫和 B 细胞介导的体液免疫。由于 TCR 与 MHC-抗原肽复合物之间的亲和力低，半衰期短，相互结合后容易快速脱落，重组的可溶性 MHC-抗原肽复合物单体并不适合用于抗原 ...

MHC I 类分子在 CD8+细胞免疫系统中起到抗原呈递和识别作用。因其特异性，MHC-多肽复合物在免疫治疗中起着重要作用。虽然 MHC-多肽复合物能够被 TCR 特异性识别，但大多数天然 TCR 受体不仅稳定性低，与 MHC-多肽复合物的亲和力也低。为了解决上述两个不足，以肿瘤抗原表位为靶点，制备亲和力高，且可溶性强的 TCR 样抗体成为替代野生型 TCR 受体的最佳选择。该类 TCR 样抗体作为一种新的免疫分子，起着识别并杀灭肿瘤细胞的作用。1、以 T 细胞表位为靶标的免疫治 ...

所谓工欲善其事必先利其器，做实验也是一样的道理。做免疫组织化学染色，抗体信号弱，再怎么重复也达不到好的效果，不如试试 TSA 酪胺信号放大技术。该技术是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法，可有效放大信号 100-800 倍。该技术可与高性能染料 Alexa Fluor、传统荧光染料和比色检测系统相兼容。上海臻和生物科技有限公司基于 TSA 酪胺信号放大技术开发了一系列自主品牌 EU-BIO 试剂盒，包括不同荧 ...

tongenjuan 我想要研究肿瘤细胞在药物及照射的情况下，其细胞的生长情况。考虑到一块板上不能同时做药物及照射，因为照射一部分孔时不能保证药物组不受射线影响；而且如果分为2块版的话，只能分别检测，结果比较就没有意义了。因此想询问一下除了MTT法，还有没有其他的方法可以检测到细胞生长抑制情况湘洋剑客 貌似必须两块板不用MTT，CCK8也行流式ELISA蛋白 还有就是用Invitrogen公司的CFSE细胞增殖流式检 ...

wliangl 求助各位达人，谁能帮忙分析一下这个问题：使用mCherry质粒（红色荧光质粒）在24孔板转染血管内皮细胞。三天后使用Nikon的荧光显微镜，Texas Red滤镜系统观察：阴性对照（未进行转染，直接培养）和转染细胞同时出现红色荧光，强度相当，转染组全部细胞都出现红色荧光，对照组部分细胞出现，部分细胞较弱，目测感觉全都不像红色荧光表达。问题排除：1. 使用其他滤镜系统没有荧光（GFP，DAPI，CY5）2. 孔板其他孔和 ...

zhuzhu007 请问在做细胞免疫荧光时，用Tween20打孔，也就是做细胞通透的时候，浓度是多少？rongjiansu 这个要靠实验去摸索，一般用0.1% 的浓度处理5－10分钟不等。做微管最多可以用到10%。关于如何优化，Nature protocol上面有一篇文章，专门讲免疫荧光实验条件的优化zhuzhu007 rongjiansu wrote:这个要靠实验去摸索，一般用0.1% 的浓度处理5－10分钟不等。做微管最多可以用到10%。关 ...

网络 　　七、其它细胞因子 　　（一）LIF 　　60年代末人们就发现一种能诱导M1白血病细胞系分化为正常细胞的因子，后称之为白血病抑制因子（leukemia inhibitory factorLIF)。小鼠和LIF cDNA分别于1987年和1988年克隆成功。 　　1.LIF的产生　已在活化的T细胞、单核细胞、神经胶质细胞、肝成纤维细胞、骨 ...

网络 　　八、细胞因子的临床应用 　　目前，细胞因子已广泛应用于临床多种疾病的治疗，其中以干扰素、各种集落刺激因子最为常用。部分细胞因子已获美国FDA批准投放市场，有的细胞因子已进行不同阶段的临床试验或正在申请获准准投放市场。有关细胞因子临床应用的情况参见表4-14和表4-15。 表4-14　美国FDA批准投放市场的重组细胞因子 ...

网络 　　六、趋化因子 　　由组织细胞和微生物产生的趋化剂（chemoattractants)对白细胞的趋化作用（chemotaxis)是炎症发生过程中重要的起始步骤，也是机体防御和清除入侵病原体等异物先天性免疫功能的一个重要方面。1986年以前，“经典”的（classical)白细胞趋化物质主要有补体片段C5a、白三烯B4（leukotrinin B4L ...

网络 　　五、转化生长因子-β（TGF-β） 　　转化生长因子-β（transforming growth factor-βTGF-β)是属于一组新近发现的调节细胞生长和分化的TGF-β超家族。这一家族除TGF-β外，还有活化素（activins)、抑制素（inhibins)、缪勒氏管抑制质（Mullerian inhibitor substanceMIS ...

网络 　　四、干扰素（IFN） 　　1957年Isaacs和Lindenmann首先发现了病毒干扰现象，即病毒感染的细胞能产生一种因子，作用于其他细胞干扰病毒的复制，因而命名为干扰素。目前已知干扰素并不能直接杀伤病毒，而是诱导宿主细胞产生数种酶，干扰病毒的基因转录或病毒蛋白组分的翻译。根据产生干扰素细胞来源不同、理化性质和生物学活性的差异，可分为α-干扰素 ...

网络 　　三、肿瘤坏死因子 　　1975年Carswell等发现接种BCG的小鼠注射LPS后，血清中含有一种能杀伤某些肿瘤细胞或使体内肿瘤组织发生血坏死的因子，称为肿瘤坏死因子（tumor necrosis factorTNF)。1985年Shalaby把巨噬细胞产生的TNF命名为TNF-α，把T淋巴细胞产生的淋巴毒素（lymphotoxinLT)命名为T ...

网络 　　二、集落刺激因子（CSF) 　　骨髓造血干细胞体外半固体培养技术的建立和重组集落刺激因子（colony-stimulating factorCSF)的问世给集落刺激因子的研究提供了前提。根据细胞因子刺激不同造血细胞系或不同分化阶段的细胞在半固体培养基中形成不同细胞集落，分别命名为粒细胞CSF（G-CSF）、巨噬细胞CSF（M-CSF）、粒细胞和巨 ...

网络 第二节　细胞因子的结构和生物学特征 　　由于基因工程技术的迅速发展，许多细胞因子的cDNA克隆获得成功，并获得了高活性基因表达产物，这给细胞因子的细胞生物学和分子生物学的研究提供了必要的前提。目前已有IL-2、EPO、G-CSF、GM-CSF、IFN-γ和IFN-α等细胞因子投放市场，有更多的细胞因子正在进行不同期的临床验证。细胞因子在正式投入市场成 ...

网络 　　二、细胞因子的作用特点 　　众多的细胞因子有以下共同的作用特点。 　　（1）绝大多数细胞因子为分子量小于25kDa的糖蛋白，分子量低者如IL-8仅8kDa。多数细胞因子以单体形式存在，少数细胞因子如IL-5、IL-12、M-CSF和TGF-β等以双体形式发挥生物学作用。大多数编码细胞因子的基因为单拷贝基因（IFN-α除外），并由4～5个外显 ...

网络 　　三、T细胞库的多样性 　　推测T细胞库（T cell repertoire)中多样性在1010以上，其多样性的原因与Ig相似，主要有以下几方面。 　　1.胚系中有众多的V、D和J基因片段　尽管TCRα和β基因中V基因片段数比Ig基因少，但J基因片段明显比Ig基因为多，如小鼠中约50～100个Jα和至少12个Jβ基因片段，而IgH和κ链基因座 ...