琼脂糖凝胶电泳

天心令 本虾米急需知道puromycin resistance protein （puroR）的KDa量是多少在google上，pubmed上，搜了好些天，都没有搜到请高手们指点指点在pubmed的protein上搜索，它有氨基酸数目的显示，但没有分子量的显示。谢谢各位先woxingwosu 最好把你的搜索到结果的网页发出来，或者是pubmed的地址，这样才好给你分析。那你有没有找到puroR的基因序列呢？如果有的话，可以自己通 ...

琼脂糖凝胶的制备1、 取5×TBE 缓冲液20ml 加水至200ml,配制成0.5×TBE 稀释缓冲液,待用。2、 胶液的制备：称取0.4g 琼脂糖,置于200ml 锥形瓶中,加入50ml 0.5×TBE 稀释缓冲液,放入微波炉里(或电炉上)加热至琼脂糖全部熔化,取出摇匀,此为0.8％琼脂糖凝胶液。加热过程中要不时摇动,使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。加热时应盖上封口膜,以减少水份蒸发。3、 胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用橡皮膏(宽约1cm)紧密封住。将封好 ...

琼脂糖电泳步骤之超级基础篇----对论坛的一些帖子和个人的看法做个汇总，欢迎大家多多指正。一、电泳前准备准备内容作用1.刷干净电泳制胶的梳子，板子，槽子，蒸馏水洗净晾干防止不必要的重复污染，减少外来的污染。梳子干净有利于梳孔的形成。2.检查电泳槽，根据情况更换buffer排除电泳槽的电极接触不良，确保buffer的缓冲能力，减少污染。3.根据DNA的分离范围选择合适的胶浓度并记录达到较好的分离效果，防止样过快跑出胶或 ...

最近在做核酸电泳，感觉自己做的差的要死，羞于见人……无奈之下上上网，到处找找资料咯。话说现在做实验似乎已经变成生活的一部分了，不然我怎么感觉这些实验资料每个看起来都这么像人人、豆瓣上分享的生活小贴士……1、让凝胶电泳变得更快,更漂亮方法改进:将电泳电压进行定时变化,例如可以在开始时将电泳电压调节至 100V,大约 15min, 使条带的确可以因为自身片段大小不同而产生较大差别的泳动速度,从而将片段分离,然而现在的分离 或许会间距较 ...

SOUTHERN BLOT PROTOCOLFollowing electrophoresis and staining of DNA, cut the agarose gel to size by removing the wells at the top of the gel (to prevent buffer transfer through the wells), and any blank or unrelated lanes that do not need to be transferred.UV treat for 5 minutes on the transilluminato ...

影响电泳分离的主要因素：1. 待分离生物大分子的性质：待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说，子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快。2. 缓冲液的性质：缓冲液的pH值会影响待分离生物大分子的解离程度，从而对其带电性质产生影响，溶液pH值距离其等电点愈远，其所带净电荷量就越大，电泳的速度也就越大，尤其对于蛋白质等两性分子，缓冲液pH还会影响到其电泳方向，当缓冲液p ...

核酸相关技术动画集锦RT-PCR cartoon原文链接：http://www.kexue.com.cn/blog/user_content.aspx?id=13509Southern blot原文链接：http://www.kexue.com.cn/blog/user_content.aspx?id=13468DNA Fingerprinting原文链接：http://www.kexue.com.cn/blog/user_content.asp ...

药物潜在靶标的识别对于早期药物分子的研发、安全性评价和老药新用等领域都有着非常重要的意义，但是受制于通量、精度和费用的影响，实验手段的应用难以广泛开展。作为一种快速而低成本的手段，计算机辅助的靶标识别算法的开发正在受到越来越多的重视，发展快速、精确的靶标识别预测方法对于靶向性药物开发、药物-靶标相互作用网络图谱的构建和小分子调控网络的分析都具有十分重要的意义。目前，通过计算机辅助进行反向找靶主要有三种方法：反 ...

凝胶层析原理：视频本视频来自

教你怎么读电泳结果：视频本视频来自

抗体孵育：进阶篇：首先，抗原抗体识别原理的物理学解释，抗体孵育过程实际上就是一个竞争结合的动力学过程。由于抗原和抗体特异性结合的效率是非特异性结合的数百万--数十亿倍，所以当特异性抗体与非特异性'抗体'（不好描述，指添加在抗体稀释液中的封闭蛋白，我们可以把它们看成非特异性的一抗）竞争时，尽管抗体稀释液中封闭蛋白的浓度是一抗浓度20K：1以上，在碰撞几率相同的条件下，由于时间的积累加孵育过程中反复漂洗（孵育抗体要摇晃， ...

