RNA原位杂交

（一）总RNA提取-Trizol法 Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫克至几克。用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。RNA可直接用于Northern斑点分析，斑点杂交， Poly(A)+分离，体外翻译，RNase封阻分析和分子克隆。1、将组织在液N中磨成粉末后，再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨，注意样品总体积不能超过所 ...

2013-08-19

RNA提取时的一些常见问题分析

一、用Trizol 抽提的RNA，用琼脂糖凝胶电泳，出现许多条带(至少四条以上)，是哪些原因导致的？参考见解：1、是从组织里抽的还是细胞抽的？组织的RNA电泳不理想，但目的条带仍能跑出来。细胞的电泳相当漂亮，但有时逆转录效果反而不好。组织经常出现这种情况，组织抽提的RNA不纯，而且多多少少有降解。不过下一步可以接着做逆转录，可能对后面的实验影响不会很大。2、是mRNA的话，这样的效果挺不错的。如果 ...

2013-08-19

非哺乳动物细胞体系的RNAi实验和选择

比如果蝇，线虫，拟南芥等低等生物和植物，由于不涉及抗病毒免疫应答反应，通过体外转录即可制备目标基因的dsRNA(通常200bp或以上)，直接用长双链RNA进行RNAi实验，不需要另外设计siRNA，因而比较简单。长双链RNA的制备很容易，省掉了设计合成单个siRNA的麻烦，并且长双链RNA在生物体内会被Dicer酶降解为多个siRNAs混合物，因而往往比单个siRNA更有效。长链dsRNA的递送方 ...

2013-08-19

血与泪的RNA抽提经验

对大部分实验人员来说，RNA 抽提比基因组 DNA 抽提要困难得多。事实上，现有的 RNA 抽提方法/试剂，如果用于从培养细胞中抽提 RNA，比抽提基因组 DNA 更方便，成功率也更高。那为什么同样的方法用于组织 RNA 的抽提，总会碰到问题呢？组织 RNA 抽提失败的两大现象是： RNA 降解和组织内杂质的残留。关于降解问题，首先看一下为什么从培养细胞中抽提 RNA 不容易降解。现有的 RN ...

2013-08-19

改善RNA提取的4点建议

在分离RNA时，良好的实验室技术很关键。与DNA相比，RNA更加娇贵，也更不稳定。RNA含有高反应性的羟基（C-OH）基团，确保链不断合成、分解和再次利用。分离出的RNA迅速降解，并很容易受到核糖核酸酶（RNase）的污染。RNase似乎随处可见。加利福尼亚州科学院（California Academy of Sciences）的Jack Dumbacher博士目前正开展转录组和小RNA的分离，以 ...

2013-08-19

病毒RNA提取实验方法[protocol]

2013-07-08

微量RNA的抽提RNeasy MinElute Spin Column（QIAGEN）

2013-07-08

RNA提取的操作步骤

2013-07-08

RNA的制备

2013-07-08

RNA Isolation Protocol from LCM Samples

2013-07-08

RNA 抽提中自备有机溶液的配制及保存问题 (ZHUAN )