蛋白质活性测定

相关专题 通过大肠杆菌表达目的基因大量获得重组蛋白是一个方便快捷的方法。植物中克隆的目的基因被克隆到特异设计的质粒载体上，受噬菌体T7强启动子控制；表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导。当需要表达蛋白时，在细菌培养基中加入IPTG来启动表达。不同载体在邻近克隆位点处具有编码不同的多肽“标签”的序列，在定位、检测或纯化目的蛋白时提供方便。 ...

相关专题 一、原理1、 E . coli 表达系统E . coli 是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E . coli 菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-Page 以检测表达蛋白质。2、 外源基因的诱导表达提高外源基因表达水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外源基因的表达分成两个阶段，以减 ...

相关专题 我想表达遇到的第一个瓶颈估计就是为什么我的外源片段插到载体里面，PCR鉴定没问题，双酶切也OK，可是就是不见表达。一般我们是如何判断没有表达呢？大多都是首先进行SDS-PAGE。在跑胶的时候一定要设对照，比较严谨的电泳对照，应该是：Marker，标准品阳性对照（如果有，且打算做Western的话），以及空白载体（诱导）和重组载体（不 ...

相关专题 将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。但是，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修 ...

相关专题 赵军 侯云德 （病毒基因工程国家重点实验室 100052 北京） 本世纪60至70年代对大肠杆菌的研究使之成为自然界中最普遍为人们所认识的生物体。大肠杆菌具有两个显著特征：操作简单和能在廉价的培养基中高密度培养，它的这些特征加上十多年外源基因表达的经验使其在大多数科研应用中成为高效表达异源蛋白最常用的原核表达系统。尽管大肠杆菌 ...

相关专题 影响E.coli 中蛋白表达量的因素除载体启动子结构以外，还有质粒拷贝数、质粒稳定性、mRNA结构、密码子的偏爱性和宿主菌的生长状态等因素 ...

相关专题 一.实验步骤 1. 组织块称重 2. 利用液氮、研钵粉碎组织块 3. 加入RIPA缓冲液（每克组织3 ml RIPA），PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PMSF），利用Polytron进一步匀浆（15000转/分1分钟）维持4℃ 4. 加入PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PMSF），冰上孵育30 ...

相关专题 Author:Dang Vu Hoang Source:Laboratory of Vet.Biochemistry and Molecular Biology Chungbuk National University Republic of Korea Abstract: This protocol was used for ti ...

相关专题 下面的步骤适用于通过XCell Ⅱ转印系统进行蛋白印记的大部分应用。为达到最佳效果，用户的优化是必要的。 I. 所需材料： •Xcell SureLock™或Xcell Ⅱ™ Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001 EI9001及EI9051）•电泳后的迷你胶（mini-gel）（最大的尺寸 ...

相关专题 一、提取抗原蛋白 将提取RNA途中留存的样品，加入150μl100%酒精充分混匀，静置5min(RT)2000×g4℃离心5min吸取上清至新管中加入750μl异丙醇混匀静置10min(RT)12000×g4℃离心10min弃上清加入1ml0.3mol/L盐酸胍/95%酒精重悬沉淀用加样器打散沉淀混旋20~30秒静置20min(RT ...

相关专题 western blot PROTOCOLIn a Western blot proteins that are separated on polyacrylamide gels on the basis of size are transferred to a membrane for detection with antibod ...

相关专题 western blot analysis can detect your protein of interest from a mixture of a great number of proteins. Western blotting can give you information about the size of you ...

相关专题 蛋白浓缩方法基本有： 丙酮沉淀法；免疫沉淀法；三氯醋酸沉淀法；硫酸铵沉淀法；（低温）有机溶剂沉淀法；聚乙二醇沉淀法；超滤法；透析法；离子交换层析和冷冻干燥法…… 1.丙酮沉淀法；三氯醋酸沉淀法 试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。 2.免疫沉淀法：得有特异性抗体！ 3.硫酸铵沉淀法：利用高浓度盐将蛋白质析出（盐析） 选择硫酸 ...

相关专题 NRC Institute for Biological sciencesTriton X-114 extraction protocol (Hydrophobic protein preparation)Ressuspend Cells in Solution A (dil 1/8) and add 15 µl of mammal ...

相关专题 Protein表达是一个非常复杂的过程，因此很难预测表达的蛋白是否是可溶性的、包涵体形式还是部分降解的。为了预防各种可能的困难条件，在重组蛋白上导入两种Tag可以提供获得高纯度均质蛋白的灵活性。 蛋白含有两种不同亲和纯化Tag的重要原因： 纯化全长的蛋白 获得最高纯化的蛋白 适合变性或生理条件下纯化 优化的操作过程，可以直接从培养基 ...

相关专题 解离/非解离native缓冲液系统 很多应用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶区带电泳（zone electrophoresis）的研究使用一种缓冲液系统，该系统的设计把所有的蛋白质分解成单一多肽亚单位。最常用的解离试剂是十二烷基硫酸钠（SDS）一种离子型去污剂，它通过包围在多肽骨架的周围变性蛋白质。在包含有过量的SDS和巯基试剂的蛋白质样品，1 ...

相关专题 HPLC 优点：高压 速度快 分析精度高 所需样本量少，主要用于分析 纯化多肽类 缺点：柱子较贵 有些需要用乙氰甲醇等有毒有害试剂 不能或只能纯化 很小量的蛋白 AKTA 系统 优点： 中低压 容易放大 可大规模纯化蛋白类 常规只用无机盐类试剂 可配备各种介质纯化不同蛋白 可自己灌胶 费用较少 缺点：分析精度没有HPLC高 选用HP ...

相关专题 15种蛋白质单晶培养的方法：（1）大量养晶法（bulk crystallization）：若急着养出单晶，则将纯化之蛋白质溶液加入固体盐类或饱和盐液，直到溶液中出现乳白混浊色，离心后把上清液（suppernatant）放置数天至数周，有可能养出单晶。（2）批次养晶法（batch method）:若发现加入蛋白质的沉淀剂和盐类等化学药 ...

相关专题 1关于使用三氯醋酸沉淀法后蛋白质难于重悬的问题Q:1Hi !I have been trying to clean and concentrate proteins form eucariotic Cell culture medium in order to analyse them in 2D. I’ve read some p ...

相关专题 实验原理 ：利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细胞。细胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液经乙醇沉淀。 实验材料：新鲜植物叶片 实验步骤：1.取4g新鲜叶片，在液氮中研磨成粉末状(越细越好)。 2.转移至50ml离心管 ...