蛋白质活性测定

蛋白质印迹是一种非常适用于蛋白质检测的技术，因为它允许用户量化蛋白质表达。本文主要介绍一些该技术结果异常的排除方法。因为研究人员试图获得一种非特异性但强烈的信号，蛋白质印迹可以被视为一种错综复杂的平衡。即使蛋白质印迹的程序很简单，也会出现许多问题，导致意想不到的结果。该问题可分为五类：（1）异常或意外的条带，（2）无条带，（3）微弱条带或弱信号，（4）印迹背景高，（5）斑点或不均匀斑点污点。不寻常或意外的条带可能是由于蛋 ...

柱式法 Minute TM 胞质胞核分离试剂盒操作方法：A． 悬浮细胞样品（包括植物，细菌，酵母和真菌制备的原生质体）1.500Xg，3 分钟低速离心收集细胞，用预冷的 PBS 清洗一次2. 将细胞转移到 1.5 ml 离心管中，3000 rpm 离心 1-5 分钟，弃去上清。3. 按表格 1 加入适量的胞浆提取缓冲液（请注意样品及裂解液的比例，以达到最佳效果）, 涡旋大力震荡 15 秒, 冰上孵育 5 分钟, 混匀. 接转胞质胞核分离步骤。表格 1，不同细胞体积应加入相应体积缓冲液细胞体积（ul） 胞浆提取缓冲液（ul） 胞核提取缓冲液（ ...

脂肪组织特别是白色脂肪组织（WAT）已经被证实除了具有能量储存功能外，还与内分泌和器官炎症有关。从脂肪组织中提取和分析蛋白质对于了解许多生理/病理状态越来越重要。但是由于白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）中高脂肪和低蛋白含量，所以在技术上极具挑战性。众所周知目前生物样品中水油乳化物最难分离，具有独特表面性质的带孔径的离心管柱和优化的无表面活性剂的缓冲液系统，可以快速有效的从脂肪组织匀浆中将水油乳化物 ...

膜蛋白具有许多重要的细胞功能，对生物体存在至关重要。他们具有超过60%的药物靶点，占细胞总蛋白的20%-30%。膜蛋白包括完整的膜蛋白，跨膜蛋白和外周膜蛋白。膜蛋白或者附着在脂质双分子层上或者通过疏水，离子或其他非共价与膜周边的完整蛋白结合。使用表面活性剂进行质膜蛋白分离提取效率不高，还有可能破坏蛋白质-蛋白质相互作用，改变膜蛋白的拓扑结构。在一些下游应用中，例如膜蛋白IP，Co-IP，酶检测，质谱分析实验，使用无表面 ...

膜蛋白具有许多重要的细胞功能，对生物体存在至关重要。他们具有超过 60% 的药物靶点，占细胞总蛋白的 20%-30%。膜蛋白包括完整的膜蛋白，跨膜蛋白和外周膜蛋白。膜蛋白或者附着在脂质双分子层上或者通过疏水，离子或其他非共价与膜周边的完整蛋白结合。使用表面活性剂进行质膜蛋白分离提取效率不高，还有可能破坏蛋白质-蛋白质相互作用，改变膜蛋白的拓扑结构。在一些下游应用中，例如膜蛋白 IP，Co-IP，酶检测，质谱分析实验，使用无表面活性剂的 ...

qqljwar 各位战友：小弟想通过蛋白水平去检测胃泌素的表达量，但不知道具体用什么方法，有没有哪位前辈做过这方面的检测，指导下小弟，感激涕零啊！forest22939 Western blot is direct method, second is choosing subtract.qqljwar forest22939:你好，胃泌素比较小，好像只要2kd左右，Western检测的效果不是很好，另外你说的subtract 是什么，忘赐教！ 谢谢。本文由丁香园论 ...

xxzjcg 大多数人认为原核细胞表达的蛋白没活性，但我最近看了篇文献原核细胞表达的蛋白有活性，并应用于炎症肠病的治疗，请教一下原核细胞表达的蛋白有活性吗lmnsmu 这个问题不能绝对的看待，需要一分为二。原核细胞表达的原核蛋白肯定有活性；对真核蛋白用原核体系进行表达，一些结构简单的、能够可溶表达的蛋白进行简单的尿素梯度等处理后就可以具备活性；而结构复杂、以包涵体形式表达的最初表达的蛋白没有活性，需要进行特殊的复性 ...

yan0495 R&D公司的recombinant human EGF Receptor来源于DNA编码的人类EGFR的胞外区，而酪氨酸激酶活性区在胞内，我现在需要做酪氨酸激酶抑制剂的筛选，不知道能不能用这个蛋白？筛选原理：以多聚酪氨酸多肽为底物，用EGFR催化酪氨酸的磷酸化，用酶标记的单克隆抗体检测酪氨酸磷酸化程度，以OPD做为辣根过氧化物酶底物显色，从而筛选EGFR抑制剂。附上EGFR说明书和图。请各位指点啊！yan04 ...

