细胞培养

近十几年来，由于生物制品行业的飞速发展，传统的通过生物化学技术从动物组织获取生物制品的方法已经远远不能满足市场的需求，通过动物细胞在体外大规模培养来表达特定的蛋白、单克隆抗体、干扰素及病毒疫苗制品已成为目前最普遍的技术。 动物细胞体外大规模培养技术是在人工条件下，设定pH、温度、溶氧等，在细胞培养载体（容器）中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。常用的大规模培养的动物细胞有鸡胚成纤维细 ...

我们通过联合原代培养的骨骼肌成肌细胞与水凝胶骨架，制作出一种外科手术可植入式组织构成物。该生肌构成物能作为心脏上位腔室和低位腔室之间的电学导管。

人类胚胎干细胞必须被仔细地照料，以维持其健康和不分化。至少每天要更换一次培养基，目的是补充消耗掉的营养物质以及去除不需要的分化因子。

视频介绍的斑马鱼精子超低温保存方法由Harvey法改编而来，在原始方法的基础上引入了两处改变。首先，使用不含冷冻保护剂的冷冻介质标准化精子体积；第二，精子冷藏于冷冻管中，不再存储于毛细管，既简化了程序，又提高样品的均匀性。

我们示范了制备感觉-运动神经元培养物的步骤，包括成年和幼年海兔的麻醉，神经节解剖，用蛋白酶消化神经节，微解剖法移除联结组织，感觉-运动神经元的鉴定、分离和共培养等。

电穿孔是将质粒DNA或siRNA导入原代细胞最有效的途径。Gene Pulser Mxcell电穿孔系统以及Gene Pulser电穿孔缓冲液是专为将核酸导入哺乳动物细胞及难转染的细胞而设计的。在本视频中，我们演示了如何从老鼠骨髓中制备原代造血细胞培养物，以及随后地利用Mxcell电穿孔系统进行细胞电穿孔。

在一般情况下，胚胎干细胞分化首先是生成不成熟的祖细胞，然后再增殖和分化为成熟细胞表型。这同样适用于由胚胎干细胞衍生神经发生。

目前卵母细胞和胚胎的冷冻保存方法主要有两种：慢速冷冻和玻璃化冷冻。尽管玻璃化冷冻速度快且无需昂贵的实验设备，慢速冷冻仍是卵母细胞/胚胎冷冻保存最常用的方法。在这个视频，我们逐步讲述了如何高存活率地收集和慢速冷冻仓鼠卵母细胞。同样的程序也适用于冷冻和解冻处于不同发展阶段的小鼠胚胎。

成年啮齿动物心脏细胞原代培养是一种重要的心血管研究模式系统。然而对于许多研究者来说，建立切实可行的成年心肌细胞培养方法不但具有技术挑战性，而且还是一个限速步骤。这里我们介绍一种高产出的成年大鼠心肌细胞培养方法。

在听觉器官研究中外植体器官的分离及体外培养已成为一个越加重要的工具，本视频示范了分离和培养新生小鼠Corti器的方法。

将演示正确的人类胚胎干细胞冷冻和解冻过程，包括快速解冻保存于液氮灌中的人类胚胎干细胞，接种至含小鼠胚胎饲养细胞的平板，缓慢冷冻人类胚胎干细胞。

氧气是许多细胞通路的关键调节剂，而目前的补氧装置各自存在着不足，因此我们组建了一个适于多孔板的微加工插入物，该补氧插入物可有效控制时间和空间上的氧气浓度，以便更好地模拟体内生理学环境。

四转录因子强力霉素诱导性慢病毒转导系统能够诱导多种成年小鼠体细胞形成胚胎干细胞样特性的原代和次代多能干细胞（iPS ）。

介绍了经改良的雏鸡卵外培养和绒毛尿囊膜试验方法，使用此方法时小鸡存活率超过50%，且能成功应用到大量科学研究中。

静电纺丝法生成的纤维支架，可以很好地模拟天然细胞外基质的结构和大小规模，常用于组织工程和细胞培养的研究。

视频以小鼠胚胎成纤维细胞为例，详细介绍了利用Gene Pulser Mxcell电穿孔系统高效转染原代细胞的方法，如细胞的准备、仪器的设置及电转过程，并附上了转染后细胞的图像。

视频包括剥离小鼠胚胎视网膜、出生后的视网膜以及成年视网膜，在类似体内环境下器官型培养视网膜全胚胎，以及视网膜全胚胎的离解和细胞离心涂片等内容。

本视频介绍了一种从肝素化但未经处理的成人外周血中分离集落形成样内皮祖细胞(ECFCs)并对其进行大规模扩大培养的新方法。

一个利用由40～50ml血液按常规方法制成的富血小板血浆制备混合人血小板裂解物，作为人干细胞无动物血清培养有效添加剂的可行程序。

视频示范了利用人类转录因子慢病毒组重构人类成纤维细胞从而得到诱导性多潜能干细胞的过程，并利用形态学特征和多潜能标记AP以及表面标记TRA-1-81、RA-1-60等作了验证。