细胞染色技术

PKH标记外泌体过程中形成了大量PKH纳米颗粒，在大小，表面积和荧光强度方面与标记的外泌体几乎没有区别。同时，PKH26纳米颗粒会被原代星形胶质细胞吞噬到与PKH26标记的外泌体相似的亚细胞区室。总之，PKH类染料用于外泌体标记会导致假阳性信号，并严重影响外泌体的鉴定和细胞摄取实验的真实性。常用方法不能有效去除PKH纳米颗粒，且外泌体损耗大残留的PKH颗粒会造成细胞摄取假阳性结果PKH染料，如PKH67和P ...

​亲脂性荧光染料分子如PKH家族已被广泛用于外泌体标记。有研究使用纳米颗粒跟踪分析（NTA）系统地评估了PKH标记对外泌体尺寸的影响，所有被PKH标记外泌体的尺寸均明显增加，并引入了假阳性结果，故认为PKH不是示踪外泌体的可靠技术。PKH容易引入假阳性PKH可在四个方面引起假阳性：1. 染料聚集造成的假阳性研究表明，PKH的聚集会在体系中引入了新的非外泌体纳米颗粒。如下图（Fig.1）PKH（不含EV）在NTA下观测 ...

细胞膜染料+外泌体染料双染策略，彻底解决外泌体摄取实验中的假阳性问题。外泌体的细胞摄取实验中有两个难以回避的问题：1）聚集造成的假阳性：常规亲脂性染料在水溶液中自发形成染料聚集体或团块，难以吹散，聚集染料的荧光信号极易与外泌体混淆，引起观测结果的假阳性；2）二次标记造成的假阳性：由于外泌体膜与细胞膜结构的相似性，常规染料标记的外泌体在被细胞摄取后一旦脱落，会二次标记细胞膜带来非外泌体荧光信号。那有什么染色方法可 ...

台盼蓝是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。机理 正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定 ...

如何借助 DuraClone 通过流式细胞术对人外周血单核细胞 (PBMC) 进行染色，以进行 T 细胞受体分析。如何运用 CytoFLEX 流式细胞仪和 DuraClone 对 TCR 亚群进行鉴定。

1.转染技术介绍近几年，转基因研究已经成为分子生物学领域的研究热点，范围已经渗透到医学，农业等多个领域。在转基因动物的制备过程中需要经历基因克隆、细胞转染、胚胎移植等几个步骤，而细胞转染技术则是此过程中的重要环节。细胞转染技术是采用一定的方法和途径将外源核酸分子如 DNA、RNA 等导入特定的细胞并表达目的基因，产生特定功能的蛋白质分子。在生产转基因动物的研究中，通过结合细胞转染技术与体细胞克隆技术培育转基因动物是一 ...

veritassea 各位大侠大家好，我想用腺病毒载体基因体内转染小鼠的DC细胞和T细胞，但是有人说这些免疫细胞体内转染的效率非常低，具体是多少也不知道。请问究竟转染效率低于多少就不能应用于实验呢？如果这样不可行的话，还有其他的办法吗？谢谢各位指导！david_xmu 滴度整高点，大于10的12次方VP。veritassea 好的，谢谢！我会试试看。万胖宝宝 楼主好，我也在做这方面的实验，请问你现在做的怎么样了，可否交流一下！万胖 ...

米迷二号 如题！大家帮帮忙啊！George2 我们经常用HEK293细胞做基因转染实验，事实上，该种细胞还是挺好转染的，我们用过Lipofeacmine2000(Invitrogen公司的)，还用过磷酸钙沉淀法（自己配制和试剂盒都用过），转染效率都很高，也很方便。hermer fugeneanniegood 我们用过磷酸钙和威格拉斯的转染试剂，磷酸钙试剂可以自己配制，物美价廉没有毒性。只要PH值调准，操作手法熟练呵呵转染效果是很 ...

liufengxi 我用PEI（sigma 25kDa）作为转染试剂，但是发现，同样的细胞，同样的N/P 条件下。转染效果一次比一次要差，难道是PEI容易在水性条件下降解？我们的这个PEI买的时间比较久了，不知道是不是该买新的了。一直找不出原因，很是郁闷，请大虾帮忙解答，dafang0212 PEI粉末放置久了后，是会出现转染效率变差的状况的。另外不知道你的PEI用做转染前有进行加热处理吗？PEI在4度或者-20中放置一段时间后会 ...

【实验目的】 1． 观察肝脏的解剖结构，掌握肝脏的位置、形态特点和体表投影。 2． 观察肝脏的组织结构，掌握肝小叶组成。 3． 观察肝炎、肝硬化和肝细胞癌的病理变化，掌握三者之间的相互联系以及临床特点。 【实验对象】 尸检来源的正常肝脏和组织切片，急性肝炎、肝硬化和肝细胞癌的大体标本和切片。 【实验内容】 1． 肝脏的解剖结构 （1）膈面：肝的上面，借镰状韧带分为左右两叶。 （2）脏面：注意辨认“H”型结构，左纵沟的前后部分别为肝圆韧带和静脉韧带；右纵沟前部为胆囊窝，后部为腔 ...

