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蛋白质活性测定

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考马斯蓝染色法原理

相关专题 Bradford法检测蛋白浓度专题 考马斯亮蓝法也称考马斯蓝染色法(coomassie blue staining)又称Bradford法。由于其突出的优点,正得到越来越广泛的应用。 考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色,最大光吸 ...

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lowry法测定蛋白含量的方法 来自2010版药典

相关专题 本法用于微量蛋白质的含量测定。蛋白质在碱性溶液中可形成铜-蛋白复合物,此复合物加入酚试剂后,产生蓝色化合物,该蓝色化合物在波长650nm处的吸光度与蛋白质的含量成正比,根据供试品的吸光度,计算供试品的蛋白质含量。 试剂 (1) 酚试剂 称取钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g、钼酸钠(Na2MnO4·2H2O)25g置1500 ...

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LOWRY法和考马斯亮蓝法测定植物可溶性蛋白含量对比

相关专题 植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类,测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。在研究每一种酶的作用时,常以比活(酶活力单位/mg蛋白)表示酶活力大小及酶制剂纯度。因此,测定植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目。常用测定方法有Lowry法和考马斯亮蓝G-250染料结合法。本实验将分别介绍这两种方法。 一、考马斯 ...

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经典Lowry–Folin法测定液体样品中蛋白质含量

相关专题 一、 实验目的 1、 了解测定蛋白质的常用方法 2、 掌握蛋白质含量测定的经典Lowry – Folin法。 二、 实验原理 在碱性溶液中,蛋白质中的肽键与铜盐可产生双缩脲反应,产生络合物,此络合物会将磷钼酸-磷钨酸试剂还原,产生深蓝色复合物。在一定的条件下,蓝色深浅与蛋白质的量成正比。在波长540nm处测定样品的吸光度,与标准曲 ...

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如何选择合适的蛋白含量测定方法?

相关专题 LOWRY法蛋白定量专题 对许多实验来说,确定蛋白样品浓度是至关重要的。如果在2D电泳中,蛋白过多或过少,产生的后果都将是相当严重的。大多数蛋白样品可通过比色测定法定量。在典型的蛋白测定中,化学试剂加入到蛋白样品溶液里产生颜色变化,这一变化可由分光光度计或酶标仪检测,并与已知浓度的蛋白标准曲线作比较。Bio–Rad 提供了4种蛋白测 ...

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酵母双杂交的实验步骤【分享】

相关专题 酵母双杂交技术专题 LexA酵母双杂交系统简介 一、LexA酵母双杂交系统的设计原理 报告质粒p8op-LacZ的GAL4 UAS编码序列被完全去除,因此在缺乏LexA融合激活剂的情况下,报告基因LacZ的转录活性为零,该基因的筛选标志为URA3,可以作为有自主复制能力的质粒存在于酵母EGY48菌株中,也可以被整合到EGY48基因组 ...

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酵母双杂交实验项目操作及心得体会

相关专题 酵母双杂交技术专题 1.构建CaM诱饵质粒 ① PCR 扩增CaM基因的开放阅读框,正向和反向引物分别加接酶切位点。 ② 扩增得到的CaM插入T载体( T–CaM) 。 ③ T–CaM和pGBKT7 质粒分别双酶切。 ④ 胶回收目的DNA。 ⑤ 将CaM连入pGBKT7,构建成表达载体pGBKT-CaM,转化大肠杆菌DH5&alp ...

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酵母双杂交实验常见问题及其解决方法

相关专题 酵母双杂交技术专题 1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的,该怎么办? 在某些情况下,在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp,接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板,在30℃下温浴,直至平板上的克隆相互粘在一起。用5ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆,并收 ...

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检测蛋白磷酸化的六种方法及其优缺点

相关专题 蛋白激酶将磷酸基团从ATP转移到蛋白多肽底物上的丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基,直接影响目标的活性和功能。放射性研究表明,真核细胞中大约30%的蛋白经过磷酸化修饰。这一关键的翻译后修饰调控了广泛的细胞活性,包括细胞周期、分化、代谢和神经元通讯。此外,异常的磷酸化事件与许多疾病状态相关。在评估磷酸化时,选择的方法可能会有所不同,这取决于 ...

