蛋白组学

1 准备SD/-Leu或是YPD 培养基20ml，酵母过夜培养，30℃，230rpm。2 测OD600 约1.0。3 100ml过夜培养物，1000g，离心，5min，4℃。4 弃上清，重悬于80ul抽提buffer：0.1M Tris-Cl（PH7.5），0.2M NaCl，0.01Mβ-ME，20％甘油，5mM EDTA，1mM PMSF。(100×)：PMSF 0.1742g 溶于10ml ...

你试一试这两种方法:第一种：1）将细胞系放在冰上2）去除上清，用pH7。4的冷磷酸盐缓冲液洗涤单层细胞两次3）加入1ml2%TritonX溶液冰浴15min4)刮下单层细胞，4度下10 000g 5min离心5）溶液37度水浴 10min以分离水相和去污剂相，然后37度下2 000g离心5min6)收集水相留作分析7）用500ul冰冷的buffer C溶解去污剂相沉淀，冰浴2min后加温，在按步骤 ...

1蛋白质提取与制备蛋白质提取与制备蛋白质种类很多，性质上的差异很大，既或是同类蛋白质，因选用材料不同，使用方法差别也很大，且又处于不同的体系中，因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的，大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中，少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中。因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质和酶。蛋白质与酶在 ...

1蛋白质提取与制备蛋白质提取与制备蛋白质种类很多，性质上的差异很大，既或是同类蛋白质，因选用材料不同，使用方法差别也很大，且又处于不同的体系中，因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的，大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中，少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中。因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质和酶。蛋白质与酶在 ...

INTRODUCTIONThis protocol describes a method for removing antibodies that react with bacterially encoded proteins by passing a crude preparation of immunoglobulins through a column containing immobili ...

一、样品提取：三氯醋酸―丙酮沉淀法（1）在液氮中研磨叶片（2）加入样品 以下内容需要登录后才能完全查看，请您登录马上登陆| ...

目的：运用PFGE方法对20Kb至数Mb的DNA进行分子分型背景知识：这个试验是公认的操作繁琐，至少要2天， 以下内容需要登录后才能完全查看，请您登录 ...

1. 把聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质电泳转移到硝酸纤维膜上。1）转移缓冲液洗涤凝胶和硝酸纤维素膜，将硝酸纤维素膜铺在凝胶上，用5ml移液管在凝胶上来回滚动去除所有的气泡。2）在凝胶/滤膜外再包一张3mm滤纸（预先用转移缓冲液浸湿），将凝胶夹在中间，保持湿润和没有气泡。3）将此滤纸/凝胶/薄膜滤纸按照厂家建议方法放入电泳装置中，凝胶面向阴极。4）将上述装置放入缓冲液槽中，并灌满转移缓冲液以淹没凝胶。5） ...

1、PBS:取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.2~7.4之间，若偏离此范围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。2、TBS：2.1 Tris缓冲液配方：（0.5 M pH7.6）Tris（三羟甲基氨基甲烷）60.57g1N HCL约420ml双蒸水加至1000mlTris缓冲液配制方法：先以少量双蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入H ...

1、分离膜蛋白的方法（原则性）：1） 先分离膜，然后提取；如选用冷热交替法、反复冻融法、超声破碎法、玻璃匀浆法、自溶法和酶处理法使得细胞破碎，然后通过剃度离心得到含有膜蛋白的粗组分。（例如：michael11液氮研磨组织，加入匀浆缓冲液及蛋白酶抑制剂。差速离心。蔗糖密度梯度离心。收集37%与41%间的成分，即为质膜部分。裂解即可收集膜蛋白 ）2 ）用特殊的去污剂选择性的分离。 从膜上提取蛋白有许多 ...

Stacking Gel7%10%4x stacking gel buffer25 ml25 ml30% acrylamide stock23.3 ml33.3 ml20% SDS0.5 ml0.5 mlddH2O51.2 ml41.2 ml ...

Towbin Buffer (5 l)25 mM Tris-Base15.1g192 mM glycine72.1 g20% methanol1 lmake to 5 l with ddH2Odo not adjust the pHTowbin buffer is the same as SDS running buffer except it contains methanol and ...

rehydrate western in PBS-Tween for 5 minadd primary antibody in a minimal amount of PBS-Tween and incubate on a rocking platform for 1 hr min (alternatively overnight at 4C with the tray wrapped in Sa ...

Italics indicate optional steps especially useful for the analysis of untested proteins.GROWTH AND HARVESTING OF BACTERIAAdd 100 ul ampicillin to 100 ml LB. Inoculate and grow overnight.In the morning ...

A. Method for ~1g or more of tissue.1. Label all tubes. Prepare solutions and have ready at hand.2. Remove the tissue from the �80oC freezer and thaw on ice. If the tissue is fresh keep on ice (or alt ...

提起膜蛋白，浮现在广大从事蛋白研究的科研工作者脑海中的是两点：1.膜蛋白功能的重要性。2.膜蛋白研究的困难性。众所周知，膜蛋白在细胞间接触、表面识别、信号转导、酶活性和运输方面都扮演着重要的角色。由于它们功能多样，也就成为理想的药物靶点。然而，膜蛋白的生化和结构研究一直都很缓慢。Protein Database的统计数据表明，在成功解析出三维结构的蛋白中，膜蛋白只占1%，这与膜蛋白占总蛋白的1/3 ...

PurposeThe purification of ICAM-1 on R6.5 anti-ICAM-1 column.Materials Triethylamine NaCl Octyl Glucoside ( n-octyl-b-D-glucopyranoside Sigma Cat. No. O-8001) Tris-Base NaN3 Tris-HCl PMSF (PhenylMethy ...

Purpose MaterialsNUNC-Immuno Plate IIF. Horseradish Peroxidase-Streptavidin (Zymed; 43-4323) PBS or Balanced Salt Solution (BSS). Do not use RPMI or any medium that contains biotin. BSA (1% in PBS). A ...

IntroductionThis is an adaptation of the published procedure for RNAse treatment of Drosophila polytene chromosomes to remove proteins whose binding is RNA dependent such as the dosage compensation co ...

IntroductionHere we describe a strategy for isolation of multiprotein complexes from human HeLa S3 cells in a scale and purity optimized for characterization by mass spectrometry. For this purpose we ...