基础知识

这个protocol应该可以满足大部分人的需求。我孤陋寡闻，因需要检测可以溶于两种不同去污剂的蛋白，看到一篇文献里蛋白提取方法，完全被折服了。太强悍了，蛋白还可以这样提。我以前一直以为裂解液裂解后，沉淀里面没有蛋白了，现在才发现沉淀里还含有大量不溶于裂解液里去污剂的蛋白。故将这个protocol发出来供我和一样的新手学习。我以前是裂解细胞，离心，测浓度，然后直接往整管里加loading buffer，再离心取上清，看 ...

求助：DTT的化学结构式。求助：急寻cayman公司国内代理Purification of a therapeutic recombinant protein using expanded bed adsorption chromatography:protoOptimal solubilization screening strategies for GST-fusion membrane proteins:protocol请教原核表达的问题，为啥没见表达针对蛋白测序 ...

首先欢迎您到蛋白质技术版块来，头次为客，下次为主，希望您在本版有收获，也希望您伸出热情的双手帮助处在实验困难中的战友。如果您已阅读了本版的规则，您已经不全是一名新手了。本话题祝贺您进入下一个阶段，如何使用丁香园资源。这只是一个简装本，更详细更具体的指南，您可在丁香园 --- FTP 资源讨论版找到。链接是：http://www.dxy.cn/bbs/post/page?bid=86&sty=1&age=0进入话题前重申：丁香园资源都由热心 ...

做实验熬夜，暂时只能整理这么些了。：）浅谈分子伴侣与蛋白质折叠http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=451813&sty=1&tpg=3&age=0蛋白一级结构预测三级结构的软件或网站http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=701140&sty=1&tpg=5&age=0《Protein Structure,Stability, and Folding》http:/ ...

1.GST-Pull-Down原理http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3828600_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1168462_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1197579_0.html2.GST-Pull-Down试剂盒购买http://www.dxy. ...

第二十一章 原核表达及其表达载体——【蛋白质技术版】第二十三章 蛋白电泳——【蛋白质技术版】已有BeetleHead报名编写初稿，请及时更新！第二十四章 Western——【蛋白质技术版】已有drake015报名编写初稿，请及时更新！第二十五章 表达蛋白的分离与纯化——【蛋白质技术版】已有princessann 报名编写初稿，请及时奉上！第二十六章 表达蛋白的生物学活性的检测——【蛋白质技术版】注：对蛋白质方面感兴趣的战友请到此跟贴！请申请的战友及 ...

我提出这个话题是因为见到了很多人问到关于磷酸化的问题，我在此抛砖引玉，希望大家在这方面有心得的多谈一谈。看了觉得好可千万不要让它沉了。 :-P:-D:D:D①如果目标蛋白是膜蛋白或是胞浆蛋白，操作需要注意什么？答：如果是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，这时最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性。②做细胞信号传导，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？答：对二抗无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用 ...

Difference Gel Electrophoresis (DIGE)即差异凝胶电泳是目前2D领域相当热门的一项技术，可以说它的出现消除了传统双向的一些弊端，使得好多实验室对双向重拾信心:P先简要介绍一下DIGE技术的历史和路线。DIGE技术最早在1997年由Jon Minden实验室提出，后来Amresham成为此项技术的主要推动者，其技术路线是将样品在电泳前标记Cy2、Cy3 和Cy5 这3 种荧光染料（其中Cy2 作为用Cy3、 ...

花了点时间整理了园内有关考染的帖子，拿出来共享，希望对刚动手做WB的战友有所帮助。12.5％考马斯亮蓝染色液的配制（含30％甲醇，10％乙酸）考马斯亮蓝R250 0.125g甲醇 30ml冰乙酸 10ml加ddH2O至 100ml染胶1h~2h脱色液配制（含30％甲醇，10％乙酸）甲醇 30ml冰乙酸 10ml加dd H2O至 100ml注：1. 染色液可回收利用；室温保存即可；甲醇可以用乙醇代替。2.其它脱色液：（1）用水脱色，但效果非常不好，建议不要用。（2 ...

关于这个主题想了很久，联想到篮球公园，因拟此题。想了很多方面，总觉得还是大点好，这样可以容纳更多观众与选手，呐喊、助威，才能畅所欲言，充分享受自由的空间，否则就像我们的宿舍一样狭小，大家都不愿意呆，就是回去了，也就是睡觉（不说话，哈哈）SELDI的出现，也就一、两年的事情，现在还没有人去关心他的原创，就像MALDI在它没被大家接受并被证明是蛋白质分析领域强有力的工具之前，没有人关心田中耕一一样。在基因组学取得巨大成功之 ...

