PCR引物设计

leileicui 如题，因为新手没有做过实验，所以请高手详细指点，如果有比较好的文章可以推荐给我，谢谢。为了方便讲解，以mir127为例，逐步讲解，谢谢leileicui 自己顶一下。freecell 这个你可以在google scholar里面搜索这个miRNA的qPCR引物，太多了。可以借鉴nature、science等文章中的引物和探针。其次可以自己设计，例如： http://www.exiqon.com/miRNA-qpcr-d ...

sophia1842 哪位好心人，能不能提供一下鼠源的SRY基因（Y染色体上的一个基因，可以区分性别），普通PCR的引物，我找了好几对都不行啊，感谢啊freecell 在google scholar内搜索nature、 cell上面的引物。sophia1842 我找的引物，基本都是08年以后，影响因子7以上的啊woxingwosu 呵呵，那是不是你的系统有问题呢？不可能这么多影响因子7以上的文章的引物都不行吧？本文由丁香园论坛提供，想 ...

琼琼qiongqiong 各位高人：大家好！我是新手，要开始做实验了，请问大家哈，葡萄糖转运蛋白-1的引物和探针要怎么设计啊？有知道的麻烦给我回复哦，急需，非常感谢！阿修罗axuro 先去NCBI里找到你要的基因核酸序列，然后用引物设计软件设计引物。弱弱的问一句：都没人带的么 ？琼琼qiongqiong 没人，就靠自己，好可怜的琼琼qiongqiong 忘记说了谢谢你啊本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫 ...

haina_w 想把卡那基因从pET8b上克隆下来用作其他基因的筛选标记，但是有点儿不明白怎么克隆，引物该从哪个地方开始设计~是从pET8b的图谱上指示的那个kan基因的起始开始吗，那启动子是包含在里面的吗？？doctoryubing 如果新载体上有启动子，应该不需要包含启动子，只需要在kan基因的两端设计引物即可j19s87x 楼上说的没错，但是新载体上要是能启动卡那的启动子！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有 ...

gaoxiaomeng :^)woxingwosu 基因是不是可以简单理解为从ATG到终止密码子为止？如果是这样，那就没有多少选择，直接就是Forward: ATGNNNNNNReverse: STOP CODON NNNNN (注意要互补的~~)zjubell woxingwosu wrote:基因是不是可以简单理解为从ATG到终止密码子为止？如果是这样，那就没有多少选择，直接就是Forward: ATGNNNNNNReverse: STOP CODON NNN ...

candyjiang 1.知道某启动子序列用什么方法将其克隆出来？2.将启动子碱基数太多，如何将其中某一段已知序列克隆？cedar1985 设计引物,PCRcandyjiang 序列太长了，有5000多个碱基，那我是要把我启动子的其中一段用PCR扩增出来？？模板从cDNA文库中调取？？我们自己实验室没有cDNA文库，找哪个公司做比较好（广州）thltyz 启动子没有在cDNA文库中，在genomic DNA中，用DNA为模板才能扩出来 ...

sfflpf 我想问一下大鼠与豚鼠的基因序列是否同源，研究某种物质的基因表达，对于这两种动物，可否共用一对引物？谢谢吴佰霖 具体基因具体分析,大鼠与豚鼠就像人与大猩猩一样zjubell sfflpf wrote:我想问一下大鼠与豚鼠的基因序列是否同源，研究某种物质的基因表达，对于这两种动物，可否共用一对引物？谢谢既有同源区，也会有不同源区。总体来说，很接近了。一般来说，维持功能的部分应该是比较保守的。因为不清楚你到底指哪个基因。 ...

华农病毒 朋友们：最近在研究HSP，想设计一些人源的HSP荧光定量引物，不知道从何下手！自己设计的引物各中条件还不确定，想找一些报道的，但是没有找到……希望高手指点交流下！非常感谢！ylhuang0502 LZ的查找方法可能不对，你可以用如下关键词"heat shock protein and real time pcr and human" 在google/scholar查（你可以选2005年以来的较新文献），下面的一篇文献是有关Hsp27， RT-qPCR的 ...

mnidr 我现在要做一个有9个基因的基因家族的northern杂交，看一下这些基因的表达情况。需要设计cDNA的引物去P出一段500bp左右的片段来进行探针标记，但是这9个基因的同源性太高了，只能在cDNA序列的两端找到一些非保守的区域，但是实验室的一个师兄说，cDNA两端是不能设计引物的，因为RNA的两端是“可变区”在这些可变区设计引物，做PCR可能会出不来结果，就是说网上查到的RNA序列两端的几十个碱基是 ...

mnidr 没做过，看了一些东西有点糊涂了，微卫星两端的序列是高度保守的才能根据它设计引物来P出不同大小的微卫星片段那么这个微卫星两端的序列是侧翼序列吗(UTR)？？？如果是的话，侧翼序列不是高度可变的吗，怎么又成了高度保守的呢？mnidr 自己顶下ffyy8888 晕死，SSR的高变异，多态性指的是核心重复序列的变异度高，其侧翼序列是保守的，这个是基本概念呀lmnsmu SSR两端的侧翼序列，是基因组DNA，往往是保守的；mn ...

