细胞周期/增殖/凋亡检测

一直都像个新手，从未老道过。所有新手的迷茫与无奈我最能体会。看到园子里有一些同学在问有关CCK8试验的事情，当初我也和他们一样，像个被蜘蛛丝缠住头的迷茫苍蝇一头扎进园子里，期待能找到些解决谜团的只言片语。希望我写的这些非专业文字能够帮助那些在实验室里没有前行者指点迷津的筒子们。当然仁者见仁智者见智，我写的只是个人实验心得，仅供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的，道路是曲折的，时间就是用来浪费的，科研就是自 ...

细胞凋亡（英语：apoptosis，源自希腊语：απόπτωσις，有堕落，死亡之意），为一种细胞程序性死亡。相对于细胞坏死（necrosis），细胞凋亡是细胞主动实施的。细胞凋亡一般由生理或病理性因素引起。而细胞坏死则主要为缺氧造成，两者可以很容易通过观察区分开来。在细胞凋亡过程中，细胞缩小，DNA被核酸内切酶降解成180bp-200bp片段属于有层次之断裂，（可以通过凝胶电泳证明），而细胞坏死时，细胞肿胀，细胞膜被破坏 ...

TFAR19（PDCD5）是由本研究室在国际上首先报导的一个拥有自己知识产权的人类新基因，前期的功能研究表明，它是促进细胞凋亡的增强剂。利用荧光素（FITC）标记的TFAR19单克隆抗体为探针，对细胞凋亡过程中TFAR19蛋白的表达水平及定位研究发现，凋亡早期TFAR19表达水平增高并出现快速核转位现象，伴随着细胞核形态学的变化，持续较长时间，在凋亡小体中仍然可见。同时我们发现，凋亡早期TFAR19蛋白的核转位 ...

（一）药物对肿瘤细胞的抑制效应的MTT法：用培养基将肿瘤细胞调整至2 X108个/L，在96孔板中每孔加入100ul细胞悬液于37℃、5% CO2下培养过夜。次日每孔加入不同浓度的药物100mg/L作为试验组，设加完全培养基不加药物的阴性对照，并用功能明确的药物为阳性对照和0.5%的乙醇溶剂对照。每组均设4-6个复孔（平行孔）、37℃、5% CO2继续培养。培养至12h、24h、48h、实验终止前4-6h加入10ulMTT（5g/L），培 ...

细胞凋亡（Apoptosis），又称细胞程序性死亡（PCD: Programmed Cell Death），是指细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。它是一个主动的，高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。细胞凋亡概念提出至今还不到30年的时间，但由于它在保证多细胞生物的健康生存过程中扮演着关键角色，对个体的正常发育及细胞凋亡紊乱在病理学研究中的重要作用，引起了人们对其机制和组分的广泛而深入 ...

上海大学生命科学学院、上海市能源作物育种及应用重点实验室的研究人员证实，玉米Pro1基因(Zm P5CS2)的突变造成了突变体细胞中脯氨酸(proline)合成受阻，从而导致proline积累的减少。突变体中proline的缺乏引起了相应的转运RNA(tRNApro AGG)空载形式(uncharged tRNApro AGG)的增多，从而激活了细胞中的GCN2激酶，该激酶通过磷酸化真核生物翻译起始因子eIF2α从而抑制了细胞 ...

操作步骤（Roche公司）1.用二甲苯浸洗2次，每次5min；2.用梯度乙醇（100、95、90、80、70％）各浸洗1次，每次3min；3.PBS漂洗2次；4.用ProteinaseK工作液处理组织15-30min在21–37°C或者加细胞通透液8min；5.PBS漂洗2次；6.制备TUNEL反应混合液，处理组用50μlTdT＋450μl荧光素标记的dUTP液混匀；而阴性对照组仅加50μl荧光素标记的dUTP液，阳性对照组 ...

一、概述 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡最早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。AnnexinV是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此AnnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶（Propidium Io ...

自噬是近年来很热门的领域，做一下系统的介绍或讨论，内容：1） 什么是自噬？包括自噬的定义、形态学特征、分子基础、调控等2）自噬的意义自噬与细胞存活、细胞死亡、疾病、衰老等的关系3）怎么研究自噬？主要谈谈怎么证明细胞发生了自噬，即自噬的判断标准和各种研究自噬的方法及局限性。一、自噬的过程——从一张图片开始步骤1：细胞接受自噬诱导信号后，在胞浆的某处形成一个小的类似“脂质体”样的膜结构，然后不断扩张，但它并不呈球形，而是扁平的，就 ...

凋亡是一种生理性、程序性的细胞死亡过程。在胚胎发育、组织器官形成以及衰老和病态细胞的清除中起重要作用。由于各种环境因素和遗传因素导致细胞失去发生凋亡的能力，是肿瘤发生与发展的关键因素之一，激发和恢复肿瘤细胞发生凋亡的能力，是肿瘤防治的有效途径。肿瘤多药耐药（multidrug resistance，MDR）是指在一种药物作用于肿瘤细胞而产生耐药性后，肿瘤细胞对未接触过的、分子结构和作用机制各不相 ...

