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蛋白质活性测定

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GST融合蛋白的准备 Preparation of Glutathione

相关专题 Margret B. Einarson and Elena N. Pugacheva Foxx Chase Cancer Center Philadelphia PA 19111Jason R. Orlinck Brigham & Women"s Hospital Boston MA 02115Excerpted from Prot ...

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蛋白质组学实验指南(Molecular Biologist Guide to Proteom

相关专题 全文下载:http://www.ebioe.com/down/html/down_276.htmPaul R. Graves1 and Timothy A. J. Haystead1undefined Department of Pharmacology and Cancer Biology Duke University11 and Seren ...

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Folin

相关专题 一、 目的掌握Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法,熟悉分光光度计的操作。二、原理Folin-酚试剂法包括两步反应:第一步是在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物;第二步是此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂(Folin 试剂)还原,产生深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物),颜色深浅与蛋白质含量成正比。此法操作简便,灵敏度比双缩脲 ...

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Western Blot Analysis by SDS

相关专题 MaterialsReady Gel Precast GelsBio-Rad Mini-Protean-3 Cell apparatusPrestained protein markers Reagents6x Laemmli reducing sample buffer Distilled H20 (dH20)Running bu ...

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小鼠β

相关专题 动物组织RNA的提取 实验目的:掌握由动物组织中提取总RNA的方法实验原理:Trizol试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和SDS的单相酸性溶液,其在裂解细胞的同时抑制RNase的活性,随后加入氯仿,酚会大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同,造成DNA分布在下层的氯仿酚溶液中,RNA则分布在上层的水相中,最后用异丙 ...

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各种大规模蛋白质相互作用研究方法分析

相关专题 关 薇 王 建 贺福初_(军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京 100850) 摘 要:随着2000 年酵母大规模蛋白质相互作用网络图谱的成功描绘,蛋白质相互作用特别是大规模蛋白质相互作用研究成为生命科学领域的又一个研究热点。酵母、果蝇、线虫以及人类蛋白的大规模相互作用图谱的相继完成,不仅对系统研究细胞内各种生命活动有着重要 ...

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新技术在研究细胞分裂中的蛋白分离中的应用

相关专题 &NBSp; 染色体分离是细胞分裂过程中的关键步骤,近期一个由奥地利、德国等组成的国际科研小组运用RNAi技术、蛋白定位等技术对近百种之前未被全面认识的人类蛋白复合物进行了全面的分析,相关研究成果发表在science杂志上。 近年来,利用酵母等真核模式生物突变体,研究人员克隆了一些调控细胞分裂早期姊妹染色体黏着和后期黏着素酶解的关 ...

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常用抗体的应用范围及选用方案

相关专题 在临床活检工作中,对于各种肿瘤的正确判断,历来是外科病理学的核心问题。因它关系到患者的治疗和预后的问题。在免疫组化技术没开展以前,主要靠HE,特殊染色和组织化学来进行鉴别和诊断各种肿瘤,这些在当时虽然解决了不少的问题,但是对于较为复杂,较为多型性的肿瘤,就不能对其起源及所含的成分作出正确的判断。 随着免疫组化工作的开展,给许多以往 ...

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蛋白质的性质(一)蛋白质及氨基酸的呈色反应

相关专题 一、目的:1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法二、呈色反应(一)双缩脲反应:1、原理:尿素加热至180℃左右,生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境下能与Cu2+结合生成紫红色化合物,此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键,其结构与双缩 ...

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蛋白质的等电点测定和沉淀反应

相关专题 一、蛋白质等电点的测定1、 目的:了解蛋白质的两性解离性质;学习测定蛋白质等电点的一种方法。2、原理:蛋白质是两性电解质,蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液酸碱度影响。当溶液的PH达到一定的数值时,蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等,在电场中,蛋白质既不向阴极移动也不向阳极移动,此时溶液的PH值称为此种蛋白的等电点。不同的蛋白质的等电 ...

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凝胶层析法蛋白质脱盐

相关专题 一、原理:含盐蛋白质溶液流经凝胶层析柱时,低相对分子量的盐分子因浸入凝胶颗粒的微孔中,所以向下移动的速度较慢;而大分子的蛋白质不能进入凝胶颗粒的微孔,以较快的速度流过凝胶柱,从而使蛋白质与盐分开。二、材料与试剂:葡聚糖凝胶(Sephadex G25)、洗脱液(蒸馏水或适宜的缓冲溶液)、含盐的蛋白质溶液、蛋白质检测试剂、无机盐检测试剂 ...

