细胞培养

植物细胞培养技术就是为了某种目的而在细胞水平上对离体植物细胞或原生质体进行的一系列生物工艺学操作。它包括分离、培养、再生以及一系列相关的操作。就有用化合物的生产来说，它主要是指在无菌条件下通过悬浮培养植物细胞生产有用化合物的过程。 理论与技术基础：植物细胞全能性、微生物液体深层发酵系统、遗传工程 意义： 1）不受地理、季节和气候条件的限制； 2）节省土地，降低成本，生产周期短，可大大提高经 ...

1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟 ...

细胞培养品 名:细胞培养 拼音:xibaopeiyang 英文名称：culture of cells 说明:包括微生物细胞、植物细胞和动物细胞培养。将动植物组织或细胞从机体取出，分散成单个细胞或直接以单细胞生物，使其在含有必要生长条件的培养基或培养瓶中继续生长与增殖。细胞培养是细胞生物学研究方面十分重要的技术。细胞周期及其调控、癌变机理、衰老、基因表达与调控等重要进展都离 ...

1. 如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在 MEM 中培养的细胞，很可能在 DMEM 或 M199 中同样很容易生长。总之，首选 MEM 做粘附细胞培养、 RPMI- 1640 做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是 AIM V 培养基（ SFM ） 2. 为什么要热灭活血清？ 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋 ...

1．机械刮除法： 是用不锈钢丝末端插有橡胶刮头（用胶塞剪成三角形插以不锈钢丝）、或裹少许脱脂棉制成，装入试管中高压灭菌后备用（也可用特制电热烧灼器刮除）。刮除程序为： （1）标记：镜下观察，用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位； （2）刮除：弃掉培养液，把无菌胶刮伸入瓶皿中，肉眼或显微镜窥视下，刮除无标记空间； （3）用Hanks液冲洗一两次，洗除被刮掉的细胞； （4）注入培养液 ...

巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活 2 － 3 周，多用做原代培养，难以长期生存。 巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如 P338D1 、 S774A.1 、 RAW309Cr.l 等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离， ...

一． 设备： 无菌操作设备。 二． 大型设备CO2培养箱：恒温5%、10%CO2维持培养液中pH值。 倒置显微镜：用于每天观察贴壁细胞生长情况。 解剖显微镜，用于准确地取材。 常温冰箱：-4℃，用于保存各种培养液，解剖液和鼠尾胶。 低温冰箱：-20℃--80℃，用于储存血清酶，贵重物品和试剂。 电热干烤箱：用于消毒玻璃器皿。 高压消毒锅：用于消毒培养皿，手术器械。 过滤器：配制解剖 ...

1.如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。在开始进行新的细胞培养时，可以参考下表所列的条件： 细胞系 细胞类型 种 组织 推荐使用的培养基 293 成纤维细胞 人 胚胎肾 MEM 1 ...

组织培养（tissue culture)又称体外实验（in vitro)。 无菌条件下，将从机体取得的组织块或细胞置于体外的模拟体内各种条件下进行培养，培养条件包括适宜的营养液、O2、CO2、PH值、渗透压与温度等，还要防止微生物污染。可在倒置相差显微镜下直接观察生活级胞的运动、增殖、分化、吞噬等动态变化，并可用显微摄相、显微摄电影或显微录像等真实记录下生活细胞连续变化的过程强。 ...

从单个核细胞中分离T细胞 1）用玫瑰花结形成试验分离E＋细胞 1．制备AET-绵羊红细胞 1）在刻度离心管中，用无菌的含5％小牛血清的Hanks液洗涤绵羊红细胞3次，每次离心500×g 10分钟。 2）吸净上清液，测量红细胞比容。轻击试管分散红细胞，加入4倍红细胞比容量、新鲜制备的AET溶液，混匀。室温中反应30分钟。 3）用无菌的含5％小牛血清的Hanks液洗涤AET-绵羊红细胞5次 ...

按细胞比重分离B细胞 1.将2～3ml含3×107纯化的B细胞（B细胞>90％）的细胞悬液加到3ml Percoll溶液（比重1.074）上，水平离心1000×g 20分钟。 2.吸去无细胞上清液，交界面的低密度B细胞和大部分Percoll溶液。由于此时细胞沉淀非常松散，需留下约0.2ml Percoll溶液以防吸去了沉淀细胞。轻敲离心管，用留下的液体悬浮高密度B细胞 ...

用尼龙毛法分离B细胞 1）尼龙毛柱的制备 1.取直接3D，长度约10cm的尼龙毛，用0.2mol/L HCl浸泡处理过夜。用双蒸水洗净HCl，置37℃烘干备用。 2.称取50mg尼龙毛，均匀分散，置Hanks液中浸泡。取1ml注射器，出口接塑料管并夹住。将尼龙毛均匀填塞入注射器中，排净空气，柱高约5～6cm。此柱可分离约2×107细胞。将柱置－20℃可保存2～3个月。 2）分离细胞 1 ...

一、纺锤体阻断剂（Spindle inhibitor） 在有丝分裂过程中，随着纺锤丝的形成，染色体被牵引到一起难以观察其形态。纺锤体的形成在于细胞质和纺锤体成分的粘度之间的平衡，因此，改变细胞质的粘度，即可破坏纺锤体形成，从而使得染色体均匀散开，且染色体缢痕区更为清楚。 在培养中使用的纺锤体阻断剂为秋水仙素，在终止培养前加入适量秋水仙素，使正在分裂的细胞停留在中期，以获得大量分裂相供分析之用。秋水 ...

基础培养基 绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。Dulbec ...

一、机械刮除法 1、标记：镜下观察，用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位。 2、刮除：弃掉培养液，把无菌胶刮伸入瓶皿中，肉眼或显微镜窥视下，刮除无标记空间。 3、用Hanks液冲洗一两次，洗除被刮掉的细胞。 4、注入培养液继续培养，如发现仍有成纤维细胞残留，可重复刮除至完全除掉为止。 二、反复帖壁法 1、待细胞生长达一定数量后，倒出旧培养液，用胰酶消化后，Hanks冲洗2次，加入不含血 ...

选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考： (1 )建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时咨询。 (2) 其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。 (3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选 RPMI1640 。 (4) 用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长 ...

1、合适的细胞培养基 合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一。培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。 2、优质血清 目前大多数合成培养基都需要添加血清。血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。 3、无菌无毒细胞培养环境 无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的 ...

动物细胞培养开始于本世纪初，到1962年规模开始扩大，发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法，利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等，已成为医药生物高技术产业的重要部分。由于动物细胞体外培养的生物学特性、相关产品结构的复杂性和质量以及一致性要求，动物细胞大规模培养技术仍难于满足具有重要医用价值生物制品的规模生产的需求，迫切需要进一步研究和发 ...

一、原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 二、材料和试剂 1、细胞：贴壁细胞株 2、试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清） 3、仪器和器材：倒置 ...

一、原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 二、仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：胎鼠或新生鼠 试剂：1640 ...