细胞培养

一、程序冻存步骤（需梯度降温）1、配置冻存液，冻存液推荐配比：55%（基础培养基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；推荐使用Procell通用血清型程序冻存液，货号PB180436；2、制备好的细胞悬液计数，计算总细胞量；3、细胞离心后尽量吸干净上清，离心转速1200rpm（250g）3min；4、加入配置好的冻存液重悬，调整细胞浓度为3×106~1×107cells/mL；5、分装入冻存管，一个冻存管 ...

养过RAW 264.7细胞系的小伙伴，都容易为一个问题感到苦恼：它太容易分化了！到底怎样才能养好它呢？RAW264.7细胞培养注意事项有哪些，今天我们就给大家分享一些心得。RAW264.7细胞培养之基础篇RAW264.7细胞培养的第一步，是要对它的基础培养条件了如指掌，比如生长特性、细胞形态、所需的培养基，甚至培养环境、传代比例等等，做到知己知彼，才能百战百胜。 ▲产品详情细胞系:RAW 264.7培养基:CM-0190▲RAW26 ...

“完全培养基” 指的是已经添加了各种添加物、含有培养基的所有成分、能够满足某种特定细胞生长所需的培养基。通常是使用限定成分的培养基来配置，一些不稳定的成分——如谷氨酰胺以及各种补充物、血清、生长因子或激素，都在临用前加入。限定成分的培养基品种繁多，从简单的仅含有必需氨基酸、维生素、无机盐的 Eagle's MEM，到复杂的 M199、F12 等，这些都可被用作一种基础培养基，添加各种不同的特殊物质，以满足许多不同类型细胞的需求。氨基酸氨 ...

小鼠脑神经瘤细胞概述及培养方法！ 一、细胞介绍克隆 Neuro-2A 是由 R.J.Klebe 和 F.H.Ruddle 经 A 株白鼠的自生肿瘤建立。该细胞产生大量微管蛋白，此蛋白在神经细胞中起应答轴浆流动的收缩系统作用。二、基本信息平台编号：bio-73109拉丁属名：Neuro-2a细胞名称：Neuro-2a （小鼠脑神经瘤细胞）种属：小鼠 年龄（性别）： 组织来源：脑神经母细胞瘤，神经母细胞 生长特性：贴壁 细胞形态：神经细胞样、阿米巴样 背景描述：Neuro-2a细胞是由R· ...

1 介绍用于生产治疗性重组蛋白的哺乳动物补料批次细胞培养物的性能和产量取决于细胞对变化的培养环境的反应。广泛报道的一种提高哺乳动物细胞生产力的策略是基于在高渗条件下培养细胞的。例如，通过加入无机或有机渗透剂（如 NaCl 或山梨糖醇）来增加渗透压。但是，细胞比生产率的提高与细胞生长的降低相结合，通常不会在产品产量方面带来整体收益。双相分批培养或逐渐增加渗透压、渗透保护成分和随后的继代培养已被成功地用于克服细胞生长抑制的 ...

我们可能都有过这样的经历：辛苦呵护的细胞，怎么也不愿意贴壁；贴壁了又很容易成块或者成团掉下来；原本贴壁的细胞，复苏后细胞不贴壁了；........遇到这样的问题你都如何解决？这次我们就来聊聊，为啥你的细胞为这么矫情，不愿贴壁呢？体外培养细胞贴壁与什么有关？首先并不是所有的细胞在体外培养的情况下都会贴壁，但大部分来自实体组织器官的细胞都会贴壁。贴壁的过程可能是这样的：细胞首先分泌细胞外基质，这种细胞外基质黏附在支持物的表面 ...

我养细胞有 8 年历史了，现在我的细胞已成为大家参观和崇拜、学习的对象。好的经验要分享，这就将我这几年来养细胞的经历和感想跟大家交流一下。启蒙老师的重要性一般进实验室都有师兄师姐带着做，他们就是你做细胞的启蒙老师。他们的操作手法、细节、理论讲解就成了你操作的准则，如营养液、细胞瓶的摆放位置；灭菌处理程序；开盖手法；细胞吹打手法等等。要学会他们的正确操作，在第一次的时候就要重视。好细胞要及时保种细胞要分批传代，这样即使有一批 ...

很多小伙伴在养细胞的时候，总是会出现这样或那样的问题，很多时候，那是因为你没有注意以下的细节问题，现在我们一起来看看：细胞培养前的准备在您带上手套开始细胞培养之前, 先检查一下移液管和瓶子的数量是否充足, 以免在开始实验后再次出入操作台，这样可以降低细胞污染的风险。细胞培养基也应先预热, 选择只预热部分培养基而非整瓶加热, 不但可以节约实验时间, 而且可以避免因反复加热培养基而造成的蛋白质降解。结束操作后, 别忘了培养基对光敏感, 应尽可 ...