最近出版的《自然—化学生物学》报道了一种小分子可通过结合并激活死亡受体5（DR5）实现诱导产生选择性癌细胞凋亡。 肿瘤坏死因子（TNF）及相关分子诸如TRAIL属于信号蛋白，可在细胞表面与死亡受体结合并激活细胞凋亡通路。这种细胞促凋亡通路的数个明显阶段已被用于诱导癌细胞选择性凋亡，以研究出更多有效的癌症治疗方法。比如，模拟Smac分子的化合物可以激活相关通路的下游部分。 ...

近日，一个国际研究小组在淋巴细胞数量的调节机制上的研究上取得新进展，相关研究成果发表在2013年7月14日"Nature Immunology"期刊上。 由欧盟、比利时政府、澳大利亚国家健康和医疗研究委员会等机构资助的一个国际研究小组发现了一种淋巴细胞的数量调节机制。这种淋巴细胞被称为调节性 T 细胞，具有抑制免疫反应的功能。这项发现有助于开发免疫功能紊乱的新疗 ...

摘要：凋亡，也称为细胞程序性死亡，最近几年已引起高度重视。1842年卡尔·福格特发现细胞凋亡后，其研究蛰伏了一个多世纪。在本世纪后半期，从1972年开始，由Kerr Wyllie和 Currie 对凋亡的重新发现以及编纂，在这一科学领域点燃了浓厚的兴趣。 从那以后凋亡相关的文章发表数量每年呈指数增长。这主要归因于三个重大进展，其中两个最近完成，另一个正在进行。第一，通 ...

单链抗体可变区基因片段(scFvs) 已被看做是一类有前景的药物。然而，它们的低亲和力和快速的血浆清除率限制了其广泛的临床应用。在本研究中，我们旨在通过多聚scFv提高scFv的抗体表达，再通过与人软骨寡聚基质蛋白（COMP）48的螺旋结构域结合以抵抗死亡受体5（DR5，肿瘤坏死因子10B）。通过合成一种五聚体，我们称其为共同体，在体外和体内实验中，scFv的活性增加了10倍，并且共同体比它的单体 ...

一、细胞凋亡与细胞坏死的的区别细胞程序性死亡 概念：细胞程序死亡(programmed cell death，PCD)也常常被称为细胞凋亡，是生物体发育过程中普遍存在的，是一个由基因决定的细胞主主动的有序的死亡方式。具体指细胞遇到内、外环境因 子刺激时，受基因调控启动的自杀保护措施，包括一些分子机制的诱导激活和基因编程，通过这种方式去除体内非必需细胞或即将发生特化的细胞。而细胞发生程序性死亡时，就 ...

摘要：凋亡信号是接受特异性的刺激才产生的，因此细胞凋亡具有特异性细胞生长到一定时期时，由于各种自身或外界因素的影响，导致细胞自身的一种应答反应，是属于正常的细胞生理现象，要凋亡的细胞会产生凋亡信号，凋亡信号传递给一些巨噬细胞吞噬要凋亡细胞或者刺激自身DNA的转录翻译从而产生凋亡蛋白来指导细胞自身的降解，这些反应需要有凋亡信号才会发生，凋亡信号是接受特异性的刺激才产生的，因此细胞凋亡具有特异性。 ...

摘要：细胞凋亡也帮助我们理解一些病毒和细菌侵袭人体细胞的机理。除了 A IDS，另外一些疾病，如神经变性性疾病、中风、心肌梗塞和自身免疫疾病等都是由于很多正常细胞被不正确地启动了程序性死亡过程而造成细胞过量死亡。无论在发育期还是在成人体内，既有大量的新细胞产生，也有大量的旧细胞死亡，这是生物体的一种自然现象。为了维持机体组织中适宜的细胞数量，在细胞分裂和细胞死亡之间需要一种精确的动态平衡。由于这种 ...

细胞凋亡的特点：细胞变圆，染色质凝聚、分块，胞质皱缩。之后整个细胞通过发芽、起泡等方式形成一些球形的突起，并在其基部绞断而脱落形成大小不等内含胞质、细胞器及核碎片的凋亡小体，然后被周围细胞吞噬。其他的特征：1. 由基因控制，2. 不引起炎症。3. 质膜不破裂，4. 染色质DNA的有控裂解 ...

按照起始caspase的不同，可将哺乳细胞的凋亡分为三种基本的途径。一种称为外在途径(extrinsic pathway)，由细胞表面的死亡受体如Fas和肿瘤坏死因，子受体家族(tumour necrosis factor receptor，TNF-R)引发;另一种称为内在途径(intrinsic pathway)或线粒体途径(mitochondrial pathway)，由许多应激条件、化学治疗 ...

细胞程序性死亡 概念：细胞程序死亡(programmed cell death，PCD)也常常被称为细胞凋亡，是生物体发育过程中普遍存在的，是一个由基因决定的细胞主主动的有序的死亡方式。具体指细胞遇到内、外环境因子刺激时，受基因调控启动的自杀保护措施，包括一些分子机制的诱导激活和基因编程，通过这种方式去除体内非必需细胞或即将发生特化的细胞。而细胞发生程序性死亡时，就像树叶或花的自然凋落一样，凋亡的 ...