蛋白质的提取工作是将经过处理或破碎的细胞，置于一定的条件和溶液中，让被提取物充分释放出来的过程。影响提取的因素主要是被提取物质在提取的溶液中溶解度的大小及由固相扩散到液相的难易程度。某一物质在溶剂中溶解度大小与该物质的分子结构及溶剂理化性质有关，一般遵守“相似相溶”的原则。扩散作用对蛋白质的提取有一定的影响。减小溶剂的黏度、搅拌和延长提取时间可以提高扩散速度，增加提取效果，提取的原则是“少量多次”，即对于等量的 ...

在体外将两个或多个来源相同或不相同的DNA片段连接成新的重组DNA分子，再转到特定宿主细胞中进行自主复制并表达。这是分子生物学中的基本技术。DNA重组技术的基本程序包括：（1）获得外源DNA：外源DNA是进行DNA重组的目的DNA片段，一般采用DNA聚合酶链式反应(PCR)或逆转录-DNA聚合酶链式反应(RT-PCR)、基因组文库或cDNA文库筛选等方法获得。（2）载体的构建或选择：分子生物学中用的载体是指能在特定 ...

【实验目的】 熟悉蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理，掌握蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作方法，了解SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用范围。 【实验原理】 蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。当溶液pH值大于蛋白质等电点时，蛋白质带负电荷，在电场中向正极移动；反之则向负极移动，这种带电的颗粒在电场中泳动的现象称为电泳（electrophoresis）。不同的蛋白质由于等电点 ...

【实验目的】 掌握PCR技术的原理，学习PCR技术的基本方法，了解PCR技术的应用范围与意义。 【实验原理】 详见14章第2节。 【实验对象】 特定的DNA序列。 【试剂与器材】 引物(primer)，根据需扩增的DNA设计相应的引物；TagDNA聚合酶； 10×PCR缓冲液(随酶一起购买)；5mmol/L dNTP贮备液(商品化产品)；DNA模板(需扩增的 DNA)；双蒸水；矿物油；PCR反应管；微量移液器；离心机及PCR仪。 【实验方法与步骤】 标准的PCR操作程序是将 ...

【实验目的】 掌握Western Blot技术的基本原理， 学习Western Blot技术的实验方法， 了解Western Blot技术的应用范围。 【实验原理】 Western Blot（蛋白质印迹或免疫印迹）技术，以蛋白质为检测对象，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将样品蛋白质分离，再转移到固相载体（PVDF尼龙膜或NC膜）上；固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变； ...

【实验目的】 掌握RNA印迹技术的基本原理，学习RNA印迹技术的操作方法，了解RNA印迹技术的意义与应用。 【实验原理】 将RNA变性及电泳分离后，转移到固相支持物上，用于与DNA探针杂交以鉴定其中特定RNA分子的大小与含量。基本原理与Southern印迹相同，但RNA变性方法与DNA不同，不能用碱变性，因为碱会导致RNA的水解。 Northern印迹主要用于组织细胞靶基因表达水平的研究以及对同一组织细胞的不同基因间的表达水 ...

【实验目的】 掌握DNA印迹技术的基本原理， 学习DNA印迹技术的操作方法，了解DNA印迹技术的应用范围。 【实验原理】 DNA印迹是1975年由英国Southern创建的。其基本原理是：DNA分子经限制性核酸内切酶酶切后，由琼脂糖凝胶电泳将所得DNA片段按分子质量大小分离，然后将DNA片段变性，并使凝胶中的单链DNA片段转移到尼龙膜、硝酸纤维素膜(NC)或其他固相支持物上，此法中DNA片段由液流携带通过虹吸作用由下向上抽吸， ...

琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度离心法）所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶EB（德元国际Cat# LY5009）染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外,还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条带,用于以后的克隆操作。琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝 ...

相关专题 凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用、DNA定性和定量分析。生物素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。 EMSA分析调控位点应用原理图 如上图所示，DNA-复合物比非结合的探针移动得慢;当检测DNA结合蛋白，可用纯 ...