PCR扩增

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1. 当PCR结果不满意时考虑以下几个方面 (1)将PCR反应的试管与反应板紧贴 (2)使用50ul或更少反应体系时勿使用AmpliWax两个反应混合液=的操作方式在大多数情况下很有效 (3)当酶反应混合物以70度"热启动"开始循环时切记在加入酶后稍微振荡一下因为在0.2ml的PCR管不能均匀传热. (4)不要随意减少dNTP的用量必需与其他成分保持平衡. &nb ...

我做不出来克隆的时间长达半年，期间克隆实验方面许多问题都遇到过，现在总结主要的一些问题和大家交流，希望大家以后不要犯我一样的错，少走弯路。 1、感受态细菌本身有质粒污染，这个问题困扰了我三个月，一直到最近才找到原因，我这里犯了最大的错是没有做过感受态检测。也许大家奇怪为什么在三个月内的时间里没有怀疑到感受态，不用奇怪，因为感受态“表现的太正常了”，每次涂板都 ...

一、亚硫酸氢钠修饰过程中可能出现的问题及应对措施 亚硫酸氢钠修饰DNA的目的是将DNA序列中未甲基化的胞嘧啶完全转化为尿嘧啶，而甲基化的5-甲基胞嘧啶保持不变。影响此过程的主要因素有修饰试剂的浓度、反应温度、反应环境的pH值及反应时间。其中任何一个环节出现问题都将导致MSP扩增失败，体会如下： (1)亚硫酸氢钠的浓度最好控制在3.0～3.9 mol/L为好，其pH值必须用NaOH精确调整至5.0 ...