RNA原位杂交

转录后基因沉默，也称为RNA干扰，是指双链RNA分子阻断或者降低同源基因的表达的现象。这种现象可能是作为一种抑制病毒感染和转座子跳跃的细胞防御机制(Ketting et. al. 1999; Tabara et. al. 1999; Jensenet. al. 1999; Ratcliff et. al. 1999)。在体内，双链RNA被内源的核糖核酸酶降解为21-23个碱基大小的小分子干扰RN ...

转录后基因沉默，也称为RNA干扰，是指双链RNA分子阻断或者降低同源基因的表达的现象。这种现象可能是作为一种抑制病毒感染和转座子跳跃的细胞防御机制(Ketting et. al. 1999; Tabara et. al. 1999; Jensenet. al. 1999; Ratcliff et. al. 1999)。在体内，双链RNA被内源的核糖核酸酶降解为21-23个碱基大小的小分子干扰RN ...

（一）仪器恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶，等。 （二）材料总RNA样品或mRNA样品，探针模板DNA(25 ng)，尼龙膜（三）试剂NorthernMax Kit（Cat. # 1940，Ambion Inc.），琼脂糖，DEPC X光底片，底片暗盒，R ...

（一）仪器恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶，等。 （二）材料总RNA样品或mRNA样品，探针模板DNA(25 ng)，尼龙膜（三）试剂NorthernMax Kit（Cat. # 1940，Ambion Inc.），琼脂糖，DEPC X光底片，底片暗盒，R ...

第一节 概 述 　　从真核生物的组织或细胞中提取mRNA通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链将双链cDNA和载体连接然后转化扩增 即可获得cDNA文库构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工等一系列问题。总之cDNA的合成和克隆已成为当今真核分子生物学的基本手段。自70年代中叶首例cDNA克隆问世 ...

请参见下载，利用pdf浏览期阅读： 点击浏览该文件　　　SiRNA产品介绍:siRNA库：超过10000种基因的SiRNA库，拿来就用！siRNA技术相关试剂siRNA | 反义寡核苷酸 | RNAi Oligo合成 | RNAi定量 | RNAi文库 | miRNA分离 | miRNA分析 | siRNA酶 | siRNA标记 | siRNA纯化 | siRNA合成 | siRNA载体 | s ...

0. (Optional)Before using Oligotex-dT30 I recommend to wash Oligotex-dT30 to remove fine particle of latex. To wash the latex transfer appropriate amount of Oligotex-dT30 (300 ul of the suspension of ...

MicroRNA and siRNA Cloning Protocol Detailed procedures on oligo design synthesis purification and cloning 点击浏览该文件SiRNA相关产品介绍:siRNA库：超过10000种基因的SiRNA库，拿来就用！siRNA技术相关试剂siRNA | 反义寡核苷酸 | RNAi Oligo合成 | R ...

一、材料 　　水稻叶片或小鼠肝组织。 　　二、设备 　　研钵，冷冻台式高速离心机，低温冰箱，冷冻真空干燥器，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。　　三、试剂 　　1、无RNA酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃ 2小时）装蒸馏水，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。 　　2、75%乙醇：用DEPC处理水配制75%乙醇，（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放 ...

一、材料 　　水稻叶片或小鼠肝组织。 　　二、设备 　　研钵，冷冻台式高速离心机，低温冰箱，冷冻真空干燥器，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。　　三、试剂 　　1、无RNA酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃ 2小时）装蒸馏水，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。 　　2、75%乙醇：用DEPC处理水配制75%乙醇，（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放 ...

中文摘要：mRNA展示技术是一种新兴的体外筛选多肽和蛋白质的有力工具. 在筛选过程中，mRNA与其编码的多肽或蛋白质共价结合，形成mRNA-蛋白质融合体，能在大容量的多肽文库 (1013～1015) 中筛选具有特定生物学功能的多肽和蛋白质. 目前，mRNA展示技术主要应用于各种靶分子的多肽和蛋白质适体的发现以及蛋白质相互作用机制的阐明和分析. 由于其自身的巨大发展潜力，mRNA展示技术 ...

5 RNAi技术的应用5.1 功能基因组和遗传学应用随着各种模式生物和人类基因组测序的完成，基因功能的研究远远落后于大量序列所提供的信息，研究和发现基因功能成为越来越紧迫的任务。长期以来，破坏基因结构或抑制基因表达是研究基因功能的重要方法，如常用的基因敲除技术( gene knock out) 。基因敲除技术要求对所研究的基因序列要有详细的认识 比较费时费力。自RNAi 现象发现后，因其操作简单、 ...

4 产生RANi 的方法产生RANi 的方法主要有体外合成和体内合成siRNA 法。将siRNA 导入细胞的方法又分为微量注射法、电穿孔法、浸泡法、工程菌喂养法、转基因法和病毒感染法等。Harborth 等设计体外合成21nt siRNA 的方法是：在基因库中寻找靶向基因的mRNA 序列，并从起始密码后的第75 位碱基开始寻找AA + N19 + UU 序列或AA + N19 序列，其中N19 为 ...

对大部分实验人员来说，RNA 抽提比基因组 DNA 抽提要困难得多。事实上，现有的 RNA 抽提方法/试剂，如果用于从培养细胞中抽提 RNA，比抽提基因组 DNA 更方便，成功率也更高。那为什么同样的方法用于组织 RNA 的抽提，总会碰到问题呢？ 组织 RNA 抽提失败的两大现象是： RNA 降解和组织内杂质的残留。关于降解问题，首先看一下为什么从培养细胞中抽提 RNA 不容易降解。 ...

总RNA（total RNA）和信使RNA(mRNA)的抽提（自己的总结）1、实验目的提取人体细胞的总RNA和mRNA。 2、本实验所需试剂1）、CNE-2细胞及培养细胞的一系列条件，2）、PBS缓冲液， TRIZOL试剂，3）、DEPC处理过的水、大、中、小Tip及1.5 ml EP管4）、新的氯仿、异丙醇和乙醇，5）、mRNA分离试剂盒：Oligotex mRNA Mini KitCat.no ...

WHENVIRUSESINFECTEUKARYOTICCELLSdomly integrate into host genomes double-stranded RNA (dsRNA) is frequently produced from the invading genes either during viral replication or by aberWrant transcripti ...

Mammalian RNA InterferenceThomas TuschlLaboratory for RNA Molecular BiologyThe Rockefeller University New YorkExcerpted from RNAi: A Guide To Gene SilencingEdited by Gregory J. Hannon ABSTRACTA ser ...

近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一、RNAi的分子机制通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and ...

近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一、RNAi的分子机制通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and ...

RNAi target selection rules:Targeted regions on the cDNA sequence of a targeted gene should be located 50-100 nt downstream of the start codon (ATG). Search for sequence motif AA(N19)TT or NA(N21) or ...