人体的各种生理反应都是由蛋白参与和调节的，而这些蛋白的表达和活性同时也受多水平，多方面的调节。这种调节既有转录水平的，也有翻译水平。既有转录后的修饰，也可以是蛋白翻译后的修饰调节。对这些蛋白的调节也有多种的形式，包括磷酸化——去磷酸化，乙酰化——去乙酰化，羧基化，甲基化，糖基化等等。这种多水平，多方面的调节构成了人体内庞大而复杂的调节体系，精确地调节了人体内的各种生理、生化反应。蛋白的乙酰化和去乙酰化是蛋白活性调节的 ...

各位同学，本人前些日子做了脂肪氧化酶活性测定的工作，遇到了一些问题，想在这里向大家请教，希望大家能不吝赐教，来帮助我解脱心中的迷惑。本人是做植物材料的，从叶片中提取粗蛋白，0.5g叶片使用液氮研磨，加入到4ml冰预冷提取缓冲液（0.05mol/L PH6.4 磷酸钠缓冲液，1mmol/L EDTA，1%PVP，1mmol/LDTT）中，12，000g，4℃离心10min，取上清进行脂肪氧化酶酶活性分析。通过检测234nm光吸收（Beck ...

iTRAQ技术iTRAQ技术是由美国应用生物系统公司(Applied Biosystems Incorporation，ABI)2004年开发的同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ)技术，是一种新的、功能强大的可同时对四种样品进行绝对和相对定量研究的方法，这种方法是建立在iTRAQ试剂的基础上。iTRAQ技术原理：iTRAQ试剂为可与 ...

相关专题 缓激肽是一种含有9种氨基酸的生理和药理活性肽，由蛋白质的激肽基团衍生而来。激肽是可以促使血管舒张、血管通透性增强、一氧化氮释放和花生四烯酸流动的效应因子。它是血压、肾功能和心脏功能的重要调节因子，还参与炎症反应。缓激肽可引起血管扩张，从而导致血压降低。 因此，对这种激素肽的变化进行高灵敏度、高选择性和高准确度地定量，并将其作为疾病进展或药物治疗的评估指标，将会极为有利。尽管以往都是通过配体结合试验(LBAs)对 ...

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相关专题 紫外可见分光光度计讲座 分光光度计是实验室检测核酸或者蛋白样品浓度最常用的工具之一。仪器使用频繁，但甚少见到有人维护。其实，保持分光光度计清洁、无污染是成功操作的关键。Jessica Geisler博士是eppendorf北美地区负责PCR、检测和细胞技术的产品经理。她为我们介绍了一些仪器维护的经验。 清洁仪器 我们应该用蘸有中性清洁剂的软布擦拭分光光度计的表面。刺激性的清洁剂可能会损坏仪器表面。你也可以清洁比色皿本身 ...

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相关专题 应用优势 ■ 改善蛋白质识别，增加蛋白质组覆盖范围 ■ 即使在极低浓度下也能实现可靠鉴定 ■ 更有效地进行LC/MS/MS分析从而加快决策过程 简介 随着自下而上(bottom-up)蛋白质组学分析的复杂性不断增加，对于质谱仪的能力提出了挑战，其需要生成更多的详细信息才能满足用户的需要。近年来，质谱仪的速度、灵敏度和质量数准确性都有了显著的提高，可获得更好的数据质量、改善的肽序列标注以及更准确的鉴定结果。 随着硬件性能的改善，我们开发出一系 ...

相关专题 应用优势： ■ 肽精确定量 ■ 更低的检测限和定量限 ■ 完全的产物离子覆盖范围，不会发生工作周期损失 ■ 简化方法开发 简介： 近来，基于靶向LC/MS的方法被应用于定量蛋白组学中，以利于实现高准确度的多重相对和绝对定量研究。在研究中，三重四极杆和高分辨率质谱仪均有使用。使用这两种仪器不是完整蛋白质直接定量，而是监测蛋白被酶解后 ...

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