RNA原位杂交

一般注意事项一些RNA提取方法，在进行具体实验时，应根据研究对象的性质，提取核酸的用途而对上述方法在操作步骤和试剂使用量上作一定的修改。1、 在核酸提取时，为了增加细胞的裂解度，增加核蛋白复合体破碎度，以释放更多的游离核酸，在操作中常要用到溶菌酶和蛋白酶K，在确保没有核酸水解酶存在的前提下，酶反应时间越长越好。2、有时在使用蛋白酶时，为了抑制核酸水解酶的降解作用，可在蛋白酶缓冲液中用终浓度5mM的 ...

1）检测RNA 溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，我们只看 OD260/OD280（Ratio，R）。1.8~2.0时，我们认为RNA 中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是2）RNA 的电泳图谱一般的，RNA 的电泳都是用变 ...

TRIzol RNA 提取试剂盒是由 GIBCO BRL 公司推出专供提取 RNA 的产品，其操作方便、快捷。（一）试剂准备 1 ． TRIzol 试剂。 2 ．氯仿 3 ．异丙醇 4 ． 75% 乙醇（ DEPC H2O 配制） 5 ． DEPC H2O（二）操作步骤 1 ． 样品处理： （１）培养细胞：收获细胞 1-5×10 7 ，移入 1.5ml 离心管中，加入 1ml Trizol ，混匀 ...

目的研究基因的表达和调控时，需要从组织或细胞中分离纯化RNA。RNA质量的高低常常影响RT-PCR、cDNA库构建和Northern Blot等分子生物学实验的成败。主要试剂Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出 的核酸酶。1. Trizol试剂含有苯酚，具有毒性和刺激性，注意操作。2. RNase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉，注 ...

1.DMSO：DMSO是二甲基亚砜，用途广泛。用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其他气体的溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂。是一种即溶于水又溶于有机溶剂的极为重要的非质子极性溶剂。对皮肤有极强的渗透性，有助于药物向人体渗透。也可作为农药的添加剂。也是一种十分重要的化学试剂。DMSO也是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。但是研 ...

实验一Total RNA的提取1.试剂配制准备工作:1研钵5ml/10ml/ 25ml移液管100ml/250ml量筒250ml/100ml容量瓶药匙 试剂瓶等玻璃制品均用锡纸包裹口部置于烤箱内180℃烤6小时.250ml/1.5ml离心管枪头等塑料制品用0.1‰DEPC水浸泡过夜后121℃ 20mins 高压灭菌.电泳槽及电泳托梳子用3%双氧水处理.4常用试剂及其配方:▲DEPC水:在1000m ...

问：我在配75%DEPC处理乙醇的时候把无水乙醇和DEPC处理的水按3:1混合后高压消毒.而不是事先将DEPC水消毒再加无水乙醇.如果液体没有挥发的话这样配的能用于抽提RNA吗?还有DEPC要经过好久高压才能无毒.在线等.请赐教网友A：我感觉没必要这样做，酒精本来就有消毒的功能，只要DEPC无菌就行了，我没这样做过，我想还是按常规的方法好。网友B：我感觉没必要这样做，酒精本来就有消毒的功能，只要D ...

防止RNA酶污染的措施：1、 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。2、 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用）。3、 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然后用0.1% DEPC水冲洗，晾干。4、 配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃ ...

编者按：当我们屏着呼吸使用致癌的DEPC时，是否想过用一种既安全又省钱方法替代DEPC？看过本文，你一定会感慨作者的探索精神。其实，在生物吧，这样的探索还有很多。如果你嫌找得麻烦，那就先看看“牛人强文”吧！蛋白酶 K 的妙用，我曾经在别的论坛发表。坦率地说，蛋白酶 K 的这个用途，是我的得意之作之最。不是因为该发现有什么创新，而是因为它的实用性。当别人还在讨论 DEPC 有什么毒性，讨论那一家公司 ...

问：哪位大侠知道胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K的识别和切割氨基酸序列是什么？在哪里能查到蛋白酶的识别和切割氨基酸序列？谢谢！答：胰蛋白酶水解精氨酸或赖氨酸的羧基和别的氨基酸形成的肽键，而胃蛋白酶水解肽键两端必须为疏水氨基酸如Phe，Leu，Trp，Tyr但是如果是Pro不水解。蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。 (责任编辑：大 ...

