细胞培养

头一次自己培养L929细胞，手忙脚乱的，把冷冻的细胞直接放进培养基里就结束了。过了60个小时，去显微镜下看，只能看到几个帖壁细胞。仔细想想做实验的步骤，又上网查查帖子，觉得可能是没有在第二天换新培养基的问题，导致冷冻液里的DMSO影响细胞贴壁。不知道培养皿里的细胞还有没有活下去的可能。总之第一次做实验结果不好也不应该轻易放弃。 把培养皿里的上清液转移到离心管里，离心，加入新的培养基重新放到培养箱里 ...

因为自己做PC12细胞培养，想在接种前将培育皿用多聚赖氨酸包被，到园子里搜索了下，关于多聚赖氨酸的帖子不少，看了一些帖子，将大部分收集在此。个人觉得关于多聚赖氨酸的配置、保存、使用各方面问题，这些帖子里面都解释了。 注：我只是摘了一个帖子里某段或某句话。一般一段话来自某一位战友。 一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用0.1 mg/ml进行包被。 二、其他常用包被方法比较( ...

大部分文献报导差速时间是2小时，但我个人做实验是遇到的情况说明2小时有些长了，已经有心肌细胞贴壁，而且把上层悬液吸出后转移，不知道为什么不好帖壁，成活率较低。我用的是0.125%胰酶分次消化。请各位有经验的战友讨论。 我觉得影响心肌细胞贴壁的因素可以总结为如下几点： 1、所用老鼠的品系以及年龄：SD大鼠和Wister大鼠还是有很大差别的，包括小鼠在内也是，大部分用SD大鼠差速贴壁时间为2小时，个 ...

养BMDC有好几个月了，看了2、3篇文献就开搞，发现论坛里还是有一些战友养这个。就想开个专题讨论贴，请新手老手都上来谈谈经验或者问些问题。集思广益，大家相互促进下。 我在论坛里看到因为有战友养DC看百把篇文献的，感到佩服又奇怪，就BMDC的培养我目前只知道有个经典版本和改良版本。 我用的是改良版本，参考文献改天附上（可能养这个的战友大多看过了），说 1.取小鼠股骨胫骨，小鼠要年轻！（6W-8W，以 ...

人血细胞由红细胞,白细胞,血小板等组成.实验中常用白细胞来做研究,如炎症渗出,细胞迁移,识别等都涉及到白细胞.白细胞又分为:粒细胞,淋巴细胞,单核细胞等.它们具有不同的功能.实验中常需要分离血细胞方能进行。 本贴主要论述人外周白细胞的分离，主要是中性粒细胞（Neutrophil），淋巴细胞（Lymphocyte），单核细胞（Monocyte）的分离。其它骨髓，脾淋巴细胞等分离可参，不同种属间请注意分离液的选择。

1. 乙醚麻醉致死大鼠（3～5 weeks）/小鼠（1～2月，年龄稍大可保证细胞数量）注：1、建议用大鼠做，小鼠取样时，细胞数量偏少，较难养活。2、对于大鼠的年龄，好像要求不太严格，文献上记载一般用3～5 weeks，但我用12 weeks的大鼠做也能成功。 2. 75%乙醇中消毒5～15min。 3. 无菌条件下取腹股沟部、肾、附睾周围的脂肪组织，用Hanks（Hanks配置较麻烦，用PBS也无 ...

PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株，具神经内分泌细胞的一般特征，因其具可传代特点，广泛应用于神经生理和神经药理学研究。 1. PC12细胞有两种：未分化型和分化型。其中未分化型的PC12细胞贴壁能力强，传代时需要胰酶消化，形状不规则。分化型PC12细胞传代时不需要胰酶，直接可以吹下来，形状规则。这两种细胞没有很大的区别，但我在实验中发现，未分化型的PC12细胞对药物的敏感性较之分化型的要 ...

一、污染的清除 培养细胞一经污染，多数较难处理。如果污染细胞价值不大，宜弃之；有细胞株留存的或可购置的，可在寻找原因后彻底消毒操作室，复苏或重新购置细胞，再培养。若污染细胞价值较大，又难于重新得到，可采取以下办法清除。 （一）、使用抗生素 抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双抗生素(青霉素100u/mL加链霉素100μg/mL)，污 ...

我最近在做人滋养细胞原代培养，先是用的胰酶消化法，percoll和不用percoll都做了，接种到培养瓶（25ml）里的细胞的覆盖率不到30%，可怜，长了n长时间，也就那么几个细胞。老板建议用组织块，不知道会怎样。 胰酶消化法： 1.标本少。由于我们取材都是6~8周的绒毛，个人感觉很少，而且那个绒毛连在妊娠囊上，很难的分开，我一般都是用镊子嵌夹下来的，不知道文献中的“取蜕膜和羊膜之间的 ...

悬浮细胞一般几天离心一次，觉得好难养啊！求心得？ 丁香园网友goingba认为：你养的是什么细胞，原代吗？我觉得悬浮细胞最好养了，不用消化，关于几天离一次心，要看你的细胞生长状态了，我养过血液肿瘤细胞，增值比较快，我一般是第二天半量换液（加等量培养基后一分二），第三天若长得比较满，就离心换液。若你不想每天都去管它，你可以把细胞密度中的相对稀一点（不能太稀，太细了细胞不好好长），可以2-3天换一次 ...

1.实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow)以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%ethanol擦拭无菌操作台面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一 ...

最近，我把杂交瘤细胞复苏了，可是做了三次都死掉了。同期复苏的SP2/0却能活。1，我的细胞是在-76保存，放了半年，2，-76的冰箱温度有波动，经常打开门，3，细胞复苏后大量死亡，但是也有很少的比较圆的透亮的活细胞，4，细胞不贴壁，第二天就就死了，5，复苏的过程正常，37度速解冻。 请高手帮忙分析一下，或者遇到相同问题的朋友分析交流一下。 丁香园网友haha63认为：没按规定保存在液氮所致！细胞切 ...

一、概念 1、细胞系（Cell Line）：原代培养舞经首次传代成功即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（Lineage of Cells）所组成。 2、细胞株（Cell Strain）：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果不能继续传代或传代数有限，称为有限细胞株（finitecell st ...

肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。 一、组织培养肿瘤细胞生物学特性 肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿 ...

一、原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 二、材料和试剂 1、细胞：贴壁细胞株 2、试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清） 3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、 ...

一、原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 二、仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：胎鼠或新生鼠 试剂：1640培养基（含20 ...

一、细胞培养基本概念 细胞培养是指从体内组织取出细胞模拟体内环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物为单个细胞或细胞群。 在医学遗传学研究中应用最广泛的是外周血淋巴细胞、皮肤成纤维细胞和各种能在体外长期生长的细胞系。外周血淋巴细胞培养具有时间短、技术简便、可重复取材等优点，它在临床染色体分析中使用最广泛。体外培养细胞株可在培养 ...

细胞培养用的筛网的相关知识，单位的含义及其与相关单位的换算。

细胞培养需要注意无菌操作、实验用品等及细胞培养的简单步骤。

脂肪源干细胞的培养的准备和步骤。