1. 电泳图谱不齐或分离不良 这是电泳分析中最常见的问题,多数是由于血清滴加不均匀或滴加过多,也有因薄膜质量不合要求所致。点样这一步非常关键,一定要按操作步骤进行。首先选择质匀、孔细、染料吸附少的薄膜充分浸透缓冲液至湿度均匀无干白点。然后将滤纸吸去薄膜表面的多余水份,使薄膜含水量饱和均匀,这样才能防止薄膜表面液体含量不均,水份移动而引起标本移位。 点样前注意关闭门窗和风扇,因空气流 ...
一、原理 带电粒子在电场中向着与其自身带相反电荷的电极移动的现象,称为电泳。控制电泳条件(如pH 等),使混合试样中的不同组分带有不同的净电荷,各组分在电场中移动的速度或方向各不相同,从而达到分离各组分的目的,这就是电泳分析法。以醋酸纤维素薄膜作支持物进行电泳分析的方法称为醋酸纤维素薄膜电泳法。 在pH4.8 电泳缓冲液条件下,带有不同量磷酸基团的AMP、ADP、ATP 解离之后,带有负电荷量 ...
一、原理 血清中各种蛋白质的等电点大都低于pH7.0,在pH8.6巴比妥缓冲液中,它们均电离成阴离子,在电场中向阴极泳动。由于各种蛋白质在同一pH环境中所带电荷多少及分子大小不同,所以在电场中的泳动速度不同。一般所来,蛋白质分子量小而带电荷多者,泳动速度快,分子量大而带电荷少者泳动速度慢,因此可以利用其泳速不同将之分开。 血清中含有清蛋白、α-球蛋白、&be ...
实验原理 醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。它具有简便、快速、样品用量少,应用范围广,分离清晰,没有吸附现象等优点。目前已广泛用于血清 蛋白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白、多肽、核酸、同工酶及其他生物大分子的分析检测,是医学和临床检验的常规技术。 本实验以醋酸纤维素为电泳支持物,分离各种血清 蛋白。血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ- ...
原理 以醋酸纤维薄膜为支撑物,浸入pH8.6的缓冲液后吸去多余液体。将微量血清点于膜上,电泳后,将薄膜置染色液中使蛋白质固定并染色,洗去多余染料。 操作 1. 准备与点样 (1)将薄膜切成2.5×8 cm 的小片。在薄膜无光泽面(正面)的一端约2 cm 处用铅笔划一线,以标明点样位置。 (2)将薄膜无光泽面向下,漂浮于巴比妥缓冲液面上(缓冲液盛于培养皿中),使膜条自然浸 ...
醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。 种薄膜对蛋白质样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的缓冲液也少,电泳时电流的大部分由样品传导,所以分离速度快,电泳时间短,样品用量少,5 μg 的蛋白质可得到满意的分离效果。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。 醋 ...
醋酸纤维薄膜电泳(cellulose acetate membrance electrophoresis)以醋酸纤维薄膜为支持物。它是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于丙酮等有机溶液中,即可涂布成均一细密的微孔薄膜,厚度以0.1 mm~0.15 mm 为宜。太厚吸水性差,分离效果不好;太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。 应用 醋酸纤维薄膜电泳操作简单、快速、廉价 ...
实验原理血红蛋白电泳(hemoglobin electrophoresis)目的是检出和确认各种正常和异常的血红蛋白。根据不同的血红蛋白带有不同的电荷,等电点不同,在一定的pH缓冲液中,血红蛋白的等电点小于缓冲液的pH时带负电荷,电泳时在电场中向阳极泳动,反之,Hb带正电荷向阴极泳动。在一定电压下,经过一定时间的电泳,不同的血红蛋白所带电荷不同,分子量不同,其泳动方向和速度不同,可分离出各自的区带 ...