2D电泳技术

1、蛋白质样品的特征： 复杂，含盐或其他污染物 易被蛋白酶降解 动态范围宽（>X106） 溶解性不均一（疏水性/亲水性） 分子量、等电点的范围宽（10-500KDa，pH2-14） 2、样品分离的基本要求： 高灵敏度和分辨率 宽动态范围 小样品体积 高通量 合适的温度和pH 避免蛋白酶降解 适合与高灵敏度的质谱联用 尽量少的操作步骤减少污染和损失 3、样品缓冲液的组成： 3.1 尿素：一种中 ...

A． 实验过程 一、实验原理： 2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离，第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同，而将一向分离后的蛋白进一步分离。这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。 二、实验步骤： 1.样品的溶解 取纯化后的晶体蛋白3.0mg，加入300μl裂解液(1mg蛋白:100μl裂解液)振荡器上振荡10min左右，共处理一个小时。其中每隔10～ ...

（一）第一向等电聚焦 1.从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室温溶解。 2.在小管中加入0.01g DTT，Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混匀。 3.从小管中取出400ml水化上样缓冲液，加入100ml样品，充分混匀。 4.从冰箱中取-20℃冷冻保存的IPG预制胶条（17cm pH 4-7），室温中放置1 ...

电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。 电泳技术的基本原理和分类 在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。F＝QE质点的前移同样要受到阻力（ ...

二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术结合了等电聚焦技术（根据蛋白质等电点进行分离）以及SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（根据蛋白质的大小进行分离）。这两项技术结合形成的二维电泳是分离分析蛋白质最有效的一种电泳手段。 通常第一维电泳是等电聚焦，在细管中（φ1～3 mm）中加入含有两性电解质、8M的脲以及非离子型去污剂的聚丙烯酰胺凝胶进行等电聚焦，变性的蛋白质根据其等电点的不同进行分离。而后将凝胶从管中取 ...

电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。 电泳技术的基本原理和分类 在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。F＝QE质点的前移同样要受到阻力（ ...

This is a method for the separation and identification of proteins in a sample by displacement in 2 dimensions oriented at right angles to one another. This allows the sample to separate over a lar ...

摘要: 采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱技术对天麻染菌球茎皮层和不染菌的新生球茎皮层进行了比较蛋白质组分析与鉴定。双向电泳后在分子量12～97 kD、等电点3～10 范围内 每块胶分离到约900 个蛋白质点。对新生球茎中表达量明显增加的5 个蛋白质点用基质辅助激光解吸P电离飞行时间质谱(MALDI2TOF MS) 进行肽质量指纹谱的分析 并通过检索不同的数据库进行蛋白质鉴定与功能预测 初步认为第4 ...

摘要:目的　建立急性脊髓损伤双向凝胶电泳图谱初步观察急性脊髓损伤组织中蛋白质组的变化与差异表达为进一步探讨急性脊髓损伤分子机制奠定了基础。方法　采用双向凝胶电泳分离脊髓总蛋白银染显色Image Master图象分析系统分析从胶中选取分离蛋白质点基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI2TOF2MS) 分析获取肽质量指纹图谱(PMF) Mascot 软件搜索MSDP、SWISS2PROT数据库鉴 ...

双向凝胶电泳_飞行时间质谱法分析人肺鳞癌细胞NCI_H520蛋白质组成分.pdf ...

背景及目的 抑郁症发病机制不清。结构影像、遗传、神经生化的研究都从不同角度阐述了抑郁症的发病机制，种种证据也显示抑郁症的发病在脑代谢层面是有其器质性基础的，但至今还无明确、统一的结论。蛋白质组学技术为抑郁症发病机制的研究提供了新的手段。本研究通过建立抑郁症的动物模型，利用双向电泳和质谱鉴定技术，分析海马组织差异蛋白质表达，旨在探索抑郁症新的治疗靶点，为建立客观的诊断、治疗、停药指标提供 ...

This method was successful in our lab using prostate tissue and for our specific objectives.Investigators must be aware that they will need to tailor the following protocol for their own research obje ...

This method was successful in our lab using prostate tissue and for our specific objectives.Investigators must be aware that they will need to tailor the following protocol for their own research obje ...

双向电泳IEF （sigma）IEF（not IPG）/SDS-PAGE最简单的装备推荐如下，适合于没多少money做IPG又想做“热”的所谓蛋白质组的，嘻嘻！ IEF用Biorad的圆盘电泳槽（不行用国产的吧，不推荐），SDS-PAGE用六一厂的就可以了（ft，六一厂应该给我money吧，给你做广告了）（money不是很多的强烈推荐六一的，买进口电泳槽的钱留出来测搞出的 ...

Sample preparation and solubilization are crucial factors for the overall performance of the 2-D PAGE technique.Protein complexes and aggregates should be completely disrupted in order to avoid appear ...