PCR引物设计

1. 引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2. 引物长度一般在15~30碱基之间。 引物长度（primerlength）常用的是18~27 bp，但不应大于38，因为 ...

PCR的第一步就是引物设计。引物设计的好坏，直接影响了PCR的结果，因此这一步很关键。成功的PCR反应既要高效，又要特异性扩增产物。目前可以使用的引物设计软件很多，但仍有许多细节需要注意。 设计的目的是在两个目标间取得平衡：扩增特异性和扩增效率。引物分析软件将试图通过使用每一引物设计变化的预定值在这两个目标间取得平衡。设计引用有一些需要注意的基本原理： 1. 引物长度 一般引物长度 ...

PCR反应体系的寡聚核苷酸引物 PCR扩增要选择和设计适当的特异性引物。　　(一)引物设计的原则 　1.一般原则　　(1)引物长度应在15～30bp。其Tm=（G+C）×4+（A+T）×2，引物的有效长度Ln=2(G+C)+(A+T)； Ln38时最适延伸温度会超过Taq DNA聚合酶的最适温度74℃不能保证引物的特异性。　　(2)引物中碱基的分布应当是随机的避免一连串相同的碱基。3， ...

常用的细胞因子引物表细胞因子引物序列产物(bp)IL-1a5’ ATGGCCAAAGTTCGAGACATG3’ CTACGCCTGGTTTTCCAGTATCTGAAAGTCAGT816IL-1b5’ ATGGCAGAAGTACCTAAGCTC3’ TTAGGAAGACACAAATTGCATGGTGAACTCAGT810IL-25’ ATGTACAGGATGCAACTCCTG3’ TC ...

噬菌体展示抗体库构建目的基因的获得PCR引物的设计 利用PCR技术扩增抗体VH和VL基因所获得的产物需要满足以下两个要求：首先得到的产物必需是正确的目的基因要有可靠性；其次要获得尽可能多种类目的基因即有多样性。因此设计出合理的扩增引物十分重要。 哺乳动物功能性抗体基因是由种系基因在DNA水平上重排产生的。以小鼠的抗体重链为例VH基因由V、D、J三部分构成。在小鼠第12号染色体上大约 ...

一、设计原理 1、择合适的靶序列:设计引物之前，必须分析待测靶序列的性质，选择高度保守，碱基分布均匀的区域进行引物设计。 2、长度：一般来说，寡核苷酸引物长度为15～30bp. 3、 Tm值：引物的Tm值一般控制在55～60℃，尽可能保证上下游引物的Tm值一致，一般不超过2℃。若引物中的G+C含量相对偏低，则可以使引物长度稍长，而保证一定的退火温度。 4、(G+C)含量:有效引物中(G+C ...

引物（primers) 引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。 引物的重要性 在整个PCR体系中， 引物占有十分重要的地位。PCR的特异性要求引物与靶DNA特异结合，不与其他非目的DNA结合，PCR的灵敏性要求DNA聚合酶能对引物进行有效的延伸，可见引物设计好坏与PCR结果密切相关。 引物设计原则 引 ...

开始之前：其实非常简单，不需要你下载任何软件，但是你得有一台电脑能上网。当然，最重要的是，你要很清楚用于做引物的模板序列，至于怎么找模板序列，不再本贴的讨论范围。另外，要先对PCR目的序列的长度有个大致估计，好了，马上开始吧： 第一步：找到Primer3的站点。你不用记住这个站点，但是要记住“Primer3”这个词，然后打开GOOGLE首页，输入Primer3，跳出来的第一 ...

结合primer5和Oligo设计引物，步骤及心得