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斐林试剂测定还原糖

相关专题 一、原理:还原糖可以将斐林试剂中德二价铜离子还原为一价铜。反应终点可由次甲基蓝指示,根据一定量德斐林试剂完全还原所需的还原糖量,可计算所加入样品中还原糖的含量。 二、试剂与材料 1、斐林试剂:甲液:称取69.3g硫酸铜(CuSO4 5H2O)用蒸馏水溶解,定容至1000ml。 乙液:称取346g酒石酸钾钠,100g氢氧化钠,用蒸馏 ...

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凯氏定氮法测定蛋白质的含量

相关专题 一、原理:有机含氮化合物与浓硫酸共热消化,氮转化为氨,再与硫酸结合成硫酸铵。硫酸铵与强碱反应,放出氨。将氨蒸馏到过量的标准无机溶液中,再用标准碱溶液进行滴定。根据测得的氨量,计算样品的总氮量。 二、试剂与材料: 浓硫酸、硫酸钾-硫酸铜粉末(称取80g硫酸钾和20g硫酸铜(五水),0.3g二氧化硒研细混合)、30%氢氧化钠溶液、2% ...

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双缩脲试剂测定蛋白质含量

相关专题 一、原理:蛋白质含有两个以上的肽键,因此有双缩脲反应。双缩脲反应是指蛋白质在碱性溶液中与二价铜离子结合,生成紫红色络合物的反应。其颜色的深浅与蛋白质的含量成正比,而与蛋白质的相对分子质量和氨基酸的组成无关。 二、材料与试剂 双缩脲试剂:称取1.50g五水硫酸铜和6.0g酒石酸钾钠(四水),用500ml左右的蒸馏水溶解,在搅拌下加入 ...

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福林酚试剂法测定蛋白质含量

相关专题 一、原理:蛋白质与福林酚试剂反应,生成深蓝色复合物。蓝色的深浅与蛋白质含量成正比。可用分光光度计于500nm波长下进行测定。与标准曲线对照,而确定蛋白质含量。 二、试剂与材料 标准酪蛋白溶液(250ug/ml):酪蛋白预先用微量凯氏定氮法测定纯度,再称量制备。也可用250ug/ml牛血清蛋白质标准溶液。 福林酚试剂:吸取试剂A(0 ...

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Western Blot试验宝典

相关专题 Western Blot技术专题 Western印迹要想做的好,当然每个步骤都不能马虎 一.配胶 这些小孔的孔径随 “双丙烯酰胺~丙烯酰胺” 比率的增加而变小,比率接近 1:20 时孔径达到最小值。SDS聚丙烯酰胺凝胶大多按“双丙烯酰胺~丙烯酰胺”为1:29 配制,试验表明它能分离大小相差只有3% 的蛋白质。 分离胶及浓缩胶均可 ...

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WESTERN BLOT PROTOCOLS

相关专题 Western Blot技术专题 蛋白提取与溶液配制 溶液配制: RIPA Lysis Buffer (1L) Triton-X100 10ml SDS 1g NaCI 8.77g Tris HCI 2.42g Deoxycholatic Acid 5g 四种抑制剂: 1、Aprotinin(抑肽酶) 2、PMSF 3、Pepsta ...

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免疫组化实验过程中的要点和技巧

相关专题 1.固定:最好用4%的多聚甲醛固定液。对于冰冻切片,甲醛固定有时比冰冻丙酮好;但对于不同的组织和抗原,可选用不同的固定液。 有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液,请于购置前注意说明书。 Bouin S固定液:饱和苦味酸750ml,甲醛250ml,冰醋酸50ml,其对组织的穿透力较强,固定较好,结构完整,但因偏酸,对抗原有一 ...

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美发明新型固体NMR法检测蛋白结构

相关专题 近日,美国俄亥俄州立大学、国立卫生研究所(NIH)信息技术中心的研究人员在《Nature chemistry》杂志上发表最新研究成果“Protein fold determined by paramagnetic magic-angle spinning solid-state NMR spectroscopy”,他们将固体核磁 ...

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NusA技术:显著增强各种“难溶蛋白”可溶性

相关专题 NusA融合蛋白表达系统于9年前(1999年)由Davis发明,并在2000年由Novagen首先进行商业化设计和开发,特别推荐用于以NusA作为N端标签时提高在大肠杆菌中难溶的重组表达蛋白的可溶性。NusA融合蛋白表达系统面市至今,已经通过一些高通量表达筛选的评估确认其在可溶性改善方面的有效性。关于NusA融合表达蛋白去除或不去除 ...

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