在园子里看到有好多战友询问有关蛋白保存的问题，自己对于这个问题也一直模模糊糊，今天特意搜集了一下园子里有关蛋白质保存的一些有价值的帖子，希望能给各位战友提供一些方便http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1790263_1.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4680926_1.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs ...

General Western Blot ProtocolMany variations exist among protocols for running Western blots. These variations address all aspects of the procedure from the choice of gel buffers and membranes to transfer conditions, blocking and processing steps. The following procedure was wri ...

疏 水 层 析1、疏水层析是根据不同蛋白质的疏水力强弱不同来分离的。在高盐离子强度的情况下，蛋白质的疏水基团充分暴露与填料的疏水介质相互作用，从而结合在柱子上。不同蛋白质的疏水性强弱不同从而导致其与柱子填料的结合力也不同。随后，逐渐降低洗脱缓冲液的盐离子强度就可以将不同的蛋白分布洗脱下来，形成一个个的蛋白质洗脱峰。2、柱子的装填：如果是预装柱，就不存在装柱的问题了。不是，则从头开始：首先，把柱子洗干净，一定要洗干净，不然会出现 ...

PubMed医学文献检索服务系统，其检索内容包含MedLine，PreMedline（不含Mesh检索主题词）医学文献数据库及其他电子出版文献。1.PubMed基本检索方式(Basic PubMed Search)进入PubMed基本检索方式主页，在检索框中可以输入任意词，包括文献作者，出版杂志等：键入一个或多个检索词(可以为任意词)，如protein disulfide isomerase ,也可以输入缩略名如pdi等；输入多个词 ...

为了方便战友，方便版面管理，经过蛋白技术讨论版几位主任协商一致决定于近期对蛋白技术讨论版版面进行整理，规范发贴，请大家在发贴求助或分享资料时注意以下几个方面：1 请您在发贴前务必对发贴内容在版内或丁香园进行全面搜索，检查是否已经有过类似内容的讨论，以免造成重复。对重复发帖，重复求助锁贴扣分处理，有特殊情况请pm本版主任 2 发贴时请规范发贴格式，对于标题，请在其前方选择相应的分类标记，如：【原创】、【转帖】、【求助】、【求购】、【建议】、 ...

一、质粒绝大多数的生物都是以DNA的形式来储藏其遗传信息。遗传物质要能生生不息地传给后代的首要条件就是它至少要具有一个复制原(ori, origin of replication，或译为复制起点)，使整个基因体得以复制。含有复制原的遗传物质称为replicon，我们姑且把它译为为复制体吧！。原核性复制体分为原核染色体、质粒(plasmids)和噬菌体基因体(phage genome)等三类。其中质粒的基因体和原核染色体类似，是由双 ...

转自http://www.51protocol.com/pro/WesternBlotting/20071031/38744.html1. 在western实验中，通常有人采用TBS，有人采用PBS，能否有人解释一下二者在使用中的区别？　　选择合适的缓冲液对于维持一定PH值下蛋白质的稳定及保证实验的重复性是很重要的。PBS的缓冲能力强于TBS（因为混合缓冲液在一定的离子强度下常常具有更宽的缓冲范围），TBS在PH7.0以下缓冲 ...

以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上， ...

最近做了taq酶的表达和纯化，将优化的实验流程和一点心得贴上来，希望对大家有帮助，更希望得到批评和指正TaqDNA聚合酶表达载体的构建与提取纯化1 .背景重组TaqDNA聚合酶基因及表达载体插入重组Taq DNA聚合酶基因的pET-28a表达质粒，该质粒是由美国Novagen公司推出的能在大肠杆菌中高效表达的一种质粒载体。该质粒在克隆位点前有1个T7启动子，在T7启动子前有1个6×His-Tag coding序列，是T ...

迎来金秋十月，蛋白版作为实验技术讨论区一个重要的板块，长久以来得到众多热心的战友厚爱和支持。为了答谢战友们的关心和维护，现举办九万帖有奖抓图活动，希望广大战友在这个充满激情的十月变得更加富有活力。在这里感谢大家长久以来的热心和关爱，你们才是蛋白版的支柱和主人加分办法：奖励第90000帖发帖战友和首先抓图并贴图者（以贴图时间最先者为准）：1 、抓到第90000贴抓图的可加分，时间以发贴时间/修改时间为判断标准。发贴时 ...