目前，细胞冻存最常用的技术是液氮冷冻保存法，主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻，细胞内外的水分会很快形成冰晶，从而引起一系列不良反应。如细胞脱水使局部电解质浓度增高，pH 值改变，部分蛋白质由于上述原因而变性，引起细胞内部空间结构紊乱，溶酶体膜由此遭到损伤而释放出溶酶体酶，使细胞内结构成分造成破坏，线粒体肿胀，功能丢失，并造成能量代谢障碍。胞膜上的类脂蛋白复合体也易破坏引 ...

养细胞是医学研究生的基本功。我养过骨髓 MSC、心肌细胞、心肌成纤维细胞、AD293 腺病毒包装细胞、PA317 逆转录病毒包装细胞。养得最多的是 MSC。有三个小经验和大家分享一下：1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸 / 碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷 ...

据统计约30%细胞系被交叉污染或错误辨识，因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗灾难性后果……，这浪费大量时间、精力和金钱。Everything was going along fine until they discovered their HeLa cell line expressed Y chromosome markers因此近年NIH、ATCC、Nature和Science等对此多次发出呼吁，要求研究者对细胞进行鉴定 ...

在细胞培养中常可见到培养液中出现大小不等、形态不同的黑色颗粒。只要这种黑色颗粒一出现，我们的细胞不是停止生长就是陆续死亡。人们常称这种颗粒为「黑胶虫」。听说，这种黑色颗粒还会「游动」？小编想想都鸡皮疙瘩掉一地。难道真的是细胞长虫子了吗？今天我们就来科普一下，这个科研人员这个科研人员闻之变色的「小虫子」到底是 What！Hey！胶虫！你别跑！！不想看长篇大论的亲，小编贴心的提前告诉你们结论——神秘的「Hey 胶虫」，主要来源于培养液 ...

用好的血清，细胞一定状态良好？养细胞细心、体贴像照顾小孩纸，细胞一定「平平安安」？但 MTT 等一些细胞实验结果却异常。因为你的细胞已悄悄被支原体污染了。支原体是一种生命力顽强的细菌，它和其他细菌的区别在于，支原体没有细胞壁，只有柔软的细胞膜。娇小的身材（0.15-0.3μm）让它可以轻松穿过滤器。由于身形小，培养物不会表现出浑浊或其他明显可见的特征，因此支原体很容易被忽视。但支原体其实已经随着操作者的操作「偷偷地」潜入超净工作 ...

市场上的胎牛血清种类繁多，鱼龙混杂，很多科研工作者，特别是刚接触细胞培养的人，难以分辨血清质量的优劣。本人根据十多年来血清生产销售的经验，总结如下：一、外观拿到血清，最先接触的是血清外观，对于缺少细胞培养经验的人来说，外观的判断尤为重要1、颜色根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响，这个指标的意义在于能体现出采 ...

细胞培养中的污染分为两类，化学污染和生物污染。化学污染化学污染是一些对细胞有毒性的或对细胞产生刺激的化学物质。这些污染一般来自于没有洗净的器皿、不纯的化学试剂和质量较差的蒸馏水等。化学污染中比较引人注意的是细菌内毒素。它是革兰氏阴性细菌细胞死亡后解体释放出的疏水性的细胞壁组成物质，对塑料等疏水性强的物质有很强的吸附能力。细菌内毒素可刺激部分细胞产生一些激素或细胞因子，对细胞生长和实验结果产生影响。细菌内毒素 ...

细胞制作

1. 细胞污染的种类细胞污染一般可分为微生物污染和真核生物污染。其中微生物污染包括真菌和酵母、细菌、支原体等。而真核生物一般是细胞系间的交叉污染。细菌、真菌或酵母的污染很容易辨识，直接可通过培养基颜色变化、显微镜下观察便可判断。如细菌污染后细胞培养基变黄色，而且镜下有小黑点，且有规律的运动。而酵母污染后培养基变紫色，镜下可见透明、且连成一串的圆形。但如果是支原体污染的话，由于最开始支原体生长缓慢，而且显微镜下难以看出， ...

1. 不同的细胞，喜欢的环境是不一样的这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是 ...

细胞培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，这种情况是怎么引起的呢？该怎么避免呢？原因：黑点，大概有细胞本身带的，环境有的，还有人身上带进细胞间的， 还有就是血清和培养基。解决办法：1、如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理；2、如果小黑点没有增殖趋势，且不影响细胞生长，也不影响实验的话，则可能a、是「黑胶虫」，黑胶虫究竟是一种生物还是非生物，本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫，也有人认为是细菌，或 ...

目前市场上的血清品牌五花八门，除了名气最大的 Gibco，Hyclone 之外还有很多其它的进口品牌和国产品牌。价格也高低不一，可以称得上鱼龙混杂，血清的水深的很。很多不法奸商为追逐高额利润，大肆造假，炮制出许多所谓 Gibco，Hyclone 等「原装进口胎牛血清」，甚至很多国家严禁进口的疫区血清或者超级紧俏的血清货号，他们都能提供「大量现货」，坑害广大科研工作者，造成实验失败，毕业延期等恶劣影响。特别是近年来，进口血清紧俏，价格 ...