【实验目的】 1. 了解常规切片的制作过程。 2. 熟悉苏木素－伊红(hematoxylin and eosin，HE)染色方法。 【实验原理】 将各种方法（活检、尸检）获取的组织标本经过一定的步骤处理，做成切片。苏木素是碱性染料，可将细胞核（嗜碱性物质）染成蓝色，伊红是酸性染料，可将多数细胞的细胞质（嗜酸性物质）染成红色，形成色彩鲜艳、结构清晰的组织图像。 【实验对象】　 尸检来源的正常肺组织。 【实验药品与器材】 1. 器材　手术刀、恒温箱、石蜡切片机、显微镜。 2. 试剂　10％福尔马林，梯度酒 ...

【实验目的】 1． 观察肺组织的解剖结构，掌握肺的形态、位置和分叶。 2． 观察肺的组织结构，掌握支气管壁的分层和肺泡的结构特点，了解肺导气部、呼吸部的组成。 3． 观察大、小叶性肺炎的大体标本和组织切片，掌握两者的病变特点及形态的异同点。 【实验对象】 尸检来源的正常肺和组织切片，大叶性肺炎和小叶性肺炎的大体标本和切片。 【实验内容】 1． 肺组织的解剖结构 （1）支气管：支气管由肺门进入肺部，呈树枝状分布。 （2）肺：一尖、一底（膈面）、二面（内侧面、肋面）和三缘（前缘、后缘、 ...

【实验目的】 1． 观察胃的解剖结构，掌握胃的位置、毗邻脏器和淋巴引流。 2． 观察胃和胃癌的组织结构，对比正常胃和胃癌的形态特点。 3． 观察慢性萎缩性胃炎和胃溃疡的形态变化，联系慢性胃炎、胃溃疡与胃癌之间的关系。 4． 观察胃癌和转移的大体标本，联系胃癌的扩散途径。 【实验对象】 正常胃标本和胃底组织切片，慢性萎缩性胃炎、慢性胃溃疡、胃癌和淋巴结转移性腺癌切片，胃溃疡、不同类型胃癌、卵巢转移性肿瘤的大体标本。 【实验内容】 1． 胃的解剖结构　观察胃贲门部、胃体部、胃底部和 ...

一、贴壁细胞 1. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。 2. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5 ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。 3. 去固定液，用PBS或0. ...

FACS用于研究细胞组分DNA，碘化丙啶（PI）嵌入核酸双链中并可以发荧光。它不能进入活细胞，但是可以进入正在或者已经死亡的细胞。因此PI可以用于免疫荧光染色来鉴定死细胞。DNA染色可以用于研究细胞周期。相对的DNA含量可以坚持G1，G2和S期细胞的比例。在DNA染色中凋亡的细胞有特有的颜色。 一、材料和试剂 1. TritonX-100（SigmaCatalogNo. ...

Hoechst染色：hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合有hoechest33342和hoechst33258两种（主要为凋亡活细胞）在紫外光下将核染为蓝色。Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果。hoechsthoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33 ...

1. 酸性品红：酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容於水，略溶於酒精（0.3%）。是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、医学教|育网搜集整理髓部等薄壁细胞和纤维素壁。它跟甲基绿同染，能显示线粒体。组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。 2. 刚果红：刚果红 ...

实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法.其目的是显示生活细胞内的某些结构而不影响细胞的生命活动和产生任何理化变化以致引起细胞死亡.活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态根据所用染色剂的性质和染色方法的不同 活体染色可分为体内活染与体外活染两类.体内活染是以胶体状的染料溶液注入动植物体内染料的胶粒固定于细胞内某些特殊结构内以达到易于识别的目 ...

放射自显影技术是利用放射性同位素所产生的射线作用于感光乳胶的氯化银晶体而产生潜影，再经过显影定影处理，把感光的氯化银还原成黑色的银颗粒，即可根据这些银颗粒的部位和数量分析出标本中放射性示踪物的分布，以进行定位和定量分析。 实验用品 器具：显微镜、恒温培养箱、电冰箱、干燥箱、电吹风、暗室 试剂：酒精、二甲苯、Giemsa 染色液、乳胶、显影液、定影液、3H ...

每一物种的细胞一般都具有一定数目、形状和大小的染色体，在秋水仙素的作用下可使分裂细胞阻断在中期，此时染色体形态最典型，然后通过低渗、固定、染色等步骤，便可在显微镜下呈现出其形态。 实验用品 器具：显微镜、培养皿、手术剪、镊子、冷冻载片、滴管 试剂：秋水仙素、生理盐水、甲醇、冰醋酸、低渗液、PH6.8 磷酸缓冲液、Giemsa 染色液 材料：蟾蜍 实验方法步骤 1. 前 ...