植物RNA提取方法1. 取适量丹参材料于液氮中充分研磨，然后迅速转入1.5ml离心管中，立即加入异硫氰酸胍提取缓冲液600μl 和60μl 2M NaAc混匀。2. 向管中加入600μl酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1），涡旋混匀10s，冰上静置5min，4℃，12000g离心15min。3. 取上清于另一离心管中，加入等体积600&mu ...

什么是miRNA MicroRNAs （miRNAs）是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（双链）但是和siRNA密切相关。据推测，这些非编码小分子RNA（miRNAs）参与调控基因表达，但其机制区别于siRNA介导的mRNA降解。第一个被确认的miRNA是在线虫中首次发现的lin ...

RNA提取原理： 通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。但是由于RNA酶无处不在，随时可能将RNA降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即：样品细胞或组织的有效破碎；有效地使核蛋白复合体变性；对内源RNA酶的有效抑制；有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；对于多糖含量高的样品还牵 ...

植物和动物组织有很大的不同主要是其多糖及酚类化合物含量很多因与有必要注意如下几个方面.酚类化合物的干扰及对策：许多植物组织特别是植物的果实（如苹果、樱桃、李子、葡萄等）和树木类植物中富含酚类化合物。酚类物质的含量会随着植物的生长而增加。因而从幼嫩的植物材料中更容易提取RNA。此外，针叶类植物的针叶中多酚的含量比在落叶植物的叶子中要高得多。在植物材料匀浆时，酚类物质会释放出来，氧化后使匀浆液变为褐色 ...

1、纤维组织：心脏/骨骼肌等纤维组织提取RNA的关键在于彻底破碎组织。这些组织细胞密度低，单位重量的组织RNA的含量就少，建议用尽可能多的起始量。使用TRNzol法可以提取纤维组织终RNA，由于纤维组织终RNA含量较少，可按照增加的起始量成比例增加TRNzol的用量，并在液氮中将组织彻底磨碎，同时适当减少溶解RNA的溶液体积。2、蛋白/脂肪含量高的组织：动物的脑和某些特殊的植物组织中，脂肪或者蛋白 ...

前不久一个网友问到我这个问题，自己了解的也少，因此这几天找了找，现在把自己找到的一些东西贴下来供大家参考。以下是师兄前辈们总结的几种EB替代品：sybr-green---- 不稳定，易降解goldview ----宣称无毒不灵敏回收连接不好荧光易猝灭gelred ---- 低毒效果很强!但价格昂贵~~genefinder ---- 效果一般，以前怀疑它是sybr green，不过有人辟谣了，所以毒 ...

问：trizol法提取血中的RNA，怎样做量会更多？提完RNA加DEPC水后放-80度也会容易讲解吗？答：1 血要新鲜。如果是冻存的，在解冻时要完全，之后再加Trizol。2 可以稍多加一些Trizol，少加些血。混匀之后放置10分钟左右，直接加三氯甲烷，混匀再去离心。可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷。3 每个步骤操作要快，用的时间药短些，防止降解4 异丙醇沉淀的时候，放-20°C的冰箱半个小 ...

1.何首乌 富含多糖多酚等次生代谢物①200mg新鲜叶组织置于预冷研钵中，+聚乙烯吡咯烷酮粉(PVP)，液氮中研磨成粉②移入EP管中，+提取液（1ml Trizol +1%β-巯基乙醇+1% PVP），充分混匀，置于冰上③每管+150μL无水乙醇+100μL 5mol/L的KAc（pH 4.8），混匀后缓缓+200μL氯仿/异戊醇（24:1），冰上静置10mi ...

1.取新鲜植物叶片0.1g(研磨样品前可用水或酒精清洗样品)于2mL离心管中，在液氮或-80℃下贮存。2.研磨： 在样品研磨前，提取液于80℃浴预热，加入前，提取混合液上下颠倒混匀。3.提取： （1） 加入500µL80 提取液，30s涡流混匀； （2） 加入250µL氯仿︰异戊醇（24︰1），30s涡流混匀； （3） 置于冰上。4.沉淀： （1） 离心：12000rpm，4℃，5min。 （2） ...

土壤（污泥）RNA提取的难题和解决方法从土壤（污泥）中提取微生物的RNA是一件很困难的事情，因为土壤中的微生物不可能像培养的微生物那么丰富，二者土壤中的腐殖酸的残留会影响下游的实验，三者是提取RNA的共同难题，就是非常容易降解！目前国际上一般的试剂盒通常采用玻璃珠（钢珠）破碎的方法，然后用玻璃奶和吸附柱反复漂洗去除杂质和腐殖酸，操作过程及其复杂，一般需要2.5小时以上的操作时间，首次使用可能要超过 ...