PCR引物设计的11条黄金法则1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA ...

PCR 引物设计及软件使用技巧张新宇，朱有康，高燕宁（中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所，北京100021）摘要：本文旨在介绍使用软件设计PCR 引物的技巧。在PCR 引物设计原则的基础上，详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法，并对其各自的优缺点进行了比较。一般性引物自动搜索可采用“Premier Primer 5”软件，而引物的评价分析则可采用“Oligo 6”软件。关键词：PCR；引物设计中图分类号：Q524 文献标识码： 文章编 ...

Oligo使用方法介绍作为目前最好、最专业的引物设计软件，Oligo的功能很强，在这里我们介绍它的一些主要功能：如：普通引物对的搜索、测序引物的设计、杂交探针的设计以及评估引物对质量等等。在正式进行引物设计前，我们首先面临的一个任务就是向Oligo程序导入模板序列，根据不同的实验情况，导入模板有三种方法：1，直接用键盘输入：a，点击file菜单中的New Sequence 浮动命令，或直接点击工具栏中的New Sequenc ...

因为有热心战友的不断提问，“【心得】引物设计其实很简单，敢于尝试就会成功”就增加到三贴了，我把它们合并一下，方便战友指正吧！第一贴记得当时搞引物设计的时候，还是我的大师兄领入门的，在此谢过了。师兄教了一些基本原则后，就放羊了。接着自己捣鼓来捣鼓去，在导师的实验室内设计了十几条引物，用起来还蛮好的，逐渐赚了点名气。后来，就和上海鼎安合作了，帮别人设计引物在他们公司订购引物，拿点回扣。别人拿给我设计的引物，都是很头痛。因为客 ...

POST by Bingsen Xu前言：我是刚刚注册到丁香园，在PCR技术讨论版看见置顶贴，“请求助引物设计的战友先进来这里！”稍微浏览了一下，发现很多朋友对PCR引物设计还不是很熟悉，我愿意把自己积累的一点引物设计方面的经验和大家分享，希望不会做引物设计的朋友看完之后，可以不用再发求助贴而是自己动手做引物设计或者引物检验。开始之前：其实非常简单，不需要你下载任何软件，但是你得有一台电脑能上网。当然，最重要的是，你要很清楚 ...

我最近合成了几十对引物，，在实战中多多少少有些心得，拿出来给大家分享。我感觉想把引物合成的比较好，除了前引物和后引物的Tm不能相差太大，我们还要重点考虑以下因素：一、GC% GC含量对于PCR反应来说GC含量在40%—60%，一般50%左右比较合适；而对于测序引物和杂交探针来说GC含量至少应为50%。产物中GC含量最好大于引物中的GC含量。二、Degeneracy 多义性当设计多义引物时应尽量减少引物多义性，这样会带来更好的 ...

各位大侠好:我是这里的新成员,也是做PCR的新手,我想问一下,如果我知道了一个基因的全长,如何设计出合理的特异性很好的引物.我要做的是RT-PCR,现附上我所要用的基因全唱,不知道是不是需要.1 gaattccggc cgctggaatg ttgtgtgaac tttgctctcc gtctattctc tgatttgtca61 agaaaagcca atcaaccaat agctgaggag agaagagctg gacttctgat tctaggga ...

做了点甲基化研究，从头下来，也有一点点体会。也看了院子里不少牛人的新的体会。本人将每一个步骤的具体操作、每个操作的具体注意事项和心得进行初步总结，慢慢叙来，抛砖引玉，欢迎拍砖。做到现在，有成功的喜悦，也有失败痛苦，且行且歌，总得来说，BSP/MSP，想说爱你不容易。如有时间，想谈谈：BSP/MSP引物设计；基因组海量甲基化数据分析；MSP设计及操作；当前MSP的研究进展，等等吧……1.确定目的基因后，登陆一下网址：http:// ...

1.引物设计的原则http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=2316237&sty=3&keywords=%D2%FD%CE%EF%C9%E8%BC%C6http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=2316237&sty=3&keywords=%D2%FD%CE%EF%C9%E8%BC%C6（基因芯片引物设计）http://www.dxy.cn/bbs/post/view?b ...

基本知识http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=19789&sty=1&tpg=70&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=89547&sty=1&tpg=66&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=701942&sty=1&tpg=13&age=0关于如何计算引物和核酸浓度的方法http://www ...