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细菌蛋白提取与纯化的实验手册

相关专题 不同的蛋白质分离纯化的方法不同,但蛋白质分离纯化的操作步骤基本类似,那么如何进行细菌蛋白的提取呢?这里总结细菌蛋白的提取的实验试剂、操作步骤以及一些注意事项。 实验试剂 采用T7• Tag Affinity Purification Kit T7•Tag抗体琼脂。B/W缓冲液:4.29mM Na2HPO4,1. ...

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Folin—酚法测定血清蛋白的含量

相关专题 Folin—酚法蛋白质含量测定法是最为灵敏的方法,但其试剂也不容易配制。本实验的主要目的是掌握分光光度计的使用方法,学习Folin—酚法测定血清蛋白的含量。 一、目的 1、学习分光光度计的原理和使用方法。 2、学习Folin—酚法测定蛋白质含量的原理和方法。 3、进一步掌握比色法或分光光度法,准确测定未知样品。 二、原理 蛋白质浓 ...

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DNA分子的限制性内切酶消化操作流程

相关专题 限制性核酸内切酶产品选择专题 一、限制性内切酶对DNA消化的方案 1.限制性内切酶反应在灭菌的0.5ml离心管中进行。 2. 20μl体积反应体系如下: DNA 0.2-1 μg 10×酶切buffer 2.0 μl 限制性内切酶 1-2 u(单位) 加ddH2O 至 20 μl 限制性内切酶最后加入,轻轻混 ...

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纸层析法:分离鉴定氨基酸实验

相关专题 纸层析法是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术,可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。本文主要介绍了纸层析法分离鉴定氨基酸的实验原理、器材和具体操作步骤。 纸层析法 一、目的 通过氨基酸的分离,学习纸层析法的基本原理及操作方法。 二、原理 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。 层析溶剂由有机溶剂和水组成 ...

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利用沉淀实验测定蛋白质等电点

相关专题 蛋白质在PH等于等电点时,溶解度最小。本文主要介绍了利用沉淀实验测定蛋白质等电点的实验原理、器材、试剂和具体操作步骤。 蛋白质PH位于等电点时溶解度最低 一、蛋白质等电点的测定 1、目的 (1)了解蛋白质的两性解离性质。 (2)学习测定蛋白质等电点的一种方法。 2、原理 蛋白质是两性电解质。蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶 ...

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蛋白质组学实验指南(Molecular Biologist Guide to Proteom

相关专题 全文下载:http://www.ebioe.com/down/html/down_276.htmPaul R. Graves1 and Timothy A. J. Haystead1undefined Department of Pharmacology and Cancer Biology Duke University11 and Seren ...

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蛋白质鉴定试剂双缩脲的特点及其与Fehling's溶液的不同

相关专题 双缩脲试剂主要用于蛋白鉴定的试剂。其组成成分虽与菲林试剂相同,但两者的方法和原理却是大有不同。本文主要是介绍蛋白鉴定的常用试剂双缩脲的基本情况,以及其与菲林试剂的区别。 双缩脲试剂(biuret reagent)是由双缩脲试剂A(NaOH)和双缩脲试剂B(CuSO4)两种试剂组成. 双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 ...

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经典Lowry–Folin法测定液体样品中蛋白质含量

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紫外吸收法

相关专题 蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。此外,蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。利用一定波长下,蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系,可以进行蛋白质含量的测定。紫外吸收法简便、灵敏、快速,不消耗 ...

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蛋白质非共价复合物的电喷雾质谱(ESI

相关专题 1.引言 细胞功能通常是由生物分子之间的弱相互作用即非共价作用而引起的,如酶与底物、蛋白质与配体、蛋白质与蛋白质及抗原抗体反应。对这些弱相互作用的影响会导致疾病的发生。如ras-GDP(蛋白质-配体),γ-干扰素(蛋白质-蛋白质同源二聚体),FKBP-rapamycin(蛋白质-抑制剂复合物)。生物学家们对这些作用正进行广泛的研究以 ...

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Double

相关专题 Protein表达是一个非常复杂的过程,因此很难预测表达的蛋白是否是可溶性的、包涵体形式还是部分降解的。为了预防各种可能的困难条件,在重组蛋白上导入两种Tag可以提供获得高纯度均质蛋白的灵活性。 蛋白含有两种不同亲和纯化Tag的重要原因: 纯化全长的蛋白 获得最高纯化的蛋白 适合变性或生理条件下纯化 优化的操作过程,可以直接从培养基 ...

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