SDS-PAGE

1.原理 等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移动；当蛋白质迁移至其等电点位置时，其静电荷数为零，在电场中不再移动，据此将蛋白质分离。 ...

一、目的： 1．学习SDS—PAGE测定蛋白质分子量的基本原理。 2．掌握垂直板型电泳的基本操作技术。 二、原理： 由实验十五中已知，蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。 1967年，Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠（sodium dodecyl sulfate，简称SDS）， ...

实验试剂： 试剂贮备液： 1、 1mol/L HCl48ml，Tris36.6g，TEMED0.23ml，加蒸馏水配成100ml，pH8.9。 2、 1mol/L HCl48ml，Tris5.98g，TEMED0.46ml，加蒸馏水配成100ml，pH6.7。 3、 Acr28g，Bis0.735g，加蒸馏水配成100ml。 4、 Acr10g，Bis2.5g，加蒸馏水配成100ml。 5、 核黄 ...

Definition Amino acids nucleotides polypeptides and other compounds in a colloidal state can be separated by the application of external voltages which cause charged colloid particles to move toward a ...

Q：SDS－PAGE电泳的基本原理？ A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原 ...

1. Rinse gel on glass plate briefly with distilled water. 2. Wash gel in fresh 50% ETOH-12% HAc with shaking 3 times 1 hour each. (Fix IEF gel ON in 10% TCA). 3. Wash gel four times with 10% ETOH-5% H ...

1.Fix gel in 50% methanol for greater than 1 hour rinse gel in dH2O 3 times 5 minutes each place back in 50% methanol for 1 hour. 2.Stain gel in 100 mls of stain solution for 30 minutes 3.Rinse gel i ...

SDS-PAGE: gel electrophoresis of proteinsTECHNIQUE is to set up gel plates before you mix the gel mixes.Use the THIN spacers and choose a comb--number of wells varies.Make both resolving gel and stack ...

1.Rinse gel on glass plate briefly with distilled water. 2.Wash gel in fresh 50% ETOH-12% HAcwith shaking3 times1 hour each.(Fix IEF gel ON in 10% TCA). 3.Wash gel four times with 10% ETOH-5% HAc for ...

NuPAGE Gels A gel electrophoresis system used for SDS-PAGE protein analysis.The gels are made up of Bis-Tris-HCl (pH 6.4)polyacrylamide and are intended for denaturing conditions only. NuPAGE Electrop ...

我们做蛋白质电泳的人都知道，银染色很灵敏，有很强的说服力，但通常胶背景较深，不易扫描。在这里介绍一下低背景的蛋白质银染方法。 Step Reagent Time/min Fix 50%EtOH 12%HAC 0.1%HCHO 38%H2O 60 Rinse 50% EtOH 5 min 3 times Sensitive 0.02% Na2S2O3 1 min Rinse Double disti ...

Invitrogen提供了大量的涵盖面广的蛋白分离预制胶，包括不同的成分，百分比浓度和格式。使用合适的胶百分比浓度，缓冲系统，上样孔格式以及胶的厚度，对于获得最好的结果非常重要。以下提供了帮助你选择适合你应用的正确凝胶的信息。 E-PAGE™ 96 High-Throughput System是整合的、无缓冲液系统，设计用来检测和分析大量的蛋白样品，时间仅仅需要14分钟。 NuPA ...

凝胶干燥时遇到的主要问题是凝胶的变形和破裂。将凝胶放在Whatman 3MM滤纸上可防止干燥凝胶变形，但凝胶是否破裂取决于凝胶的厚度和干燥器的质量，因此，应尽量使用薄胶并使凝胶干燥器处于良好状态，使其真空压力波动极少。 (1)试剂与配制：固定液：冰醋酸:甲醇:水（10:20:70） (2)电泳后的凝胶用5～10倍体积固定液在室温下固定，酸性固定液扩散后可使凝胶中的溴酚蓝变黄。蓝色全部消 ...

电泳是在溶剂中通过电场转移带电分子，任何带电的离子或者基团放置在电场中都将会迁移。除非在它们的等电点，大多数生物聚合物在任何pH值时都带有净电荷，它们将会以与电荷密度成比例的方式移动。分子在电场中的迁移取决于电场的强度、净电荷、分子的大小和形状、离子强度、粘度和分子移动介质的温度。作为一种分析工具，电泳简单、快速，并且具有高灵敏度。用来研究单一、带电荷的分子的特性，也用来作为一种分离技术。 支持 ...

Choose a protein standard MultiMark® ...

一、目的 蛋白质分子有单链、双链和寡聚蛋白等组成形式，组成蛋白质分子的单条肽链又称亚基。通过对天然蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳和变性蛋白的SDS 一聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱的比较，可以研究种子蛋白质分子组成和结构。另外，SDS 一聚丙烯酰胺凝胶电泳是测定亚基分子质量的好方法。通过本实验，学习SDS 一聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理、技术和实际应用。 二、原理 用十二烷基硫酸钠（SDS）和还原剂（琉基乙醇或二硫 ...

一、目的 1、了解聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 2、了解聚丙烯酰胺凝胶的制作过程 3、了解过氧化物酶同工酶电泳过程 二、实验原理： 1、电泳原理及影响电泳的主要因素 带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动，这种现象称为电泳。用电泳技术分离、分析蛋白质、酶、核酸等生物大分子，有较高的分辨率，目前已成为生物科学研究中必不可少的手段之一。带电离子在电场中的泳动速度（1）和迁移率（泳动度）（2） ...

一、实验目的 了解等电聚焦的原理。通过蛋白质等电点的测定，掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直管式等电聚焦电泳技术。 二、实验原理 等电聚焦（Isoelectric focusing，简称IEF）是六十年代中期出现的新技术。近年来等电聚焦技术有了新的进展，已迅速发展成为一门成熟的近代生化实验技术。目前等电聚焦技术已可以分辨等电点（pI）只差0.001pH单位的生物分子。由于其分辨力高，重复性好，样品容量大，操作 ...

Sample Buffers: Dehydrating Solution 30% Methanol-2.5% glycerol Linear Acrylamide make up a 3% solution in distilled water (stir overnight). Use 1.2 ml/12 mls gradient ...

一、目的要求1.学习电泳原理和技术2.学习和掌握SDS－聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白质技术二、原理聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide，简称Acr)和交联剂NN-甲叉双丙烯酰胺(N，N—methylene-bisacylamide，简称Bis)在加速剂N，N，N，N—四甲基乙二胺(N，N，N，N—tetramethy ...