Native-PAGE

1. 一般Native-PAGE方法非变性电泳非变性胶蛋白电泳求助：Native-PAGE方法Native-PAGE Protocol2. Native PAGE 分离碱性蛋白求助：碱性小肽非变性电泳非变性电泳的高手请进! 3. 回收目的蛋白如何从凝胶中提取蛋白，谢谢求助：关于从电泳凝胶中如何萃取蛋白质？水平SDS电泳求助有没有方便省钱的方法从PAGE胶回收蛋白想从sds胶里面回收蛋白，几个相关的问题SDS-PAGE电泳后可以回收再复性吗 ...

SDS-PAGE从胶中纯化蛋白质浸提液母液：0.5 mol/L Tris-CI pH 7.91.0 mmol/L EDTA1.5 mol/L NaCL1.0 % SDS上述各取1ml 混匀，加入6 ml 水，混匀，即为10ml 浸提液。回收蛋白方法：1. 使用厚胶，设两个样品孔，一个为蛋白marker，另一为样品。2. 电泳结束后，将Marker和少许样品带切下，进行染色和脱色。剩余样品胶置于4 ℃。3. 根据Marker和被染色的样品带，切下未被染色的胶中蛋白带。4. 称重，研碎，加入3～5倍体积的浸 ...

电泳试剂⑴样品缓冲液（４×）：1mol/L Tris-HCl, 20%甘油，0.001%溴酚蓝(w/v), pH 6.8。⑵30％丙烯酰胺单体贮存液：29.2g丙烯酰胺(acrylamide), 0.8g N,N’-甲叉双丙烯酰胺(N,N’-methylenebisacrylamide), 加超纯水充分搅拌至完全溶解定容至100ml, 漏斗过滤后置于棕色瓶内4℃避光保存。⑶分离胶缓冲液（4×）：1.5mol/L Tris-HCl, pH9.10, 4℃保存。⑷浓缩胶缓冲液（8×）：1mol/L Tr ...

在一个典型的native PAGE方法中，复合物被CN-PAGE或BN-PAGE分离。然后可以用其它分离方法如SDS-PAGE或等电聚焦做进一步分离。随后切割凝胶，蛋白复合物每一个部分都被分开。蛋白的每个条带可以消化后做肽链指纹图谱或重新测序。这样就可以提供一个蛋白复合物中单个蛋白的重要信息。

蛋白质凝胶电泳凝胶的制备【材料与试剂】（1）30%的丙烯酰胺：分别称取29g 丙烯酰胺，1g NN-亚甲双丙烯酰胺加温热的去离子水60ml，加热至37℃溶解，补加水至终体积为100ml过滤，即配成30%（w/v）丙烯酰胺贮存溶液。丙烯酰胺和双丙烯酰胺在贮存过程中缓慢转变为丙烯酸和双丙烯酸，这一脱氨基反应是光催化或碱催化，故溶液的pH值不超过7.0，应置于棕色瓶中4℃保存。（2）10%十二烷基硫酸 ...

有三种常用的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法：blue native（BN-PAGE），clear native（CN-PAGE），quantitative preparative native continuous（QPNC-PAGE）。在一个典型的native PAGE方法中，复合物被CN-PAGE或BN-PAGE分离。然后可以用其它分离方法如SDS-PAGE或等电聚焦做进一步分离。随后切割凝胶，蛋白复合物每一个部分都被分开。蛋白的每个条带可以消化后做肽链指纹图谱或重新测序。这样就可以提供一个蛋白复合物中单个蛋白的重要信息。

1. Introduction SDS-PAGE (Section 2.2) is probably the most commonly used gel electrophoretic system for analyzing proteins. However it should be stressed that this method separates denatured protein. ...

1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时预电泳是怎么回事的？预电泳时要加6×DNA上样缓冲液吗？电泳1－2小时再加结合反应产物吗？ 预电泳是除去凝胶中没有聚合的单体和双体和聚合引发剂，提高分辨率，不加任何物质，一般３０－６０分钟后加样电泳。 2. 银染的步骤是什么？银染的关键因素是什么？ 步骤是： （1） 固定：10%冰乙酸30min。 （2） 清洗：双蒸水冲洗凝胶2次，每次1min。 （3） ...

非变性凝胶电泳，也称为天然凝胶电泳，与非变性凝胶电泳最大的区别就在于蛋白在电泳过程中和电泳后都不会变性。最主要的有以下几点： 1. 凝胶的配置中非变性凝胶不能加入SDS，而变性凝胶的有SDS。 2. 电泳载样缓冲液中非变性凝胶的不仅没有SDS，也没有巯基乙醇。 3. 在非变性凝胶中蛋白质的分离取决于它所带的电荷以及分子大小，不像SDS-PAGE电泳中蛋白质分离只与其分子量有关。 4. 非变性凝胶电 ...

1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中，蛋白质的迁移率不仅和蛋白质的等电点有关，还和蛋白质的分子量以及分子形状有关，其中蛋白质的等电点是最重要的影响因子，要根据蛋白质的等电点来选择对应的电泳缓冲系统； 2. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中，要注意电压过高引起发热而导致蛋白质变性，所以最好在电泳槽外面放置冰块以降低温度； 3. 蛋白质的分子量较大，则电泳时间可以适当延长，以使目的蛋白质有足够的迁移 ...

非变性聚丙烯酰胺凝胶和变性sds-page电泳在操作上基本上是相同的，只是非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制和电泳缓冲液中不能含有变性剂如SDS等。一般蛋白进行非变性凝胶电泳要先分清是碱性还是酸性蛋白。分离碱性蛋白时候，要利用低pH凝胶系统，分离酸性蛋白时候，要利用高pH凝胶系统。酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统，蛋白会带负电荷，蛋白会相阳极移动；而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境 ...